生物化学与分子生物学考试(中山大学)

一、名词解释1、基因克隆：是指把目的基因连接到载体上，构建成重组体，再转化入宿主细胞内进行复制和表达。或DNADNADNA2、基因文库：是指整个基因组或某一细胞所表达的基因所有克隆片段的集合体，包括基因cDNA免疫化学筛选法、染色体步移和差异表达基因筛选。3、cDNA文库：是指以所有mRNA为模板，不经选择地在逆转录酶的作用下反转合成互补的双链ＤＮＡ，即cDNA，然后把cDNA与载体连接构成重组DNA，再转化入宿主细胞扩增，建立cDNA文库。4管家基因为管家基因。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等5、散弹测序法：又称鸟枪测序法，是指大分子DNA被随机地“敲碎”成许多小片段，收集这些随机小片段并将它们全部连接到合适的测序载体，小片段测序完成后，计算机根据重叠区将小片段整合出大分子DNA序列。6功能基因组学全面系统地分析全部基因及其编码蛋白的功能，包括生物学功能，细胞学功能，发育学功能。7、限制性内切酶：是指能在特异位点（酶切位点）上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性DNA片段，被称为分子生物学家的手术刀。8、ＣＤKs：即细胞周期蛋白依赖性激酶，是一类Ser/Thr蛋白激酶，与周期蛋白结合时，才具有蛋白激酶的活性，通过使靶蛋白磷酸化而产生相应的生理效应。9、RT-PCR：是指首先以mRNA为模板合成cDNA，然后再进行常规PCR扩增的PCR。10、逐个克隆法：对连续克隆系中排定的BAC克隆逐个进行亚克隆测序并进行组装（公共领域测序计划）11PCRPCRPCR后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。12、基因组：又称染色体组，是指一个物种单倍体的染色体数目，是生物体全部遗传物质的总和，主要指真核生物的核基因组和原核生物的类核基因组。13基因组学：是指对生物体内所有基因进行基因组作图（遗传图谱、物理图谱、转录图谱分析、基因定位、基因功能分析的一门学科。或：指从基因组水平（分子整体水平）DNA机程序，分析生命体全部基因组的结构与功能。1st14、启动子：是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。15、肿瘤转移：是指恶性肿瘤细胞离开原发部位，通过各种途径到达其他器官组织，并继续生长、增殖形成性质与原发肿瘤相同的转移瘤的过程。16、显性负突变：是指一对等位基因中因其中一个突变或丢失所致的另外一个正常等位基因的功能活性丧p53也失去活性。17Delta3232HIVT18质粒DNA等遗传性标记物，经改造后具有多克隆位点。19、细胞周期：是指细胞周而复始的生长分裂过程，并且呈现一定的周期，即指亲代细胞分裂结束至子代细胞分裂结束的过程，又称细胞增殖周期。20、肿瘤标志：是指能反映细胞恶性演变的各个阶段中表型及基因型的特性或特征，通称为肿瘤标志，包括生物学标志、遗传性标志及生物化学标志。21、血管增生：是指从已存在的毛细血管网上大量生成新生血管的过程，是由于细胞与细胞、细胞与基质及细胞与细胞因子相互作用的结果。22载体DNADNADNADNA。23PCR：即以拟扩增的DNAdNTPsDNA24（V-onc：是指一类存在于肿瘤病毒中的，能使靶细胞发生恶性转化的基因。如v-src25SNP：即单核苷酸多态性，是指出现在基因组DNASNP1%。在基因组中，不同个体的DNASNP。在人类基因组中大概1000SNPSNP27Cyclin：是一类在细胞周期中，周期性的积累和降解的蛋白。即会随细胞周期中的不同时期而进行合成与降解。不同生物的细胞周期素具有共同的特点：1）100-150导与CDK结合。2）在细胞周期的特定时相与CDK结合，作为CDK的调节亚基发挥作用。2nd28、酶联受体：细胞表面上的主要类型受体，其细胞质区具有酶活性，或者和细胞质中的酶结合，配体与其结合后，激活酶活性。29、结构基因组学：研究基因组的结构并构建高分辨率的遗传图、物理图、序列图和转录图以及蛋白质组成与结构的学科。