HAMAhumananti-mouseantibodies异嗜性抗体阻滞试剂课件

異嗜性抗體阻滯試劑與試管之問與答

HeterophilicBlockingReagentFrequentlyAskedQuestions

泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158Q1.什麼時候會需要HBR?正在發展三明治免疫檢測。曾有檢測到假陽性反應之檢體。確認檢體為假陽性，而非真陽性檢體。檢測結果受到HAMA或異嗜性抗體干擾。查出影響檢測結果之假陽性檢體類別。檢測需要阻滯劑。阻滯劑為HAMA阻滯劑或異嗜性阻滯試劑?需要一個通用阻滯劑加至各種檢測系統。評估一個阻滯劑的要素。泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158病人血清/血漿中的內生性異嗜性抗體，可結合其它屬種的免疫球蛋白，包括用來產生抗體並作為免疫分析試劑的屬種(species)。這些抗體會干擾免疫分析系統，造成比實際分析物濃度更高的檢測值，因此有誤判檢體的可能。雖然異嗜性抗體可以影響各樣檢測，其主要作用於三明治免疫分析系統。“三明治”法至少使用兩種針對不同表位(epitode)抗原的抗體，其一抗體為固相(solidphase)，另一則是在溶液中，有如125I，酵素，螢光劑，化學冷光等標幟物。一般而言，檢體中之抗原與兩抗體結合，標幟抗體與固相相結合的數量與檢體內的抗原濃度成正比（圖1）。不過，異嗜性抗體在無抗原的情況下，也可連結這兩個抗體，因而增加結合標幟抗體(labeledantibody)的濃度（圖2）。Q2.何謂異嗜性抗體干擾?

圖1圖2泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158Q3.HBR如何有效地阻滯異嗜性抗體? 一般的被動阻滯法，使用非特異性物質（鼠IgG

，鼠血清，非特異性的單株抗體，凝聚

IgG等)，阻滯人類異嗜性抗體的結合(binding)。所有方法皆依賴人類異嗜性抗體之親和力(affinity)來影響阻滯。一般人類異嗜性抗體的親和力約在K-value=105-106的範圍內。 HBR以完全不同的方法來完成結合。HBR是一個特定的結合劑(binder)，直接針對人類異嗜性抗體。當HBR連結人體異嗜性抗體時，是利用立體阻隔效應(steric

hinderance)來阻滯。HBR結合劑之親和力約在K-value=109

的範圍內

。由於HBR的親和力較高，可有效地與人類異嗜性抗體結合，以達到阻滯的功效。泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158 HBR的特異性結合反應，加上1000倍以上的親和力，使得HBR具有以下優點，超越傳統阻滯方法： 1. 使用HBR，只需少量蛋白質作阻滯，不影響檢測信號。

2. HBR比傳統方法能有效阻滯更多假陽性。

3. HBR可阻滯所有anti-屬種(anti-rabbit,anti-goat,anti-sheep,和anti- mouse)反應。 4. HBR可阻滯所有抗鼠單株抗體的subtypes(如anti-mouseIgG1, anti-mouseIgG2等) 5. 使用HBR，不限定於某些檢測。如同某些狀況，使用分析物特異 單株抗體用以作阻滯。Q4.HBR超越了一般阻滯方法?泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158Q5.異嗜性抗體干擾到底是什麼?

干擾因素是免疫球蛋白，目前已發現有IgG

和IgM

異嗜性抗體。發生機率極高。依病人人口而別，目前有高達40％的發生率，至少有10％的案例已被存檔(documented)備查。不同檢體有不同程度的干擾，單一病人體內的干擾程度也會隨著時間而變化。異嗜性抗體並非針對特定屬種，但可與多種動物抗體結合。因此，干擾非僅限於以單株抗體為基礎的檢測。干擾可能是藉由檢測系統內的抗體Fc

部位所傳達。異嗜性抗體並非單一和特異的實體，而是一個多成份(multi-component)的現象，由多種抗體所構成，可引發干擾，某些或全部抗體可能只存在於特定的檢體中。EIA似乎較RIA容易受到干擾，這可能是因為抗體的Fc

部份在鏈結(conjugation)時多數被改變，故較易受影響。泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158有許多可誘發病人身體產生異嗜性抗體的因素，其中包括：類風濕性關節炎(慢性發炎性)

注射疫苗流行性感冒動物接觸(飼養寵物)

過敏特定食物(乳酪)

輸血動物輔助治療(胸腺細胞,羊細胞,胚胎細胞)Q6.異嗜性抗體從何處來?

