第14、21章 基因工程与分子生物学常用技术及其应用习题

PAGEPAGE17第十四、二十一章基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用复习测试(一）名词解释1．DNA重组基因工程限制性核酸内切酶DNAcDNA聚合酶链反应（PCR）载体转化感染核酸分子杂交11．Southern12．Northern13．斑点印迹原位杂交DNA基因诊断基因治疗（二)选择题A型题：A．DNAB．DNA两链的切点常不在同一位点C．酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端D．DNA两链的切点常在同一位点E．酶辨认的碱基一般为4～6个限制性核酸内切酶：A．DNADNADNADNAE．由噬菌体提取而得cDNAD．内含子和调节区E．内含子和外显子cDNAA．mRNADNAmRNADNADNADNADNAS—腺苷甲硫氨酸(SAMDNA5．限制性核酸内切酶的通常识别序列是：粘性末端B．RNApUC系列是指：A．经人工改造的大肠杆菌质粒B．天然的大肠杆菌质粒C．天然的酵母质粒D．E．经人工改造的酵母质粒A．质粒噬菌体C．D．结构基因E．乳糖操纵子转化常指：A．B．DNA，D．产生点突变E．产生移码突变9．A．载体和目的基因的分离、提纯与鉴定B．分、切、接、转、筛C．D．将载体和目的基因接合成重组体E．限制性核酸内切酶的应用A．质粒B．噬菌体C．D．人类DNAE．酵母质粒常用质粒有以下特性:A．是线形双链DNAB．插入片段的容量比λDNAC．含有抗生素抗性基因D．含有同一限制性核酸内切酶的多个切口E．不随细菌繁殖而进行自我复制在重组体中切出插入片段最常用的方法是：A．以重组时所用限制性核酸内切酶将其切出B．用其它限制性酶将其切出S1用DNA酶将切出E．PCRDNAA．反应体系内存在特异DNA片段B．反应体系内存在特异RNA片段C．反应体系内存在特异DNA引物D．反应RNATaqDNADNA14．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A．大肠杆菌表达体系B．原核表达体系C．酵母表达体系D．昆虫表达体系E．15．DNA5′-羟基末端B．5′-3′—羟基末端C．3′-5′-D．5′-3′—羟基末端E．3′-羟基末端和5′—羟基末端及磷酸16．下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：小型环状双链DNA分子B．携带有某些抗生素抗性基因C．在D．具有自我复制功能E．获得目的基因A．DNAB．DNADNAA．酶工程蛋白质工程C．细胞工程D．发酵工程E．DNAA．限制性核酸内切酶B．DNAC．DNAD．反转录酶E．DNADNAA．平端末端B．3′C．5′D．粘性末端E．缺口末端DNADNAA．限制性核酸外切酶B．限制性核酸内切酶C．非限制性核酸外切酶D．非限制性核酸内切酶E．DNA内切酶cDNAA．RNAB．DNAC．DNARNAD．RNAE．DNAA．部分遗传信息B．整套遗传信息C．可转录基因D．非转录基因E．可表达基因A．细菌染色体B．酵母染色体C．细菌染色体外D．酵母染色体外E．病毒DNA外A．DNADNARNADNA线状单链DNA分子26．A．PECB．PERC．PDRD．BCRE．PCR在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是：化学合成法B．C．cDNAE．差异显示法DNAA．DNAB．DNADNAC．外源基因插入宿主基因D．目的基因接入适当载体E．DNA平端B．5′C．3′D．钝性末端E．配伍末端PCRA．DNA连接酶B．反转录酶C．末端转移酶D．碱性磷酸酶E．TaqDNA聚合酶DNAB．人工接头连接C．平端连接D．粘性末端连接E．DNADNAA．DNAB．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶A．转化B．转染C．感染D．转导E．转位A．营养互补筛选B．抗药性筛选C．免疫化学筛选D．PCR筛选E．αA．抗药性标志筛选B．酶联免疫筛选C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选A．酵母细胞B．昆虫细胞C．D．真菌E．大肠杆菌DNAA．反转录酶B．多聚核苷酸激酶C．引物酶D．RNA聚合酶E．末端转移酶A．细胞克隆B．RNADNAA．正超螺旋结构B．C．α螺旋结构D．回文结构E．锌指结构A．DNADNADNADNADNADNAA．DNAB．线粒体DNAC．D．tRNAE．rRNADNAT4噬菌体感染大肠杆菌中分离的,这种连接酶:只能催化平末端连接,而不能催化粘性末端连接B．