30限制性片段长度多态性/（RFLPRFLP经限制性内切酶切后，产生分子量不同的同源等位片段，再通过电泳的方法分离和检测这些片段。31、蛋白质组学：在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律的新兴学科。它以蛋白质组为研究（即一个细胞或一个组织中基因组所表达的全套蛋白质活动的基本规律。（1）（2）表达蛋白组学32K5：是由纤溶酶原中与血管抑素相连的联环结构域，由80316KD。33、细胞通讯：是指体内一部分细胞发出信号，另一部分细胞接收信号并将其转变为细胞功能变化的过程。34、信号转导：是指细胞针对外源信息所发生的细胞内生物化学变化及效应的全过程。35、蓝-白斑筛选：细菌如含编码βLacZX-gal(5-4-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNALacZ以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。二、简答题1.人类基因组计划的主要内容（简述）1)、HGP的目的：解码生命；了解生命的起源，了解生命体生长发育的规律，认识种属之间和个体之间存在差异的起因；认识疾病产生的机制以及长寿与衰老等生民现象；为疾病的治疗提供科学依据。、主要目的：阐明人类基因组的全部核苷酸序列，从整体水平上破译人类遗传信息，在分子水平全面、核心内容：是绘制人类的遗传图谱、转录图谱、物理图谱和序列图谱。2、大规模测序的基本策略。BAC（公共领域测序计划）3rdPAGEPAGE12th3、引物设计的原则：18-30bp；碱基随机分布，避免出现嘌呤、嘧啶堆积现象，G+C40%-60%；3bp；3’端的互补重叠；引物的碱基序列不应与非编码区域有同源性，应位于高度保守区；3’端无修饰，并尽量避免第一位碱基为第一二位碱基一定要与DNA5可以修饰。TmTapDNA4、蓝白斑试验的原理lacZXgallacZaw5、举例说明限制性内切酶命名的原则SmithAthens112，324HidⅢ代表从流感噬血杆菌(Haemophilusinfluenzcd第3个限制酶。6、蛋白质组学在生物医学基础研究中的应用、通过寻找差异表达蛋白质,以发现疾病相关的蛋白质；、寻找用于诊断的疾病相关的标记分子；、寻找疾病相关的蛋白质药靶,以用于药物设计；、研究疾病的致病机理等。7、Sanger即DNA链末端合成终止法–Sanger法DNADNADNADNADNA4dNTPsddNTPsddATP，则所得到的合成物产生一系DNAA样的方法，但需要不同的荧光标记。DNA8、以干扰素为例，试述其细胞信号转导通路的途径JAK酸化而进一步活化，同时将受体上的酪氨酸残基磷酸化，STATSH2JAKJAKSTATSTATSTAT形成STAT序列，调节基因表达。9、理想载体应具备哪些基本条件复制子：在宿主细胞内大量复制；同一限制性酶在载体上只有单一的酶切位点；具有选择性遗传标记；有较多的拷贝数；分子量相对较小，有足够大的接纳目的基因的容量‘有较高的遗传稳定性。10、获取目的基因的方法：从基因组DNA中分离获得；从基因文库中筛选获得（基因组文库和cDNA文库）；化学合成法；PCR扩增；mRNA逆转录。11、基因工程技术与基因调控原理之间的关系。基因工程的目的是使目的基因能高效表达。基因表达受DNA结构、蛋白质因子与核酸相互辨认、结合等组成的表达体系的调控。基因表达调控可在转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰等水平进行基因工程载体的构建必需应用表达调控的基本理论知识，应用已知的调控序列进行重组、改造。12、为什么拮抗VEGF能拮抗肿瘤血管生成？请举出拮抗VEGF的三种生化策略。１）VEGF（主要是纤维蛋白原）的外渗，为肿瘤细胞的生长和新生VEGF拮抗VEGF主要围绕对VEGF的阻断，降低VEGF活性和阻断VEGF信号传导通路。