血清酶类测定

血清酶类测定第一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一酶（enzyme）的本质：高度特异性、高度不稳定性，高效性、可调节性酶的应用：由活细胞产生的能高效催化特异生化反应的蛋白质，属于生物催化剂酶的特点：酶活性的检测、代谢物的酶学分析和同工酶及亚型测定用于临床诊断和疗效判断第二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一一、酶活性定义：酶活性（enzymeactivity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。表示方法：

或

式中v：反应速率，[P]：产物浓度，t：时间，[S]：底物浓度。第三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一二、酶活性单位与酶活性浓度（一）酶活性单位定义：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。表示方法：惯用单位（一定的反应量/一定的反应时间）国际单位IU（µmol/min）Katal单位（mol/s）第四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一1．惯用单位：20世纪60年代以前根据酶活性测定方法建立者的姓氏命名的单位ALP的金氏单位（King）氨基移转酶的卡门氏单位（Karmen）特点：各单位对温度、时间、物质量的定义不同，导致各测定值、参考范围相差很大，彼此间无法比较,现在临床应用较少。卡门氏单位：1.0ml血清在25℃，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.8210-4μmolNADH为一个卡门氏单位举例：金氏单位：100ml血清ALP在37℃与底物作用15min，产生1mg酚。第五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一2.国际单位IU（µmol/min）定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每min催化1µmol底物转变为产物的酶量，为1IU或1U，1IU=1µmol/min。IFCC,2001年37℃3．Katal单位定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的酶量。1Katal＝1mol/s。IU与Katal单位的关系：1katal=60×106IU，1IU=16.67nkatal第六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（二）酶活性浓度酶活性浓度指单位体积样本中的酶活性单位。国际单位用IU/L或U/L表示。酶活性浓度才具有临床可比性，但其多数情况下都被不严格地称为酶活性单位乃至酶活性.第七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一三、酶促反应进程以产物生成量（或反应物减少量）为纵坐标、反应时间为横坐标作图所得到的一条曲线，称为反应进程曲线（或反应时间曲线、速率曲线、时间曲线）t1t2时间t图5-1酶促反应进程曲线吸光度A延滞期线性期非线性期第八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（一）延滞期（lagphase、延迟期

）特点：为反应的初始阶段，反应速率一开始时较慢，通常为几秒到几分钟t1t2时间t图5-1酶促反应进程曲线吸光度A线性期非线性期R1R2延滞期孵育期延滞期第九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（二）线性期此阶段酶促反应速率基本保持恒定；对底物而言，为反应速率与底物浓度[S]的零次方成正比的零级反应，即不受底物浓度的影响，而只与酶活性浓度成正比；

此时底物的消耗量小于5%，反应速率为反应初速率。酶活性浓度越高，线性期就越短

线性度：判断线性期的一个指标，指吸光度（A）相对于时间（min）变化的可以接受的程度。线性度=［前半段△A/min－后半段△A/min］/［（前半段△A/min＋后半段△A/min）/2］×100％线性度值越小则线性越好。一般判断标准：不大于15％，否则判为非线性特点：可代表酶促反应速度第十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（三）非线性期（偏离线性期、平坦期）进入非线性期的原因：反应的不断进行，底物消耗越来越多，酶变性失活增加、可逆反应增强、产物抑制增加等使得反应速率明显下降。特点：若为单底物的反应，则此时反应速率与单底物浓度[S]的一次方成正比，为一级反应。第十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（一）酶促反应酶促反应式米氏方程：K4第十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（二）Km的含义与意义1．Km的含义:

当Km=[S]时，，可见Km值等于反应速率达到最大反应速率Vmax一半时的底物浓度。2．Km的意义Km是酶的一个特征性常数（其他如等电点），Km的大小只与酶的性质有关反映酶对底物亲和力的大小选择酶的最适底物或天然底物计算不同底物浓度时的反应程度鉴别酶的种类判断可逆反应的速率判断酶偶联反应的限速反应计算工具酶的用量第十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（三）Vmax的含义定义：Vmax表示在一定酶量时的最大反应速率，即酶完全被底物所饱和时的反应速率，与酶活性浓度呈正比。应用：计算酶的转换数（TN，催化常数Kcat）单位时间内每个酶分子将底物分子转换成产物的最大值。计算公式为：

(单位是s-1)计算时要保证酶的浓度单位与底物的浓度单位一致）第十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第三节酶活性的测定测定方法分类：

按照仪器检测方法分类：分光光度法、浊度法、荧光法、放射性核素法、电位滴定法、电极法、量气法。按照反应时间分类；分为定时法、连续监测法和平衡法。按照检测对象分类：分为直接法和间接法。第十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一一、按照反应时间分类的酶活性测定方法（一）定时法原理：定时法是固定时间法的简称，是指测定反应开始后一段时间（t1～t2）产物的增加量或底物的减少量以测定酶活性的方法。该方法一般需要在反应进行到一定时间后用强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止反应。特点：优点：简单，因为最后测定时酶促反应已被终止，故比色时不需要保温设备，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。缺点：如果不做预试验则无法了解其酶促反应进程（t1-t2）是否为零级反应，故难以确保测定结果的准确性。吸光度At1t2

