第七章分生组织培养与脱毒

第七章分生组织培养与脱毒第一页，共二十七页，编辑于2023年，星期一第七章分生组织培养与脱毒1植物病毒的危害及主要类型2植物病毒的传播及在植物体中的分布3植物病毒的防治方法及原理4分生组织培养脱毒的一般方法5无病毒植株的鉴定6影响分生组织培养脱毒的因子7无病毒植物的利用第二页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.1植物病毒的危害和种类:受病毒危害严重的作物有：大田作物：马铃薯、甘薯和烟草蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄和萝卜果树：柑橘、苹果、草莓和香蕉花卉：香石竹、各种菊花、天竺葵和紫罗兰植物病毒已超过600种；感染草莓的病毒有62种，柑橘有15种，马铃薯有26种植物病毒有RNA、DNA病毒第三页，共二十七页，编辑于2023年，星期一草莓病毒病环斑型变色型坏死型畸形生长型一般减产30%左右第四页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.2植物病毒的传播及分布:介体传播1.昆虫介体：400多种（如蚜虫200多种、叶蝉130多种、飞虱等），以蚜虫为主；2.动物介体（如螨、线虫）；3.真菌和菟丝子。飞虱传播病毒

蚜虫传播病毒

螨虫传播病毒

7.2.1传播第五页，共二十七页，编辑于2023年，星期一嫁接传播非介体传播

是指植物病毒从感病寄主体内由于伤残或分泌而达到体外，与另一寄主体通过机械摩擦所造成的微伤接触而传染；无性繁殖第六页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.2.2植物病毒的分布

7.2.2.1侵入活体寄生，不能从气孔侵入。微小伤口——胞间连丝——原生质，产生侵染（1）通过寄主柔膜组织昆虫传播的病毒，可通过3种类型的组织侵入：（2）通过寄主韧皮组织

（3）通过木质部第七页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.2.2.2增殖与运转病毒粒子（核酸）细胞核内复制，到达细胞质诱导病毒蛋白质形成，最后组装在一起。病毒复制到一定量，形成侵染点，通过胞间连丝（移动较慢）与韧皮部（速度极快），扩散到其他部分。第八页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.2.2.3分布顶端分生组织一般是无毒的，或者是只携有浓度很低的病毒。病毒数量随着与茎尖距离的加大而增加，在较老的组织中病毒浓度很高。第九页，共二十七页，编辑于2023年，星期一孔雀绿、硫尿嘧啶等病毒抑制剂、核酸合成抑制剂。生产上很难应用。1.高温处理

①温汤浸渍处理法②热风处理法2.低温处理1.种子繁殖2.分生组织培养中脱毒3.愈伤组织诱导4.微型嫁接脱毒5.珠心胚培养物理学方法化学方法生物学方法7.3植物病毒的防治方法及原理：第十页，共二十七页，编辑于2023年，星期一高温空气热处理脱毒示意图切取嫩梢1.5~2.0cm带病毒植株热处理38℃嫩梢嫁接第十一页，共二十七页，编辑于2023年，星期一热处理与茎尖分生组织培养结合脱毒

