感染性疾病及免疫学检测演示文稿

感染性疾病及免疫学检测演示文稿当前第1页\共有54页\编于星期五\9点（优选）感染性疾病及免疫学检测当前第2页\共有54页\编于星期五\9点病原体易感人群当前第3页\共有54页\编于星期五\9点免疫学检验主要用于：辅助诊断及鉴别诊断判断疗效及预后流行病学调查当前第4页\共有54页\编于星期五\9点常用的免疫学检测方法酶联免疫吸附试验（ELISA）金标法（试纸条、试纸板）化学发光法1.电化学发光（罗氏）2.微粒子化学发光（雅培）免疫印迹法(Westernblotting)

凝集反应（梅毒检测)当前第5页\共有54页\编于星期五\9点酶联免疫吸附试验ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）

是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP)

碱性磷酸酶（AP）。当前第6页\共有54页\编于星期五\9点基本步骤包被封闭孵育洗涤显色结果测定

缺点：1只是诊断的辅助手段，特异性和灵敏性有待提高。

2操作过程有些繁琐，反应时间过长，不能一蹴而就。当前第7页\共有54页\编于星期五\9点金标法原理：金标层析法采用双抗原夹心法免疫测定原理，选择经纯化的基因工程制备的抗原，分别作为包被抗原和胶体金结合抗原。由于层析作用反应复合物沿硝酸纤维膜向前移动，当遇到包被抗原时，形成红色沉淀线。在包被膜上还有一条质控线对照，故当有两条红线时判为阳性，只有一条红线时，判为阴性。当前第8页\共有54页\编于星期五\9点免疫印迹法免疫印迹法(Westernblotting)是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。（病毒学检测主要用于检测HIV抗原确证试验）当前第9页\共有54页\编于星期五\9点凝集反应

凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定条件下出现凝集。当前第10页\共有54页\编于星期五\9点化学发光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性。当前第11页\共有54页\编于星期五\9点CLIA优越性高度敏感，可达pg／ml或pmol水平；特异性强，重复性好，CV＜5％。测定范围宽，可达7个数量级。试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长，达数月甚至数年。操作简单，耗时短，易于自动化。在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。当前第12页\共有54页\编于星期五\9点常见术前检测甲型肝炎抗体（抗HAVIgM）乙肝五项丙型肝炎抗体（抗HCV)梅毒螺旋体抗体人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV）当前第13页\共有54页\编于星期五\9点病毒性肝炎