时间t图5-6定时法的三种反应进程231定时法与两点法、终点法的区别第十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（二）连续监测法原理：连续监测法是指在多个时间点连续测定产物（或底物）在线性期内的生成量（或消耗量）即零级反应速率以测定酶活性的方法，又称速率法、零级反应速率法、斜率法。该方法是在一定的反应时间区段内（至少9～120s）每隔一定时间（常为2～30s）读取一次吸光度值，连续测定多点（至少4点），然后对吸光度数据作最小二乘法处理，再用线性期内的数据计算单位时间内的反应速率△A/min，最后据式计算出酶活性。第十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第一节概述第十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血浆特异酶

在血浆中发挥特定的催化作用的酶称为血浆特异性酶，亦称血浆功能性酶。多数由肝脏合成并以酶原形式分泌入血，在一定条件下被激活起作用。与凝血有关的酶或酶原：ChE、铜蓝蛋白及脂蛋白脂肪酶等。外分泌酶

由外分泌腺合成并分泌进入血浆的酶称外分泌酶,参与食物的消化过程，正常血液中含量很少。包括P-AMY、胰脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等。

细胞酶

存在于细胞内进行物质代谢的酶。随着细胞的不断更新或破坏可少量释入血液。当其大量出现于血清中时，提示酶的来源组织细胞受损，最常用于临床诊断。一、血清酶的来源

第二十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一二、酶活性测定在临床诊断中的应用

由于酶广泛分布于全身各器官、组织，所以酶活性的测定用于消化系统、心血管、骨骼、肌肉、肾等器官和组织的疾病与恶性肿瘤的诊断。第二十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（一）在诊断肝胆疾病中的应用肝是机体新陈代谢最活跃的器官，这是由于肝细胞中含有最丰富的酶类。

肝酶谱：AST、ALT、GGT、ALP、TP、ALB、GLB、

TBILI、DBILI、IBILI、CHE主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、肝内外胆汁淤积等肝胆疾病。ALT被认为是肝细胞损伤最敏感的指标之一。CHE在急性肝炎、肝硬化、农药中毒时，可降至正常30%~50%。GGT、ALP等酶主要用于胆道疾病特别是胆道梗阻时的临床诊断。单胺氧化酶（MAO）是结缔组织中的酶类，其活性测定可用于肝纤维化程度的判断。第二十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（二）在诊断心肌梗死中的应用用于诊断心肌梗死的血清酶主要有AST、LDH、CK、CK-MB和α-HBD。AST广泛分布于机体各组织中，但在心肌中含量最多。LDH是低度特异性酶，LDH1在心肌中含量最高，

LDH2酶活性>LDH1

当心肌梗死时，LDH1>>LDH2CK-MB在诊断心肌梗死最佳的血清酶指标。当心肌梗死时，CK-MB可增高10~25倍。m-AST（线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶）与心肌梗死并发心力衰竭的发病率和死亡率有正比关系。第二十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（三）在诊断胰腺疾病中的应用用于急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断的酶有AMY及其同工酶、LPS(脂肪酶)等。均来自胰腺泡的分泌。AMY

在急性胰腺炎时，显著升高。注意：伴有高血脂的急性胰腺炎和静止性胰腺炎时，AMY

活性正常。LPS在诊断胰腺炎特异性较高，但尿液中检测不到LPS。第二十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（四）在诊断骨骼疾病中的应用ALP

是各种骨骼疾病最重要的酶学诊断指标

当发生骨骼肌疾病时，特别是成骨肉瘤、畸形骨炎，可分别增至正常的45倍与30倍。第二十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（五）在诊断前列腺疾病中的应用ACP(碱性磷酸酶)用于诊断前列腺疾病，特别是诊断前列腺癌的最重要指标。主要分布于前列腺、红细胞、血小板等，成年男子血清中

1/3~1/2的ACP来自于前列腺。第二十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一（六）在诊断肿瘤中的应用具有器官特异性的有ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、γ-GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS等；非器官特异性的有ALT、CK同工酶、ALD同工酶、LD同工酶等。在肿瘤发生、发展及组织癌变过程中，与细胞正常分化、增殖功能有关的酶或同工酶活性下降，并出现肿瘤组织中的同工酶升高。第二十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清酶的生理变异