⑴ VEGFVEGF⑵ VEGF23⑶ VEGFVEGF⑷ 利用基因治疗阻断、拮抗VEGFVEGFflt-1flt-2/KDR14、P53通过哪些机制介导细胞的生长阻滞P53对细胞增殖其负性调节作用，它与特定 DNA序列结合后可诱导细胞停滞在G1期，抑制细的生长。当P53基因活跃表达时，其产物P53蛋白作为一种典型的转录因子可促进 cipl基因的表达，生p21，p21蛋白与CDK2酶结合，抑制该酶的活性，导致细胞不能进入 DNA合成期，细胞无法进行有丝分裂，细胞分裂停止。DNA损伤激活p53在细胞周期的不同阶段起不同作用，早期通过诱导 p21对CDK-cyclin激酶抑制，激活限制点，阻止细胞周期前进，直到损伤修复，晚期引发细胞凋亡。15、K5作用的分子机制K5K5K5K5HIF-1p42/p44MAPKVEGFK5PEDFK5血管因子的调节是其抗血管增生的主要机制K5MAPKK5-2K516、血管增生与肿瘤转移、血管生成不仅是肿瘤生长所必需，而且还是肿瘤细胞发生转移所需要；、新生毛细血管的内皮细胞能分泌胶原酶和组织纤溶酶原激活物，促进基质降解，便于肿瘤细胞脱落、血管前期，循环中极少有肿瘤细胞，但在肿瘤血管化后，肿瘤细胞才持续出现在循环中。17、mRNA是怎样成为cDNA文库mRNA；oligo(dT)引导合成cDNAcDNA（RNAHDNA；DNAcDNAcDNAcDNA18、ViralVirulence:ThecapacityofavirustocausediseaseinaninfectedhostVirulencecanbequantitated:、meantimetodeath；、meantimetoappearanceofs3measurementoffever,weightloss；4、measurementofpathologicallesions(poliovirus),reductioninblood CD4+lymphocytes(HIV-1)19、Viralgenesaffectingvirulence:AffectingtheabilityofthevirustoreplicateModifyingthehost’sdefensemechanismsEnablingthevirustospreadinthehostHavingintrinsiccellkillingeffects20.Hostdefensesystemsagainstviralinfectionsaremultistep,sequential,andintercommunicating.1Physicalandchemicaldefense：skin,acidpH,andsurface-cleansing2Cell-autonomus,intrinsicdefensesystemsdefense：Productionofcytokines,inductionofapoptosis,interferencewithearlystepsofviralreplication3Innateandadaptiveimmunedefense：①、Direct,amplifiedresponsebycoordinatedactionofcytokinesandlymphocytes；Infectionclearedbypathogen-specificantibodies,helperTcells,andcytotoxicTcels③、ProductionandmaintanceofB-cellandT-cellmemorycells immunehost,readytoinstantlytothesameinfectionthatinducedthememoryresponse.21、正常角膜没有血管的理论依据和实验依据PEDFPEDF实验中，PEDF0.4nmol/L量量比血管抑素，血小板反应蛋白-1，内皮抑素活性更高。如果抽掉玻璃体体液中的PEDF，其抗血管生成的活性消失，而表现出刺激血管生成的活性。22、试从PCR的原理和应用角度，谈谈其有何实用价值．