心脑血管药理、食管癌放疗增敏研究 mnsod基因单核苷酸多态性与食管癌放疗敏感性

MnSOD基因单核苷酸多态性与

食管癌放疗敏感性的关系河北医科大学第四医院放疗科王雅棣程云杰刘青2009.11.21研究背景锰超氧化物歧化酶（

MnSOD）存在于线粒体中，可使细胞代谢过程中产生的超氧阴离子（O2-.）转化为H2O2，H2O2又在谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和过氧化氢酶（CAT）两酶的作用下，生成水和氧，使细胞无毒化，是体内重要的抗氧化物质。MnSOD的作用机制

O2-.H2O2H2O＋O2

MnSODGPxCAT研究背景MnSOD与放射敏感性放射治疗直接作用：放射线损伤DNA细胞死亡MnSOD间接作用：

H2OO2-·、·OH和H·自由基与生物大分子相互作用，形成不可逆损伤放射线研究背景MnSOD对放射敏感性的影响中国仓鼠卵巢细胞系造血干细胞32Dcl3细胞系MnSOD↑放射敏感性↓新型抑癌基因

胃癌、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中存在MnSOD低表达或不表达

MnSOD高表达使细胞转移能力和肿瘤形成能力降低MnSOD的相关性研究研究背景

染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。包括单碱基的转换、颠换，不包括插入、缺失等其它的遗传变化类型。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。

单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism,SNP）研究背景编码基因序列的改变SNP原理示意图蛋白质结构的变化蛋白质功能的改变研究背景SuttonAetal.Pharmacogenetics2003;13(3):145~157

3.MnSOD的多态性：

SuttonA等研究显示：启动子上游第9位点T→C缬氨酸(Val)→丙氨酸(Ala)Ala-MnSOD<Val-MnSOD30%~40%MnSOD启动子区多态性位点启动子上游第102位点C→T研究背景

MnSOD（-9T>C）SNP与肿瘤放射敏感性AmbrosoneCB回顾性研究显示：

接受放疗后乳腺癌患者中，同时携带MnSOD（C/C）基因型和髓过氧化物酶（MPO）G/G基因型的的预后好。MartinRC研究显示：

MnSOD（-102C>T）SNP

延长了放疗后乳腺癌患者的无复发生存时间。

以上两项研究提示MnSOD基因多态性可能作为预测放射敏感性及预后的一个分子学指标研究背景研究目的探讨MnSOD基因启动子区上游第9位点T→C多态性与食管癌放射敏感性的关系目的材料与方法2006.9~2007.12我科收治的食管鳞状细胞癌患者93例。符合放疗入组标准，完成所有放疗计划且可行放疗后评价。研究对象

患者为初治，活检病理证实为食管鳞状细胞癌。临床分期Ⅰ期～III期（采用UICC1997年TNM分期标准，T分期采用CT-T分期

）。年龄18岁～85岁之间，KPS评分≥80分。放射治疗前常规检查无远地转移，无恶性肿瘤病史。患者有完整的临床资料，包括：纤维食管镜、食管钡餐造影、胸部和上腹部强化CT、腹部超声等。李彩英，刘明,彰俊杰，等.中国医学影像技术，2002，18:236-237.

材料与方法入组标准23例照射范围：食管原发灶上下外扩3~5cm，野宽5~8cm照射方式：等中心照射技术，三野或四野照射，

照射剂量：60~64Gy/30~32次/6~6.5W普通70例照射范围：

GTV：食管原发灶（长度以影像学和内镜检查为主要依据，前后左右以CT显示大小）和长径＞1cm肿大淋巴结

CTV：临床靶区包括原发灶上下外扩3cm、周围外扩0.8~1.0cm

及相应的淋巴引流区

PTV：计划靶区为CTV均匀外扩0.5cm适形放射治疗照射剂量：

60~64Gy/30~32次/6~6.5W，材料与方法疗

效评价

万钧等“食管癌近期疗效评价标准”CR：X片上显示粘膜像，可见粘膜基本恢复正常或增粗；若食管钡餐造影充盈片边缘光滑，钡剂通过顺利，但管壁可稍僵硬，管壁无狭窄或稍显狭窄，病变上最宽处横径与病变最狭窄处横径之比，小于或等于1.5PR：食管钡餐食管走行无明显扭曲或成角，无明显溃疡，钡剂通过尚顺利，但边缘欠光滑，有小的充盈缺损及或小龛影，或边缘虽光滑，但管腔有明显的狭窄，病变上最宽处横径与病变最狭窄处横径之比大于1.5NR：食管钡餐片病变仍有残留或看不出病变有明显好转，仍有明显的充盈缺损及龛影或狭窄加重材料与方法疗效评价疗

效评价

材料与方法随访截止时间为2009年2月22日，共计随访患者93例，失访3例，随访率97%，总体中位生存时间（mediansurvivaltime，MST）18.0个月。

疗效评价提取基因组DNAPCR-RFLPMnSOD基因型分析采集外周血5ml各组间基因型分析食管癌患者实验流程图材料与方法PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）预变性酶切预变性：95℃5min变性：95℃30s退火：64.5℃30s延伸：72℃1min延伸：72℃5minPCR产物电泳

延伸酶切产物35个循环延伸退火变性上游引物：

5’-ACCAGCAGGCAGCTGGCGCCGG-3’下游引物：

5’-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3’材料与方法卡方检验分析不同MnSOD基因型之间即期疗效的差异采用Kaplan-Meier法计算生存率，差异显著性检验采用Logrank法检验分析不同MnSOD基因型之间预后的差异，显著性水平为P<0.05

统计采用SPSS11.5统计软件包

材料与方法统计学处理结果123456100200300500107bpbpMnSOD基因PCR产物

123456100200300500107bp89bp结果酶切后产物

不同MnSOD基因型与食管癌即期疗效的关系疗效n基因型χ2值P值T/T(%)C/T+C/C(%)CR2213(59.1)9(40.9)3.2230.200PR6349(77.8)14(22.2)NR85(62.5)3(37.5)≤5cmCR1210(83.3)2(16.7)2.6580.149PR+NR2514(56.0)11(44.0)﹥5cmCR105(50.0)5(50.0)4.90.041PR+NR4638(82.6)8(17.4)结果不同MnSOD基因型与食管癌生存率的关系基因型例数MST（月）1年生存率P值T/T671768%>0.05C/C或C/T262273%结果讨论AmbrosoneCB研究显示：放疗后乳腺癌患者同时携带MnSOD

（-9C/C）基因型和髓过氧化物酶（MPO）G/G基因型生存期↑

MartinRC研究显示：MnSOD（-102C>T）SNP使乳腺癌患者无复发时间↑本研究结果显示：MnSOD（-9T>C）SNP在食管癌病变长度﹥5cm患者中携带T/C或C/C基因型患者即期疗效好于携带T/T

基因型患者讨论MnSOD（-9T→C）SNP与肿瘤放射敏感性讨论缬氨酸(Val)→丙氨酸(Ala)30%~40%Ala-MnSOD<Val-MnSODMnSOD启动子上游第9位点T→C多态MnSOD活性放射敏感性ROS清除能力MnSOD（-9T→C）SNP与肿瘤放射敏感性结论病变长度＞5cm患者中，携带T/C或C/C基因型患者即期疗效优于携带