1.性别少数酶如CK、ALP及GGT等有性别差异，与血清酶的来源组织有关。2.年龄血清酶的活性随年龄而变化，ALP和GGT到老年时可有轻度升高。年龄差异也见于同工酶。3.进食过量饮酒可使血清GGT明显升高。4.运动多种血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT等，其升高的幅度与运动量、持续时间、运动频率及骨骼肌所含的酶量有关。5.妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、LDH、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶活性升高。6.其他一些酶活性与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变化及家庭因素有关。第二十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一酶的区域化分布血清酶符号来源丙氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶肌酸激酶乳酸脱氢酶碱性磷酸酶酸性磷酸酶-谷氨酰转移酶5-核苷酸酶单胺氧化酶-淀粉酶脂肪酶谷氨酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶胆碱酯酶山梨醇脱氢酶鸟氨酸氨基甲酰转移酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶ALTASTCKLDHALPACP-GT或GGT5-NTMAOAMS或AMYLPSGLDHICDCHESDHOCTLCAT肝、肾、心心、肝、骨骼肌骨骼肌、心、脑心、肾、骨骼肌、肝、肺小肠、胎盘、肝、肾前列腺、红细胞、血小板肝、胆、肾、小肠肝、胆道肝、肾、脑胰、唾液腺胰肝肝、胎盘、心肝肝肝肝第二十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第二节临床常用血清酶活性测定第三十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一标本（血清或血浆）临床酶学测定酶之前，标本还要经过采集、分离和储存等一系列处理过程。而酶在血中处于一个动态变化过程，血液离开机体后还会有一定变化。因此在其中任何一个阶段处理不当，都有可能引起测定值的变化。第三十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一标本应避免溶血：大多数酶在血细胞中的含量比在血浆中高得多

，少量血细胞的破坏就可能引起血浆中酶明显升高。如红细胞内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高150、15和7倍左右，故测定这些酶时，样品应避免溶血。及时分离血清（血浆）：静脉采血后，必须在1-2h内及时离心，将血清与血细胞、血凝块分离，以免血细胞中的酶通过细胞膜进入血清而引起误差。第三十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一尽量用血清标本：

大多数抗凝剂都在一定程度上影响酶活性，临床上除非测定与凝血或纤溶有关的酶，一般都应以血清作为首选测定标本。

及时测定，如不能及时测定，应放入冰箱保存（但有些标本不能冷冻）

为防止酶蛋白变性，一般至少应在血清分离后的当天进行测定，否则应放冰箱冷藏

有些酶如LD及其同工酶(LD4和LD5)在低温(特别是20℃冰冻)可引起不可逆性失活，反而不如室温稳定（“冷变性”）。第三十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第二节、氨基转移酶活性测定氨基转移酶又称转氨酶，在机体内多达60余种，广泛存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。其中以丙氨酸氨基转移酶(ALT或GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST或GOT)两种最为重要，它们催化机体内氨基酸的转氨基反应：

ALTL-丙氨酸

+α-酮戊二酸↔丙酮酸

+L-谷氨酸

ASTL-天门冬氨酸

+α-酮戊二酸↔草酰乙酸

+L-谷氨酸

A-NH2+BA+B-NH2转氨酶第三十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一1.赖氏比色法选择在500-520nm处检测，丙酮酸苯腙的显色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍必须降低底物α-酮戊二酸及2,4-二硝基苯肼的浓度ALT测定不是在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系(这是赖氏法的最大缺陷)，其标准曲线不呈直线而为抛物线。2,4-二硝基苯肼丙酮酸苯腙(在碱性条件下呈红棕色)α-酮戊二酸苯腙(在碱性条件下呈红棕色)丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸ALT37°pH7.4丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定第三十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一试剂与器材1、0.1mol/L磷酸氢二钠溶液2、0.1mol/L磷酸二氢钾溶液3、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.4）4、底物缓冲液5、1.0mmol/L2，4-二硝基苯肼溶液6、0.4mol/L氢氧化钠溶液7、2mmol/L丙酮酸标准液8、器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、分光光度计、坐标纸。第三十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实践步骤加入物（ml）测定管对照管

血清0.10.1

底物缓冲液0.5-

混匀，在37℃恒温水浴箱中保温30min2，4-二硝基苯肼溶液0.50.5底物缓冲液-0.5混匀后，置37℃水浴保温20min，每管加入0.4mol/LNaOH5.0ml，混匀，室温放置5min，用分光光度计在波长505nm处，以蒸馏水调零，读取各管吸光度。

第三十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一参考范围：5-25卡门单位注意事项1.血清ALT在室温（25℃）可以保存2d，在4℃冰箱可保存2周，在-20℃可保存1个月。2.严重脂血、黄疸、溶血血清可增加测定的吸光度。3.糖尿病酮症酸中毒病人血中因含有大量酮体，能与2，4-二硝基苯肼溶液作用呈色，引起吸光度增加，因此，此类标本应做对照管。第三十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一方法评价操作简便，不需要紫外分光光度计，易于普及，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正，使其结果与速率法较为一致，能较好反映酶的真实活性。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。不适用自动分析仪；试剂稳定性差，底物缓冲液不易保存(易长菌)；由于赖氏法必须降低底物α-酮戊二酸及2，4-二硝基苯肼的浓度，造成ALT测定不是在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系，这是赖氏法的最大缺陷。第三十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一(二)速率法转氨酶的测定多用比色法，以赖氏法最常用。目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。ALT速率法测定中酶偶联反应式为：