35℃热处理7~28d感染X、Y病毒暗处发芽

茎尖剥离茎尖分生

组织培养柑橘微芽嫁接脱毒第十二页，共二十七页，编辑于2023年，星期一重点介绍：7.4茎尖分生组织培养脱毒13第十三页，共二十七页，编辑于2023年，星期一茎尖培养：概念：是指从十到几十微米的茎尖分生组织至几十毫米茎尖或更大芽的离体培养。根据外植体大小可划分：茎尖分生组织培养（≦0.1mm）普通茎尖培养（较大的茎尖如几毫米乃至几十毫米）第十四页，共二十七页，编辑于2023年，星期一茎尖分生组织培养茎尖培养无菌苗茎尖培养途径易难第十五页，共二十七页，编辑于2023年，星期一来源:丁春邦课件16第十六页，共二十七页，编辑于2023年，星期一茎尖分生组织培养茎尖培养无菌苗无毒苗区别?第十七页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.4.1茎尖分生组织培养脱毒原理:White发现TMV在烟草根尖分布不均，1934年。Limasset等发现茎尖也不带病毒。1949年，Morel等首先利用茎尖分生组织培养获得了大丽花和马铃薯无病毒苗，同时建立了茎尖脱毒的组织培养技术体系。1952年，Mathews（1970）等认为分生组织能避免病毒侵染的可能机理是：第十八页，共二十七页，编辑于2023年，星期一（1）在植物体内，病毒通过维管系统移动，而分生组织不存在维管系统。此外，病毒通过胞间连丝在细胞间移动，但其速度很慢，难以侵入活跃生长的茎尖；（2）在旺盛生长的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制；（3）倘若在植物体内确实存在着“病毒钝化系统”的话，它在分生组织中应比在任何其他区域都有更高的活性，因而分生组织不受侵染；（4）在茎尖中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。第十九页，共二十七页，编辑于2023年，星期一

带病毒植株材料处理茎尖剥离

(0.2mm)

茎尖培养

分化芽分化根

病毒检测

脱毒植株7.4.2茎尖分生组织培养脱毒过程第二十页，共二十七页，编辑于2023年，星期一病毒的种类离体茎尖的大小化学物质热处理病毒间的干扰7.4.3影响分生组织培养脱毒的因子：第二十一页，共二十七页，编辑于2023年，星期一一些植物茎尖培养脱除病毒时适宜茎尖大小（朱至清，2002）植物种类病毒种类茎尖大小/mm植物种类病毒种类茎尖大小/mm甘薯马铃薯大丽花斑叶花叶病毒缩叶花叶病毒羽状花叶病毒Y病毒X病毒卷叶病毒G病毒S病毒花叶病毒1.0～2.01.0～2.00.3～1.01.0～3.00.2～0.51.0～3.00.2～0.30.30.6～1.0康乃馨百合鸢尾大蒜矮牵牛菊花草莓甘蔗春山芋花叶病毒各种花叶病毒花叶病毒花叶病毒烟草花叶病毒花叶病毒各种病毒花叶病毒芜菁花叶病毒0.2～0.80.1～0.20.2～0.50.3～1.00.1～0.30.2～1.00.2～1.00.7～0.80.5第二十二页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.5无病毒植株的鉴定7.5.1指示植物法病毒指示植物鉴定法就是利用病毒在其它植物上产生的枯斑和某些病理症状，作为鉴别病毒及病毒种类的标准，有时该法也称枯斑测定法。病毒症状特征指示植物表7-5植物一些病毒病害症状和指示植物马铃薯X病毒（PVX)轻重不同的花叶和环斑，因株系而异千日红，地霉松，指尖椒第二十三页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.5.2抗血清鉴定法凡能刺激动物机体产生免疫反应的物质，称为抗原。抗体则是由抗原刺激动物机体的免疫活性细胞而生成的，它存在于血清或体液中，为一种具有免疫特性的球蛋白，能与该抗原发生专化性免疫反应。常用的有试管沉淀试验、凝胶扩散反应、免疫电泳技术、炭凝集试验、荧光抗体技术、酶联免疫吸附法、免疫电子显微镜法等。第二十四页，共二十七页，编辑于2023年，星期一7.5.3酶联免疫法酶联免疫吸附法是目前最新的血清学方法之一。酶联免疫吸附法是把抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术，其基本原理是以酶标记的抗体来指示抗原抗体的结合。该酶可催化无色的底物，发生水解，生成可溶性的或不可溶性的有色产物。第二十五页，共二十七页，编辑于2023年，星期一病毒检测技术使用各种各样的ELISA试剂盒快速试剂盒生物芯片国际马铃薯中心在中国生产的