ViralHepatitis是由一组嗜肝病毒引起的，以肝脏炎症和坏死病变为主的一种传染病。主要表现为明显的消化道症状、全身疲乏无力，肝脏肿大。肝功能异常，部分病例出现黄疸。当前第14页\共有54页\编于星期五\9点甲型病毒性肝炎（HAV）HAV属小RNA病毒，为正单链RNA病毒。HAV主要经粪-口途径传播。潜伏期平均28天。HAV抵抗力较强，60℃加热10-12h后仍具有感染性，85℃加热立即灭活，对乙醚、氯仿及PH为3的酸性环境有抵抗力。当前第15页\共有54页\编于星期五\9点HAVIgM：近期感染HAV,发病2周后阳性率为100%，3个月后转阴。早期诊断。IgG：急性感染后6个月达高峰，然后逐渐下降，可终身存在。既往感染HAVRNA：早期诊断的特异性指标当前第16页\共有54页\编于星期五\9点HBV(hepatitisBvirus）乙型肝炎病毒当前第17页\共有54页\编于星期五\9点我国流行现状现有HBV感染者约1.6亿当前第18页\共有54页\编于星期五\9点HBV颗粒管型小球型大球型当前第19页\共有54页\编于星期五\9点HBV特点HBsAg与HBsAbHBeAg与HBeAbHBcAg与HBcAb有包膜双股DNA病毒三组Ag-Ab系统：当前第20页\共有54页\编于星期五\9点HBs-Ag是感染的标志见于体液和分泌物中，也可见于唾液、精液、乳汁中介导病毒结合肝细胞HBs-Ab3-6个月产生有抵抗力的标志阻断病毒结合肝细胞当前第21页\共有54页\编于星期五\9点HBeAg病毒复制的标志，传染性强病毒合成后释放到血液中治疗的参考指标HBeAb病毒复制减少的标志，传染性弱要先于HBsAb出现当前第22页\共有54页\编于星期五\9点HBcAg存在于病毒核心，不释放至血液抗原性强HBcAb出现早，消退晚IgM:近期感染HBVIgG:既往感染HBV当前第23页\共有54页\编于星期五\9点临床组合模式当前第24页\共有54页\编于星期五\9点模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc临床意义1+-+-+俗称“大三阳”。急性或慢性乙肝；病毒在复制，传染性强。2+--++俗称“小三阳”。急性或慢性乙肝；传染性低。这种模式在慢性无症状携带者以及急性感染人群中较常见，病毒复制可能仍在进行。3+---+急性或慢性乙肝感染，有传染性4---++既往感染5----+处于HBsAg和HBeAg消失与Anti-HBe和Anti-HBs出现之间的一个缺口时期；既往感染6-+--+感染恢复期；既往感染，有免疫力7-+-++感染恢复期；既往感染8-+---主动免疫9-----未感染HBV,属易感者当前第25页\共有54页\编于星期五\9点10++-++少见的模式11+----12+-+--13-++-+14+-+++模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc临床意义当前第26页\共有54页\编于星期五\9点乙肝五项少见模式分析单一HBsAg：

主要见于急性HBV感染的最早期，一般随之出现HBeAg和IgM的Anti-HBc。通常的慢性HBV感染中，HBsAg和Anti-HBc并存者约占95%，HBV慢性感染中不出现Anti-HBc是少见的。单一的HBsAg的异常表现主要由于Anti-HBc的缺失。当前第27页\共有54页\编于星期五\9点HBsAg和Anti-HBs并存：在HBV感染恢复期中约有3%的个例可同时检出HBsAg和Anti-HBs,然后HBsAg消失而Anti-HBs水平逐渐升高。在慢性HBV感染者中约3%-5%两者共存，出现Anti-HBs并不表明HBsAg的清除和感染的恢复，可能由于：1.前后感染两种亚型HBV，或HBsAg与其抗体之间仅有低亲和性反应；2.S基因变异，其编码的HBsAg抗原性改变，原型Anti-HBs不能将其清除；3.α干扰素治疗中出现Anti-HBs血清转换，也因S基因的变异，而未能清除HBsAg。4.HBV疫苗接种者中也有少数个例虽有正常的Anti-HBs应答，但仍能感染α决定簇变异的免疫逃逸病毒株，从而出现与HBsAg共存的现象。当前第28页\共有54页\编于星期五\9点HBeAg和Anti-HBe并存：一般是处于乙肝e抗原和e抗体转换时期，e抗原和e抗体以抗原抗体复合物的状态共存。Anti-HBe试剂检测时，血样中的抗原抗体复合物同样可以结合至包被板上，起到了竞争效果。当前第29页\共有54页\编于星期五\9点呈世界性分布极易慢性化，与肝硬化、原发性肝癌关系密切HCV（hepatitisCvirus）丙型肝炎病毒当前第30页\共有54页\编于星期五\9点HCV特点有包膜的单股正链RNA病毒抗HCV抗体非保护性抗体输血和非肠道途径传播主要检测IgG当前第31页\共有54页\编于星期五\9点丙型病毒性肝炎(HCV)临床意义HCV是输血后肝炎和散发性非甲非乙型肝炎的主要病原。HCV感染后可导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌等多种肝脏疾病。抗HCV阳性而血清中没有HCVRNA提示既往感染。当前第32页\共有54页\编于星期五\9点检测方法