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸L-谷氨酸+L-丙酮酸

LD丙酮酸+NADH+H+L-乳酸+NAD+上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在340nm检测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A／min)，计算出ALT的活性浓度。第四十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]速率法：男性：5～40U/L女性：5～35U/L

第四十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一ALT广泛分布于全身各组织器官，尤以肝细胞中含量最多，其次是肾脏、心脏及骨骼肌，通常只有极少量释放入血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时，细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清中该酶活力显著增高。[临床意义](1)肝胆疾病：急性病毒性肝炎、慢性活动型肝炎、脂肪肝、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、胆结石、胆管炎和胆囊炎等。(2)心血管疾病：急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、脑出血等。(3)骨骼肌疾病：多发性肌炎、进行性肌营养不良等。（4）一些药物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、异菸肼、苯巴比妥、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等

第四十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一ALT在肝脏疾病中的应用价值ALT急性明显升高，常达200U以上，病情较重者可达400-600U以上，甚至更高，个别重型病人甚至可超过1000U。ALT越高，肝脏细胞损害越严重。慢性活动性肝炎：ALT持续轻度升高几十或100U以上（100～200U）慢性肝炎急性肝炎重型肝炎由于肝细胞发生大量变性，坏死，使ALT大量进入血液，因此，ALT迅速升高，高达数百～1000U以上，如果ALT含量越高，上升越快，说明肝细胞坏死严重，病情进展也越快。当病情发展到一定的严重程度，肝细胞大量坏死，肝脏生产ALT的能力丧失，这时血液中的ALT降低，但是黄疸却持续升高（胆红素上升），这种现象即所谓“酶胆分离”，往往提示病情正在恶化，常是肝坏死征兆。第四十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一ALT增高程度与肝硬化的活动度和肝组织炎症改变及肝细胞损害程度相一致。对ALT进行监测有助于对肝硬化病情的判断。若是静止性肝硬化，则ALT维持正常；肝硬化病人的转氨酶出现较大幅度的升高，提示病情可能发展成活动性，须引起警惕。肝硬化肝癌80%—90%肝细胞都是在肝硬化基础上发生的，因此，在早期，ALT是否增高主要决定于肝硬化的活动程度。若是静止性肝硬化，则ALT维持正常，因为肝细胞发生癌变时，细胞并没有坏死破坏，ALT没有释放出来，因此，ALT没有升高，或ALT有轻度或中度增高。第四十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性测定[测定方法]一、速率法（连续监测法）NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－△A/min）计算AST活性参考方法第四十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一

ASTL-天门冬氨酸+α-酮戊二酸↔草酰乙酸+L-谷氨酸自发↓脱羧丙酮酸（二）赖氏比色法第四十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]赖氏比色法：

8～28卡门单位（反应温度为37℃）速率法：8～40U/L（反应温度为37℃，试剂不含P5P）

第四十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[临床意义]1.AST广泛分布于全身各组织器官，在心肌细胞内含量最多，当心肌梗死时，血清中AST活力增高，在发病后6～12h之内显著增高，在48h达到高峰，约在3～5d恢复正常。2.血清中的AST也可来源于肝细胞，各种肝病可引起血清AST的升高，有时可达1200卡门单位，中毒性肝炎还可更高。3.肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST的轻度增高。第四十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一AST/ALT比值大小有助于临床判断肝病严重程度急性肝炎的AST/ALT均值为0.56:1肝硬化的AST/ALT均值为1.13：1肝癌组AST/ALT均值为2.41：1急性肝坏死组AST/ALT均值为3.61：1肝细胞中的总含量：AST（主要存在于肝细胞线粒体内）＞ALT（主要存在于肝细胞胞浆内）肝细胞轻度损伤时主要是胞浆酶释放出来，血清中ALT＞AST；而肝细胞重度损伤时胞浆酶、线粒体酶均释放出来，血清中AST＞＞ALT；随着肝病由轻变重，AST/ALT的比值就由＜1变为＞1第四十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第三节血清r-谷氨酰基转移酶测定第五十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清-谷氨酰转移酶（GGT）活性测定

GGT是催化-谷氨酰基移换反应的一种酶GGT分布于肾、胰、肺、肝、肠和前列腺等多种组织中，其中以肾脏含量最多。

GGT在肝脏中广泛分布于肝细胞的毛细胆管一侧和整个胆管系统，因此当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高。