DNADNAC．双链DNA中不需一条完整的单链D．单链中的切口位点可缺少几个核苷酸E．5′—3′-43．末端转移酶是合成酶类：A．作用时不需模板B．是从小牛胸腺中分离C．5′—D．5′—ssDNAE．5′—44．在基因工程中可用碱性磷酸酶：A．防止DNA的自身环化B．DNA3′—C．3′-末端D．DNARNA3′-E．水解特异的核苷酸片段A．限制性核酸内切酶B．末端转移酶C．反转录酶D．DNAS1A．DNAB．切割单链的RNAC．切割发夹环D．切割单链DNAE．cDNAA．限制性核酸内切酶切除3′外切酶切除S15′E．碱性磷酸酶切除下面有关限制性内切酶的叙述正确的是：A．限制酶是外切酶而不是内切酶B．限制酶在特异序列（识别位点）对DNA进行切割C．同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的D．一DNA,E．一DNA，产生平末端A．DNAB．DNAC．特定的三联码D．双链RNA的特定碱基序列E．RNA50．DNA3′→5′ds-DNADNA5′—端进行填补或末端标记DNADNAD．DNADNAE．TaqDNA51．反转录酶：DNARNADNAmRNARNARNA是依赖于RNA的DNA聚合酶52．能在宿主细胞中复制繁殖B．容易进入宿主细胞C．具有多克隆位点D．E．以上均是DNAA．质粒粘粒C．D．λ噬菌体E．cDNApUCA．乳糖操纵子调节基因、启动子B．多克隆位点lacZ′基因D．E．以上均有质粒具有以下特点：A．B．不能自主复制C．DNA2～300kbE．以上都不对A．cos本身约4~6kb之间C．D．可克隆DNA大片段E．以上都不是下面关于多克隆位点的描述不正确的是：A．仅位于质粒载体中B．C．不同酶的识别序列可以重叠D．一般是人工合成后添加到载体中E．可位于不同载体中A．限制性内切酶图谱法B．PCRNorthernSouthernE．抗药性标记基因利用基因工程可以进行：A．建立染色体基因文库B．分析基因的结构与功能C．D．疾病的诊断和基因治疗E．以上均可以Southern印迹的DNA探针杂交：A．只与序列完全相同的RNA片段B．可与任何含有相同序列的DNA片段C．可与任何含有互补序列的DNA片段D．DNAE．RNASouthernA．DNAB．DNA与载体连接C．DNAD．DNAE．用一个标记的探针与膜杂交NorthernA．从细胞和组织中提取RNAB．RNAC．RNAD．与核酸探针进行杂交E．RNADNA原位杂交具有以下特点：A．不需从组织或细胞中提取核酸B．对靶序列有很高的灵敏度C．可完整保护组织与细胞的形态D．E．以上均是A．要加以标记B．应是双链DNAC．D．探针长度可以是十几个碱基到几千个碱基不等E．高灵敏度A．DNAcDNA探针C．D．RNA探针E．以上均是DNAA．从基因组文库筛选得到特定基因B．克隆、扩增纯化D．E．RNAA．采用反转录方法可以得到B．单链、杂交效率高C．杂交体系稳定D．不存在高度重复序列E．特异性高下面哪一步不是cDNA探针的步骤:A．从相应组织细胞直接中分离特异的B．从相应组织细胞中分离特异的mRNAC．cDNA与载体连接cDNA，分离纯化69．B．生物素C．荧光素D．地高辛E．NTPA．32P5SC．3HD．125IE．14CA．检测时间短B．灵敏度和特异性高1000D．半衰期短，稳定性差E．污染环境72．B．C．D．酶E．核酸A．灵敏度高于放射性核素稳定C．经济D．实验周期短E．PCRA．基因组DNA(模板）B．引物dNTPD．TaqDNAE．T4DNAPCRA．目的基因的克隆B．基因表达与调控C．DNAE．以上均可以DNAPCRA．反应体系一般选用50-100μlB．引物、TaqDNAC．4dNTPD．缓冲液E．以上均是mRNAPCRA．mRNAcDNA20μl4dNTP、引物RNATaqDNAE．以上均是PCRA．样品模板的拷贝数B．PCR扩增效率C．DNA酶种类及活性D．dNTP的大量消耗E．非特异性A．核糖体B．RNAC．抗体D．抗原E．SouthernDNADNANorthernA．RNADNARNARNADNARNARNA用DNA探针检测蛋白片段81．A．根据外源基因的表达B．根据载体基因的表达C．mRNADNAD．DNADNAE．RNARNA82．原位杂交包括:A．转膜杂交B．斑点杂交C．D．E．以上均有DNAA．转化B．转录C．翻译D．E．DNAA．两种片段上都接上聚(dT）尾部B．一种片段接聚（dT）尾部，另一种接聚(dA)尾部C．两种片段都接上聚（dA）尾部D．T4DNAE．有两项是对的用原核生物表达真核生物的基因存在的问题是：A．大肠细菌只能表达克隆的cDNAB．C．缺乏翻译后加工机制D．