常用检测方法为ELISA法，金标记免疫层析法和化学发光法。当前第33页\共有54页\编于星期五\9点检测方法：ELISA化学发光当前第34页\共有54页\编于星期五\9点HIV(HumanImmunodeficiencyVirus)

人获得性免疫缺陷病毒当前第35页\共有54页\编于星期五\9点我国历年艾滋病病毒感染者和病人数当前第36页\共有54页\编于星期五\9点HIV的结构特点HIV-1和HIV-2逆转录病毒两股相同的正链RNA当前第37页\共有54页\编于星期五\9点CD4抗原辅助受体CD4+细胞HIVgp120结合CD4/辅助受体当前第38页\共有54页\编于星期五\9点病毒经黏膜或皮肤破损进入体内感染黏膜或皮肤层树突状细胞病毒于24小时内在树突状细胞繁殖病毒于24-28小时到达局部淋巴结病毒于5天内出现在外周血液中每个感染细胞可产生5000个病毒颗粒，每人每天可产1010病毒。当前第39页\共有54页\编于星期五\9点HIV的检测筛选试验：敏感性高，如ELISA，胶体金标记层析法。确诊试验：特异性高，如蛋白印迹试验和IFA抗体最早在感染后二周，最晚三个月会转为阳性初筛试验2次阳性，再进行确认试验当前第40页\共有54页\编于星期五\9点样品初筛检测阳性反应阴性反应筛查试剂复查原有试剂加另一种筛选试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应送确认实验室确认报告阴性当前第41页\共有54页\编于星期五\9点结果判断确诊试验阳性，有临床症状，诊断为AIDS确诊试验阳性，无临床症状，诊断为HIV感染者确诊试验阴性，但初筛试验阳性或有临床症状，3个月后复查当前第42页\共有54页\编于星期五\9点梅毒

syphilis

是梅毒螺旋体引起的一种慢性传染病，本病的特点是病程的长期性和潜匿性，病原体可侵犯任何器官，临床表现出各种不同的症状。当前第43页\共有54页\编于星期五\9点三个阶段

一期梅毒：硬性下疳；二期梅毒：梅毒疹；三期梅毒：累及心、肝、神经系统、骨等。当前第44页\共有54页\编于星期五\9点后天性梅毒（获得性）：95%性交传播，少数因输血、接吻、医务人员不慎受染等直接接触传播。

先天性梅毒（胎传梅毒）：梅毒螺旋体可自患病母体的血液经胎盘传给胎儿传播方式当前第45页\共有54页\编于星期五\9点非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试验，原理基本相同：

1、性病研究实验室玻片试验（VDRL)

：由于试剂需现配现用，故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法

2、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)：在特制的纸片上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果。

3、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉颗粒，使结果更易于观察。

4、不加热血清反应素试验（USR)梅毒的血清学试验（一）当前第46页\共有54页\编于星期五\9点RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。当前第47页\共有54页\编于星期五\9点非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷：

1、特异性：由于在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应.

2、敏感性：非梅毒螺旋体抗原血清试验有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的前带现象。1－2％二期梅毒病人可出现此现象而发生梅毒血清假阴性反应。此外，由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体，晚期梅毒反应素又可能转阴，因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检.非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点：

1、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随疗程逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标

2、此类方法价格低廉梅毒的血清学试验（二）当前第48页\共有54页\编于星期五\9点梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法：

1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)2、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）

3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）

5、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）梅毒的血清学试验（三）当前第49页\共有54页\编于星期五\9点梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）原理：TPPA的原理与TPHA基本相同，它以人工合成的惰性明胶颗粒代替TPHA试验的红细胞作为载体，是TPHA的升级产品优点：1、试剂稳定，批间差小

2、结果判读更为清晰明确

3、敏感性和特异性较TPHA进一步提高

4、通过了国家的批批检不足：结果判定主观，较难实现自动化梅毒的血清学试验（四）当前第50页\共有54页\编于星期五\9点赛乐迪亚（Serodia）TPPA

梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验当前第51页\共有54页\编于星期五\9点当前第52页\共有5