第五十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一以γ-谷氨酰α-萘胺作为γ-谷氨酰基的供体，双甘肽作为受体，在GGT作用下，产生α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色α-萘胺-对-偶氮苯磺酸，其色泽的深浅与GGT活力成正比。一、重氮反应比色法原理第五十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一试剂与器材1.150mmol/L双甘肽溶液2.1mol/LHCL3.底物缓冲液4.2g/L对氨基苯磺酸醋酸溶液5.1.0g/L亚硝酸钠溶液6.显色剂7.1.5mmol/La-萘胺标准贮存液8.0.15mmol/La-萘胺标准应用液9.器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、分光光度计、坐标纸。第五十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实践步骤加入物（ml）测定管对照管

血清0.05-

底物缓冲液0.50.5

混匀，在37℃恒温水浴箱中保温15min显色剂0.50.5血清-0.05混匀后，置37℃水浴保温10min，用分光光度计在波长530nm处，以对照管调零，读取各管吸光度。

第五十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一参考范围：成年男性3~17U/L

成年女性2~13U/L第五十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[测定方法]一、速率法以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物，双甘肽为谷氨酰基的受体，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性单位原理第五十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一参考范围：成年男性11~50U/L

成年女性7~32U/L第五十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一注意事项溶血标本，>500mg/L以上可使活性减低，黄疸及脂血标本不干扰本法测定结果。血清中GGT的活性，在室温或4℃可稳定7天，在冷冻状态下可稳定2个月。第五十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一生物化学特征

γ－谷氨酰转移酶(γ-GT或GGT)又称γ-谷氨酰转肽酶，是一种线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。γ-GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。胆道疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时，γ-GT不仅阳性率高，而且升高明显。γ-GT还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移，肿瘤患者如有γ-GT的升高，常说明有肝转移。

γ-GT与乙醇的摄取量有关，饮酒时，由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致γ-GT活性升高，故对乙醇性中毒的判定有相当的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有γ-GT升高。第五十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第四节血清（尿）淀粉酶测定第六十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清淀粉酶（AMS/AMY）活性测定人和动物只含α-AMY，此酶以Ca2+为必需因子（除肝素外，各种抗凝剂可通过螯合Ca2+

抑制AMS活性，故标本必须用血清或肝素抗凝血浆）.血清中的AMS主要有胰型(P型)和唾液型(S型)及其亚型同工酶组成人体中胰腺含AMY最多，唾液腺也分泌大量AMY。

AMY分子量较小，易由肾脏排出，半寿期很短（约2h），所以病变时血清AMY增高持续时间很短。第六十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[测定方法]天然淀粉底物方法：（分子组成）确定底物方法：碘-淀粉比色法

目前应用最多的方法是以人工合成的麦芽多糖为底物的方法第六十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一二、碘-淀粉比色法原理α-淀粉酶淀粉葡萄糖+麦芽糖+糊精+碘液兰色复合物血清(尿)中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4-糖苷键，水解产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1，6-糖苷键支链的糊精。在底物充分（已知浓度）的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管(此处亦相当于标准管)比较，从而推算出AMS的活力单位。第六十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一试剂与器材1.0.4g/L缓冲淀粉溶液2.0.1mol/L碘贮存液3.0.01mol/L碘应用液4.器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、定时钟、分光光度计。第六十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实践步骤先用生理盐水将血清作10倍稀释（尿液20倍稀释）加入物（ml）测定管对照管缓冲淀粉溶液(37℃预温5min)1.01.0稀释血清(稀释尿液）0.2-

混匀，在37℃恒温水浴箱中保温7.5min碘应用液1.01.0蒸馏水6.06.2混匀后，用分光光度计在波长660nm处，以蒸馏水调零，读取各管吸光度。

第六十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一成本低、检测不需要昂贵仪器、试剂稳定、操作简便；但重复性差、准确率低方法评价：第六十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]碘-淀粉比色法：第六十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[临床意义]血清(尿)AMS活性是诊断胰腺疾病的重要指标。

升高

——急性胰腺炎、流行性腮腺炎；

——急性胆囊炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石症、溃疡病穿孔及吗啡注射后。降低

——肝炎、肝硬化、肝癌；

——肾功能障碍。第六十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一急性胰腺炎时血、尿淀粉酶升高的不同表现开始升高时间高峰时间恢复时间血清8-12h12-24h2-5d尿液12-24h5-7d1-2w第六十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第五节血清碱性磷酸酶测定第七十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清碱性磷酸酶（ALP）活性测定

ALP广泛分布定位于细胞膜表面，其含量依次为肝、肾、胎盘、小肠、骨骼等。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼，主要用于诊断肝胆和骨骼疾病第七十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一一、比色法原理在pHl0的碱性条件下，ALP催化磷酸苯二钠底物水解，生成游离的酚和磷酸氢二钠。酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌类衍生物，根据红色深浅计算出ALP活力的大小。第七十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一试剂与器材1.0.1mol/L碳酸盐缓冲液2.20mmol/L磷酸苯二钠溶液3.铁氰化钾溶液4.酚标准贮存液5.酚标准应用液6.器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、定时钟、分光光度计。第七十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实践步骤加入物（ml）测定管对照管