PCRDNADNADNA）得到扩增；另一方面，新合成的DNAPCRDNA应用价值：１） 生物学基础研究：目的基因扩增和鉴定；DNA序列测定；定点突变；基因表达分析。２） 医学临床应用：遗传病基因诊断；致病病原体检测；癌基因检测；器官移植组织配型３） 法医学物证鉴定：个体识别；亲子鉴定。４） 其他：动、植物检疫（转基因动植物检测；生物物种鉴定；系统进化研究；分子考古学等。补充PCRDNADNARNA人工合成的寡核苷酸引物，该引物与靶序列两端互补。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成：１DNADNADNAPCRDNA以便它与引物结合，为下一步做准备。２、模板ＤＮＡ与引物的退火（复性：模板ＤＮＡ经加热变性成单链后，温度下降至适宜温度（Ｔｍ低５°Ｃ，使引物与模板ＤＮＡ单链按碱基互补原则退火结合。３、引物的延伸：将温度升至７２°Ｃ，ＤＮＡ模板－引物结合物在ＴａｑＤＮＡ聚合酶的作用下，以ＮＴＰ为底物，以靶序列为模板，按碱基配对与半保留的复制原理，合成一条新的与模板ＤＮＡ链互补的子链。上述三个步骤成为一个循环，新和成的ＤＮＡ分子继续作为下次循环的模板，每完成一个循环需２－４分钟，经多次循环（２５－３０次）后就能将待扩增目的基因扩增放大几百万倍。以ＰＣＲ技术为基础，与其他相关的分析技术方法相结合，衍生了许多新型的ＰＣＲ分析技术，如不对称ＰＣＲ、反向ＰＣＲ、实时荧光定量ＰＣＲ等。23、病毒的分子生物学特点包括基本结构和辅助结构，基本结构为核衣壳，由衣壳和病毒核心组成，辅助结构为包膜。其中病毒核心分为核酸，病毒基因组，病毒衣壳为包绕在核酸外面的蛋白质衣壳，衣壳由壳粒组成，而壳粒由多肽分子组成。24、阐述影响肿瘤转移的因素有哪些肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞离开原发部位，通过各种途径到达其他器官组织，并继续生长、增值形成性质与原发肿瘤相同的转移瘤的过程。其机制极为复杂，主要与肿瘤细胞自身的特性、宿主细胞免疫状态及转移局部组织的特性有密切的关系，主要涉及以下四个步骤：①、恶性肿瘤细胞从其瘤组织中分离、释放；②、分离出来的瘤细胞游走并穿越细胞基底膜及细胞外基质而侵入血管、淋巴管等脉管系统。③、瘤细胞侵入并附着在多种组织间隙；④、瘤细胞在新的部位分裂、增值形成转移性瘤组织。25、根据肿瘤转移的过程和分子机制分析阻止肿瘤转移的策略和手段有哪些。、基因调控下的肿瘤转移：肿瘤转移与促进基因和抑制基因之间表达失衡相关。、粘附分子与肿瘤转移：粘附因子是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖（粘附解聚）两个方面。、血管生成与肿瘤转移：肿瘤的生长和转移与血管形成密切相关、肿瘤新生毛细血管是在周边组织原胞脱落、基质浸润、侵入和逸出循环系统、继发脏器移行和微环境改造等发挥重要作用。MMPsMMPs（TIMP）在肿瘤侵袭和转移过程中担任重要角色抗肿瘤转移的策略和手段：1）肿瘤转移的基因治疗肿瘤转移抑制基因nm23基因治疗靶点tPA/uPAras基因表达阻断血管生成抑制剂与抗肿瘤转移D34PF4FGFTNP-470：是烟曲霉素类似物。血小板反应素-1TSP-1：能抑制血管生长因子。3）细胞粘附因子抑制剂与抗肿瘤转移4）MMPs抑制剂与抗肿瘤转移26、为了实际工作需要产生了许多种PCR，请简述其名称和作用。PCR：制备核酸序列测定的模板、制备杂交探针、基因组DNAPCRDNAcDNADNA；建立基因组步移文库。PCR：用于检测特定基因序列的存在或缺失。LP-PCR：大量临床标本的基因诊断、可同时检测多种基因成分。PCR：用于仅有一个引物的扩增PCR：建立cDNAcDNARNA原位PCR：可检测细胞内病毒感染、细胞内基因重排、以及分析细胞内RNA用，在检测细胞的潜在感染方面也具有重要意义。8)PCR过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。试述细胞周期各时相中cyclins的表达规律。G1M胞周期素。、G1G1G1/ScyclinC、cyclinDcy