自體免疫疾病(AIDS)血液透析免疫抑制藥物(OKT3)母性傳送心肌病變腸胃炎(E.Coli)泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158可採取以下方法來分辨假陽性和偵測異嗜性抗體干擾：

檢測數據和臨床診斷或其它檢測不符。通常表現正常的某些檢體，經稀釋後表現數據不一致。利用親和層析法，將特定分析物自檢體中排除，以確定信號是否已被排除，若訊號仍在，即為假陽性。加入異嗜性抗體阻滯劑，觀察檢測值是否降低。Q7.如何偵測異嗜性抗體干擾?泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158

異嗜性抗體

HAMAQ8.異嗜性抗體和HAMA有何不同?異嗜性抗體只是一個通稱，用來形容所有可結合動物抗體的人類抗體，並對檢測造成干擾。HAMA(Humananti-mouseantibody,人類抗鼠抗體)，是異嗜性抗體的一種，可與鼠抗體結合。泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158 阻滯劑是一種生物製劑，一旦加入免疫分析系統中，可有效防止異嗜性干擾，以避免在無抗原的情況下連結兩個(補捉及標幟)抗體。 目前有兩種主要的阻滯劑： (1)HAMA(humananti-mouseantibodies)

(2)異嗜性抗體阻滯試劑(HBR)與阻滯試管(HBT)Q9.何謂阻滯劑(BlockingReagent)?泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158(1)HAMAHAMA只阻滯一種特異的人類抗屬種抗體之活性（如人類抗鼠抗體），通常為非針對目標分析物的正常血清，正常IgG

，單株抗體等。將這些“被動阻滯劑(passiveblockingagents)”，過量加入於檢體中，使得檢體中任何特異抗屬種抗體，易與低濃度之特異免疫反應物結合。這些試劑用途有限，因為僅能排除異嗜性干擾的一部份，而異嗜性干擾牽涉許多成份。常觀察到的是，將鼠IgG

加至一雙單株(doublemonoclonal)抗體三明治檢測時，只能改正部份異嗜性干擾。(2)真正異嗜性抗體阻滯試劑(HBR)與試管(HBT)這些製劑可排除各類型的異嗜性干擾。內含“主動阻斷試劑(activeblockingreagents)“，是直接針對造成干擾的異嗜性抗體。只需低濃度即可達預期的功效，降低任何影響免疫反應的不良效應，並有效增強阻斷動能(kinetics)。Q9.何謂阻滯劑(BlockingReagent)?泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158HBR阻滯下列假陽性反應: a.人類抗鼠抗體（HAMA）

b.人類抗山羊抗體

c.人類抗羊抗體

d.人類抗兔抗體 e.類風濕因子廣泛特異性表示ScantibodiesHBR可做為“通用試劑”，適用於二部位免疫分析檢測，抗體為固相或標幟試劑。為一高特異性及高純度的試劑，極低濃度的ScantibodiesHBR即夠用(有時比正常鼠IgG

少百倍或千倍），乃使檢測信號夠大，不受不良影響。ScantibodiesHBR不干擾人類血清中分析物之加入(spike)或還原(recovery)。Scantibodies

HBR不干擾真正陽性病人檢體的稀釋線性。ScantibodiesHBR批與批之間重複性(reproducibility)極高。ScantibodiesHBR效期五年內品質穩定。在檢測中使用ScantibodiesHBR，比使用鼠IgG或鼠血清的成本為低。ScantibodiesHBR可直接加入檢測緩衝劑、鏈結物(conjugates)等。Q10.HBR的表現特性泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158

Scantibodies已成功找出會引起假陽性結果的捐助者(donors)。這些 捐助者的檢體，最難以傳統方法（鼠IgG等）阻斷其異嗜性干擾。 這些檢體可用以辨識假陽性反應，並用來評估異嗜性干擾對檢測的 影響。

請注意假陽性檢體往往有檢測特異性。因此，這些檢體在某些檢測 中，可能不會顯示假陽性。

Q11.辨識假陽性泰歷藥品儀器股份有限公司0800-050-158PrevalenceofHeterophilicAntibodyInterferenceinEightAutomatedTumorMarkerImmunoassaysClinicalChemistry51,No.1,2005TechniquesforIdentifyingHeterophileAntibodyInterferenceAreAssaySpecific:StudyofSevenAnalytesonTwoAutomatedImm