血清0.1-

碳酸盐缓冲液1.01.0

混匀，在37℃恒温水浴箱中保温5min底物液（预温至37℃）1.01.0混匀，在37℃恒温水浴箱中保温15min铁氰化钾溶液显色剂3.03.0血清-0.1混匀后，用分光光度计在波长510nm处，读取各管吸光度。

第七十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一1.血清标本应新鲜，置室温(25℃)6h测定，ALP活性约增高1

％；置室温1～4d，ALP活性增高3％～6％；若冰冻保存，血清复溶后ALP活性升高可达30％。2．一般用血清与肝素抗凝血浆测定ALP活性。抗凝剂如EDTA-

Na2、草酸盐、柠檬酸盐等因能络合Mg2+而抑制ALP活性，故不能使用这类抗凝剂的血浆做于ALP活性测定。3．ALP测定受年龄与性别、饮食、运动和妊娠等因素的影响。

注意事项第七十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[测定方法]二、速率法原理以对-硝基苯酚磷酸钠（PNPP）为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇AMP或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体。在碱性条件下，ALP催化PNPP水解释放出磷酸基团，生成游离对-硝基酚（PNP），PNP在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出血清ALP活性单位。第七十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]金氏比色法：成人：3～13金氏单位，儿童：5～28金氏单位速率法：女性：1～12岁<500U/L

>15岁40～150U/L

男性：1～12岁<500U/L12～15岁<750U/L>25岁40～150U/L。

第七十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一ALP检测主要用于诊断肝胆和骨骼疾病[临床意义](1)肝胆系统疾病：各种肝内、外胆管阻塞引起的胆汁淤积性疾病：ALP明显升高，且ALP升高与血清胆红素升高相平行，肝内局限性胆道阻塞（如肝癌、肝脓肿）：ALP明显增高，血清胆红素大多正常。

累及肝实质细胞的肝胆疾病（肝炎、肝硬化）：ALP轻度升高。(2)骨骼疾病：（3）妊娠后期及儿童生长期ALP生理性增高由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的ALP释放入血液中，引起血清ALP活力的增高。如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。第七十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第六节血清乳酸脱氢酶测定第七十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一LD是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于人体各组织中，以骨骼肌、肝、心肌、肾含量较多，其次是脾、胰及肺组织中。组织中LDH活力约比血清高1000倍，红细胞内LDH活力较血清约高100倍（溶血可引起LDH明显升高）。LDH有5种同工酶。第八十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定乳酸脱氢酶(LD或LDH)催化乳酸氧化成丙酮酸，同时将氢转移给辅酶NAD+而成为NADH。

L-乳酸+NAD+

丙酮酸+NADH+H+(氧化型辅酶1)(还原型辅酶1)pH8.8～9.8pH7.4～7.8第八十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一乳酸脱氢酶在有辅酶I(NAD+)存在的情况下，催化乳酸脱氢生成丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕红色。其颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，同样处理丙酮酸标准液进行比色，即可求得LDH的活力单位。反应式如下：一、比色法原理

LDH乳酸+NAD+

丙酮酸+NADH+H+丙酮酸+2，4-二硝基苯肼丙酮酸-二硝基苯腙

+H2ONaOH第八十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一试剂与器材1.底物缓冲液2.11.3mmol/LNAD+

溶液3.1mmol/L

2，4-二硝基苯肼4.0.4mol/LNaOH5.0.5mmol/L丙酮酸标准液6.器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、分光光度计、坐标纸。第八十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实践步骤加入物（ml）测定管对照管

血清0.01

0.01

底物缓冲液0.5

0.5

混匀，在37℃恒温水浴箱中保温5minNAD+

溶液0.1

-混匀，在37℃恒温水浴箱中保温15min2，4-二硝基苯肼0.5

0.5NAD+

溶液-0.1混匀，在37℃恒温水浴箱中保温15minNaOH溶液5.05.0混匀后，用分光光度计在波长440nm处，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。

第八十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一二、乳酸为底物的速率法（LD-L法）原理第八十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]速率法：109～245U／L比色法：190～437金氏单位第八十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一注意事项1.用血清或肝素抗凝血浆测定LDH活性的效果令人满意，草酸盐抗凝剂对LDH活性有抑制作用。标本应严格避免溶血。2.LDH4、LDH5对冷特别不稳定(冷变性)，其活性在-20℃过夜就丧失，故标本不宜冰箱存放。血清标本室温存放可稳定2~3d。第八十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[临床意义]LDH测定常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。LDH与CK-MB、AST联合可判定心肌梗死的病程。正常情况下，新生儿LDH含量较高，约为成人2倍，随着年龄增长逐渐降低，至14岁时趋于稳定。第八十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一LDH是由H（心型）和M型（肌型）两种不同亚基组成的四聚体，形成5种结构不同的同工酶。按电泳速度命名。临床意义心肌，肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多肺，脾，胰，甲状腺，肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多第八十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一LDH活力增高主要见于以下疾病：1．心血管疾病