表达的蛋白质常形成不溶性包涵体E．以上都正确A．质粒B．噬菌体C．DNAD．大肠杆菌基因组DNAE．有3项是正确的cDNADNADNAD．tRNAE．rRNADNAA．DNAB．线粒体DNAC．D．tRNAE．rRNAPCRA．5ˊ端特定序列互补B．5ˊ端任意序列互补C．3ˊ端特定序列互补D．3ˊ端任意序列互补E．中间序列互补DNAA．抗药性选择B．C．RNADNAA．样品的准备与标记B．芯片的制备C．信号的检测D．数据分析处理E．杂交A．核酸分子杂交B．单链构象多态性分析C．DNAD．DNAE．以上均是B型题：A．B．DNAC．DNAD．移码突变E．1．感染是指：转化是指：转位是指：31A．抗药性选择B．分子杂交选择C．RNA转录D．免疫学方法E．体外翻译用于鉴定是否有质粒转入受体菌的一般方法是：用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法：A．限制性核酸内切酶B．DNAE．碱性磷酸酶DNA用于聚合酶链式反应的是：DNADNARNA5ˊ端磷酸的酶是：mRNAcDNAA．支原体B．衣原体C．噬菌体D．细菌E．酵母常用作原核表达体系的是：A．基因组文库cDNAmRNAtRNArRNA文库16．mRNAA．抗药性选择B．RNA反转录C．免疫化学方法D．体外翻译E．PCR对重组体内基因进行直接选择的方法是：A．RNAB．末端转移酶C．碱性磷酸酶D．反转录酶E．核苷酸酶DNADNA3′羟基末端进行同聚物加尾需要用：cDNAA．同聚物加尾连接B．人工接头C．粘性末端连接D．缺口末端连接E．平端连接DNADNADNADNAA．DNAB．将双链DNA序列特异切开C．DNAD．将缺口末端连接E．DNA限制性内切酶的作用是:DNA碱性磷酸酶作用是：A．B．所有基因结构C．不表达的调控区D．内含子和调节区E．外显子和调节区cDNADNAmRNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．DNADNADNAA．反转录酶B．多聚核苷酸激酶C．引物酶D．RNA聚合酶E．末端转移酶ATPDNARNA5ˊ端羟基上:DNA3ˊ端羟基上:(三）问答题简述基因工程的主要过程。什么是载体？可分为几类？它们各有什么特点？pUC采用哪些方法可获取目的基因？目的基因与载体的连接有哪几种方法？简述其各特点？重组体主要有哪些筛选与鉴定方法？分子杂交的基本原理是什么？有哪些基本的方法？简述标记核酸的核素和非核素有哪几种？各自有何特点？PCR？简述其基本原理。DNA参考答案（一)名词解释DNA（DNADNADNADNADNADNADNADNADNA子特异序列的核酸酶，称为限制性核酸内切酶，简称限制性酶.DNADNADNA混合体称为基因文库.mRNAcDNAcDNAcDNADNA.DNAcDNAPCRDNAdNTPDNADNADNADNADNADNADNADNA转化常用的宿主细胞是大肠杆菌.DNADNA有活力的噬菌体或病毒，就能以感染的方式进入宿主细菌或细胞.核酸分子杂交是依据两条核酸单链之间碱基互补、变性和复性的原理，用已知碱基法。DNADNADNADNARNARNA(mRNA）Southern同.RNADNA点印迹杂交。核酸保持在细胞或组织切片中,经适当方法处理细胞或组织后,将标记的核酸探针与.原位杂交不需要从组织或细胞中提取核酸，对DNADNADNARNADNARNA，DNA，RNA通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。基因治疗是指以正常基因矫正、替代缺陷基因,表达的一种治疗疾病的方法.狭义的基因治疗是指目的基因导入靶细胞后与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿主基因组的一部分，目的基因的表达产物起治疗疾病的目的 .而广义的基因治疗则包通过基因转移技术或反义核酸技术、核酶技术等，使目的基因得到表达、或封闭、剪切致病基因的mRNA，而达到治疗疾病的目的。(二)选择题A型题:D6。11。C

5.C2.B3。A2.B3。A4.B7。C8。C9.B12.A13。C14.E15.B16。D 17。A 18。E 19.E 20.D24。C24。C25.A29.B30.E26。E 27。D 28。D31。D 31。D 32.C33。A34。B 35.C36。E 37.B38。C39。D 40。41。A 42。E43.B44.A45.C46。E47。C48.B49.B50。E51。E52。E53.C54.E55.D56。E 57。A 58.E 59。E 60.C62.E62.E63.E67.A68.A66.D71.A 72.E76。E 77.E