LDH由于分子量较大，在常用心肌酶中升高最迟心肌梗死患者在发生胸痛后8～12hLDH开始升高24～48h达高峰升高水平通常为正常的3～4倍，最高可达10倍。LDH中度升高见于心肌炎，伴有肝淤血的心衰，重度休克及缺氧。2．肝病伴有黄疸的中毒性肝炎患者，LDH可达正常10倍。LDH升高亦可见于病毒性肝炎、传染性单核细胞增多症、肝硬化等。3．恶性肿瘤

70％有肝转移的肿瘤患者及20％～60％无肝转移的肿瘤患者有LDH水平升高。霍奇金病、腹部及肺部肿瘤、胚胎细胞肿瘤、白血病等亦有LDH升高。4．其它疾病溶血性疾病、肾病、进行性肌营养不良、肺栓塞亦伴有LDH升高。第九十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第七节血清肌酸激酶测定第九十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清肌酸激酶（CK）活性测定肌酸激酶(CK)催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间的磷酸转移的可逆性反应，反应平衡点与体系pH有关。

pH9.0Cr+ATPCrP+ADP

pH6.7(肌酸)(磷酸肌酸)CK广泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑。肝.红细胞含有微量或不含CK，轻度溶血不影响结果。

第九十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[测定方法]测定方法有比色法（如肌酸显色法）、速率法(酶偶联法)和荧光分析法。其中以速率法最常用，有两种工具酶及指示酶参与反应。IFCC测定CK的参考方法为速率法(酶偶联法)

。

第九十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清肌酸激酶（CK）活性测定在肌酸激酶的催化下，磷酸肌酸与ADP反应生成肌酸和ATP，肌酸与双乙酰、α-萘酚结合生成红色化合物。这种红色化合物在一定范围内与肌酸量呈线性关系，在540nm波长处与同法处理的肌酸标准液比色，求得血清CK的活性。

pH6.7CrP+ADP

Cr+ATP

(磷酸肌酸)

(肌酸)第九十四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一【试剂与仪器】

1．Tris-HCl缓冲液(pH7．4)2．12mmol／L磷酸肌酸溶液3．4mmol／LADP溶液4．混合底物溶液5.50g／L硫酸锌溶液6.60/L氢氧化钡溶液7．贮存碱液8．α-萘酚溶液9．双乙酰溶液10．1.7mmol／L肌酸标准液11.器材试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、定时钟、分光光度计。第九十五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一实验步骤加入物(m1)空白管标准管测定管血清一一0.1

肌酸标准液一0．1一蒸馏水0．1一一混合底物液0．750．750．75

混匀，37℃水浴30分钟氢氧化钡溶液0．50．50．5

硫酸锌溶液0．50．50．5

蒸馏水0．50．50．5

充分振荡，混匀后离心(2000r／min)10分钟，取上清液上述上清液0．50．50．5a一萘酚溶液1．01．01．0

双乙酰溶液0．50．50．5

混匀，37℃水浴15~20分钟蒸馏水2．52．52．5

混匀，在540nm波长处，以空白管调零，分别测定吸光度值。

第九十六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一参考范围8~60U/L第九十七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一二、速率法(酶偶联法)可在340nm波长下测定NADPH生成速率而计算CK活性浓度。第九十八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[临床意义]骨骼肌中CK含量较高，在各种类型的进行性肌萎缩时CK活性均可增高。临床上主要用于诊断心肌梗死。急性心肌梗死后3～6h就开始急剧升高20～30h达高峰可高达正常上限的10～12倍CK对诊断心肌梗死较AST、LDH的特异性高但此酶增高持续时间短，在2～4d后就恢复正常病毒性心肌炎时，CK活力也明显升高，对诊断及判断预后有参考价值。CK总酶与CK同工酶联合测定可判定CK的来源。CK、AST、LDH联合测定有助于判定心肌梗死的病程。第九十九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一第八节血清同工酶测定第一百页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一临床上常进行的同工酶测定有LDH、CK、AST、GGT、AMS等。LDH同工酶主要用于心肌梗死、肝病、恶性肿瘤和贫血的诊断。CK同工酶用于心肌梗死早期诊断、神经肌肉系统疾病。AST同工酶用来判断细胞损伤程度ALP同工酶用于诊断肝胆系统疾病和恶性肿瘤GGT同工酶用于诊断原发性及继发性肝癌AMS同工酶有助于提高急性胰腺炎诊断的敏感性和特异性测定。第一百零一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一

同工酶测定的常用方法主要有电泳法、层析法、动力学法、免疫化学法等。本章主要介绍心肌酶谱中的LDH、CK、AST三种同工酶测定。第一百零二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一LDH是由H（心型）和M型（肌型）两种不同亚基组成的四聚体，形成5种结构不同的同工酶。按电泳速度命名。血清乳酸脱氢酶同工酶测定心肌，肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多肺，脾，胰，甲状腺，肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多第一百零三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[测定方法]测定LDH同工酶的方法主要有5类：①电泳法；②离子交换柱层析法；③免疫学法；④抑制剂法；⑤酶水解法等。其中电泳法为应用最早且目前应用最广泛的方法，在电泳法中有琼脂糖电泳法、乙酸纤维素膜电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳和全自动电泳（也是一种琼脂糖电泳）等。+LDH1LDH2LDH3LDH4LDH5第一百零四页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一正常人体组织中LDH同工酶的组成及相对含量同工酶及亚基组成心肌肝骨骼肌红细胞

LDH1(H4)602442LDH2(H3M)336744LDH3(H2M2)7151710LDH4(HM3)<113164LDH5(M4)<16456<1第一百零五页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一参考范围琼脂糖电泳法：

LDH1（28.4±5.3）%；

LDH2（41.0±5.0）%；

LDH3（19.0±4.0）%；

LDH4（6.6±3.5）%；

LDH5（4.6±3.0）%。

醋酸纤维素薄膜法：

LDH1（25.32±2.62）%

LDH2（34.36±1.57）%

LDH3（21.86±1.38）%

LDH4（11.3±1.84）%

LDH5（7.97±1.59）%第一百零六页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一临床上测定LD同工酶有助于相应组织病变的诊断。[临床意义]第一百零七页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[参考区间]健康成年人血清中LD同工酶存在如下规律：LD2>LDl>LD3>LD4>LD5部分正常儿童血中可见LDl>LD2。第一百零八页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一心肌梗死和心肌炎：以LD1和LD2升高为主，即所谓“反转比率”现象，且持续的时间长，故为诊断AMI的一个特异指标。骨骼肌和肝细胞损伤：LDH5增高且LDH5＞LDH4，是诊断肝细胞坏死的敏感指标。其它：肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时LD2、LD3、LD4升高；溶血性疾病时LD1和LD2升高，但仍为LD2>LD1；恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有LD4、LD5升高。第一百零九页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一血清肌酸激酶同工酶测定在细胞质有三种同工酶：

CK-BB（CK-1）脑型同工酶脑、前列腺、肠、肺、膀胱、子宫、胎盘及甲状腺占优势，正常血清CK-BB含量极少，用一般方法测不出。

CK-MB（CK-2）心型同工酶主要分布于心肌中，正常血清含有少量的CK-MB，不超过总活性的5%。

CK-MM（CK-3）肌型同工酶（氧化型\中间型\还原型）（CK-MB1\CK-MB2）（CK-MM1\CK-MM2\CK-MM3）骨骼肌及心肌占优势，正常血清绝大部分为CK-MM的活性肌酸激酶（CK）分子是由M亚基和B亚基组成的二聚体。在细胞线粒体内的另一种同工酶：CK-Mt（CK-4）CK-Mt存在于细胞的线粒体膜上，在正常血清中CK-Mt是不出现的。当线粒体崩解时，线粒体膜的小碎片进入血液，故CK-Mt成低聚状态。第一百一十页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一CK同工酶亚型（CK-MM亚型和CK-MB亚型）多用琼脂糖凝胶高压电泳、离子交换层析法、免疫抑制法和放射免疫法。[测定方法]第一百一十一页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一免疫抑制法测定CK-MB亚型原理：用羊抗CK-M抗体与病人血清共同温育，血清中的CK-M亚基全部被抑制，测定剩余的非CK-M活性，即代表CK-BB和CK-MB中的B亚基及CK-Mt活性。由于健康人和心脏、肌肉疾患病人血清中CK-BB和CK-Mt量极低，故一般忽略不计，这些样品中的非CK-M活性实际上代表CK-MB中的B亚基活性，乘以2即为CK-MB活性。第一百一十二页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一[临床意义]不同组织受损、坏死，血清中就有不同的CK同工酶增高

血清中CK-MB升高是公认的诊断AMI和确定有无心肌坏死的重要指标此同工酶对心肌梗死的特异性可高达100％。CK-MB的特异性超过了AST、LDH、CK，甚至超过LDH1。急性心肌梗死发病2～4h后，血清CK-MB即开始上升

12～24h达到峰值如无并发症3d后恢复至正常水平。若下降后的CK-MB再度上升，提示有心肌梗死复发。第一百一十三页，共一百二十九页，编辑于2023年，星期一

CK亚型测定在早期诊