64.B 65。E69。E 70。E73。A74.E75。E78.D79.B80。B81.A 82。E 83.A 84。E 85。86。E 87。E 88.C 89。A 90.91.A 92。B1.B 2.C 3.A 4.E 5。D6。A6。A7。B11.B12。E13.C 14。D 15.E18.A18.A19.C20。C23.C24。A25。B28.C29.E30。A33.E34.C35.A21。B 22.D26。E 27。B31.B 32.A36.B 37.E 38。(三）问答题1．（1）目的基因的获取：通过化学合成或PCR的方法获取，也可从基因组DNA或cDNA文库筛选。克隆载体的选择与构建：常用载体有质粒、噬菌体、病毒 DNA.目的基因与载体的连接：利用DNA连接酶将目的基因与载体DNA成重组DNA分子。重组DNA分子导入受体细胞：目的基因与载体连接成重组DNA入受体菌,随受体菌生长、繁殖，重组DNA分子也复制、扩增。导入的方法有转化和感染等。（5)重组体的筛选:筛选出含重组DNA的受体菌，常用筛选方法有遗传学方法如抗药性标志选择、分子杂交和免疫化学方法.蛋白质或多肽。载体是为携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNADNADNADNADNA(1）质粒质粒是细菌中存在的独立于染色质以外的、能自主复制的、并与细菌或细胞共存的遗传成分。多为双链共价闭合环形DNA，可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2～300kb之间,＜15kb的大小质粒比较容易分离纯化，＞15kb的大质粒则不易提取.噬菌体噬菌体是感染细菌的一类病毒.因为它寄生在细菌中并能溶解细菌细胞，λTM13、f1、fd.λ50kbDNADNA12DNA粘粒粘粒（cosmid）λcoscosDNA46kb，但可借cos2945kbλcosDNAλDNA病毒质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA如腺病毒、痘病毒、反转录病毒和猴空泡病毒.31)pBR322（ori。大肠杆菌乳糖操纵子的调节基因laci)(Plac(O）lacZ′基因中加入了多克隆位点。lacZ′基因编码β-半乳糖苷酶Nα—β—半乳糖苷酶Cα4．(1DNADNADNADNA。将所有的重组DNADNA片段。(2）制备cDNAmRNAcDNA，将cDNA载体进行连接，使每一个cDNADNA。将所有的重组DNAcDNADNAcDNA（PCR）PCRPCR（RT-PCR)mRNAcDNA。化学合成如果知道肽链的氨基酸顺序，则可按照对应的密码子推导出DNADNA的链则须分段合成，然后用连接酶进行连接。主要有以下四种。DNADNADNADNAT4DNADNADNADNA3′粘性末端，例如一股DNA3′polyA,另一DNApolyT,DNADNAT4DNAT4DNAT4DNADNADNA61ampr、tetr、kanr转化子菌落才能在含该抗生素的培养基中生存并形成菌落。这样就可以区分重组体和非重组体。32PDNADNA分子杂交，直接筛选并鉴定目的基因。（3）免疫学方法：利用特异性抗体与目的基因表达产物特异结合的方法筛选.免疫学方法特异性强、灵敏度高。71）子在一定条件下碱基互补配对结合,形成双链的原理。在这一过程中,核酸分子经历了变性和复性的变化，杂交的双方分别称为探针与待测核酸，杂交后形成的异源双链分子称为杂交分子.(2）基本的方法SouthernSouthernDNADNADNADNA针杂交。NorthernNorthernRNA的方法.其基本原理和基本过程与Southern印迹杂交基本相同。RNADNA探针杂交，称为斑点印迹。若采用狭缝点样器加样后杂交，其印迹为线状，称为狭缝印迹杂SouthernNorthern样品的检测。主要用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，原位杂交核酸保持在细胞或组织切片中，经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。原位杂交不需要从组织或细胞中提取核酸，对组织中含量极低的靶序列有很高的灵敏度，并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。DNARNA，DNA生物素和荧光素等非放射性核素。(1）放射性核素标记物：放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物，其灵敏度和特100032P、35S、3H、125I、131I（2）非放射性核素标记物：非放射性核素标记的探针的