临床免疫学与免疫检验绪论

教学目标与要求一、掌握临床免疫学与临床免疫检验的定义，掌握抗原、抗体及免疫细胞等免疫学基本要素的基本特征。二、掌握临床免疫检验在临床医学中的重要价值。三、熟悉临床免疫检验的现状。四、了解临床免疫检验中值得关注的几个问题。五、了解临床免疫检验的发展方向。当前第1页\共有80页\编于星期五\0点CongenitalHarelip当前第2页\共有80页\编于星期五\0点Causeofcongenitalharelip(1)nutrientdeficiency:vitamindeficiency(2)medicinetherapy:suchasaspirinandhormone.(3)depression(4)geneticfactors.

(5)infection:suchasrubellavirus.(6)otherfactors:suchasradioactivitysubstance,smokinganddrinketc.当前第3页\共有80页\编于星期五\0点TORCH感染T：弓形虫（toxoplasmagondii）O：其它病原微生物(others)R：风疹病毒（rubellavirus）C：巨细胞病毒（cytomegalovirus）H：单纯疱疹病毒（herpessimplexvirus）TORCH感染病原体常可通过胎盘传给胎儿，引起围生期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍等各种异常结果。当前第4页\共有80页\编于星期五\0点当前第5页\共有80页\编于星期五\0点如何发现TORCH感染呢？

临床免疫学检验！临床分子生物学检验！病原体分离、培养与鉴定！当前第6页\共有80页\编于星期五\0点免疫学（Immunology）研究免疫系统的结构与功能,研究免疫应答的机制,研究有效的免疫措施,实现以防病、治病为目的的一门现代生命科学。感染性疾病疫苗肝脏疾病肿瘤

……当前第7页\共有80页\编于星期五\0点临床免疫学澳大利亚于30年前即成立了临床免疫学科,将临床免疫学工作定为三种形式,即(1)临床诊断和治疗,(2)临床实验免疫学,(3)前两者兼而有之。英国将临床免疫学定义为“对那些在发病或治疗过程中涉及免疫系统的疾病的诊断和处理工作”。临床免疫学是将免疫学基础理论与免疫学技术相结合,用于研究临床疾病的发病机制、诊断与鉴别诊断、治疗与预后判断等领域的新兴的边缘学科。当前第8页\共有80页\编于星期五\0点临床免疫学范畴临床免疫检验内科免疫学外科免疫学儿科免疫学生殖免疫学感染免疫学移植免疫学免疫病理学……当前第9页\共有80页\编于星期五\0点临床免疫检验

(Clinicalimmunoassay)采用免疫学的技术与方法检测人体内的免疫活性物质或其它生命化学物质,为临床疾病的诊断，治疗方案的选择以及疾病的预后判断提供有效的实验室依据.当前第10页\共有80页\编于星期五\0点SwineInfluenzaA(H1N1)outbreakVirusisbeingdescribedasanewsubtypeofA/H1N1notpreviouslydetectedinswineorhumans当前第11页\共有80页\编于星期五\0点SwineFlu:CaseDefinitionsSource:AmericanCDC当前第12页\共有80页\编于星期五\0点

学好临床免疫检验，必须掌握“一个核心，三个要素与四个标记”。一个核心：抗原抗体反应(Antigen-antibodyinteraction)三个要素：抗原、抗体和免疫细胞四个标记：酶标记技术、放射免疫标记技术、荧光素标记技术与化学发光标记技术。当前第13页\共有80页\编于星期五\0点抗原（Antigen）抗原：能够刺激机体免疫系统产生抗体和致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。蛋白质脂多糖核酸等当前第14页\共有80页\编于星期五\0点抗原的基本特性免疫原性(Immunogenicity):指抗原能够刺激机体免疫系统产生抗体和致敏淋巴细胞等免疫活性物质的特性.抗原性(Antigenicity):指抗原能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的特性。当前第15页\共有80页\编于星期五\0点抗原特异性的物质基础是抗原决定族（Antigenicitydeterminant）抗原决定族：指存在于抗原表面决定抗原特异性的特殊化学基团。是TCR/BCR及抗体特异性结合的基本单位，启动免疫应答，又称表位（epitope）。其化学性质、数目和空间构象决定了该抗原的特异性和免疫原性的强弱。当前第16页\共有80页\编于星期五\0点当前第17页\共有80页\编于星期五\0点抗体

定义：抗体（Antibody，Ab）是机体在抗原刺激下，由浆细胞合成与分泌的，能与抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。基本结构（1）四肽链（2）NH2-端和COOH-端（3）V区与C区当前第18页\共有80页\编于星期五\0点当前第19页\共有80页\编于星期五\0点可变区(variableregion):即VL和VH,位于Ig分子的N端,,该区氨基酸组成与排列顺序有较大差异,并决定Ag与Ab的特异性.高变区(Hypervariableregion):VL和VH中3个区域氨基酸组成与排列顺序特别容易变化,又称互补决定区(CDR),此乃Ag与Ab特异性结合的部位.恒定区(Constantregion):同一种属中,恒定区氨基酸组成与排列顺序恒定.当前第20页\共有80页\编于星期五\0点当前第21页\共有80页\编于星期五\0点多克隆抗体

（polyclonalantibody）用含多种抗原决定族的抗原物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清（含多种单克隆抗体的混合物），此为多克隆抗体当前第22页\共有80页\编于星期五\0点单克隆抗体

（monoclonalantibody,McAb）借助小鼠B细胞杂交瘤（hybridoma）技术，所制备的高度均一（属同一类、亚类、型别）、单一特异性（仅针对特定抗原表位）的抗体。

当前第23页\共有80页\编于星期五\0点当前第24页\共有80页\编于星期五\0点基因工程抗体

（EngineerAntibody）借助于基因重组技术和蛋白表达技术,按照人们的意愿在基因水平对Ig进行切割、连接或修饰，组装成新颖Ab分子，称为基因工程抗体。当前第25页\共有80页\编于星期五\0点鼠IgG的DNA人IgG的DNA

VmCmVhCh

VmCh

鼠源性单抗的V区，人Ig的C区。

人-鼠嵌合抗体(chimericantibody)

当前第26页\共有80页\编于星期五\0点免疫细胞免疫细胞:包括所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前体细胞.如造血干细胞、淋巴细胞，肥大细胞以及红细胞等。免疫活性细胞：具有特异性抗原受体，被抗原刺激后能活化、增殖、分化并产生免疫物质，发生特异性免疫应答的细胞。当前第27页\共有80页\编于星期五\0点免疫细胞具有不同的表面标志

B细胞T细胞BCRTCRCD19、CD21和CD81CD3，CD4或CD8

CD40CD40LB7CD28补体受体CD2丝裂原受体丝裂原受体……

……

当前第28页\共有80页\编于星期五\0点当前第29页\共有80页\编于星期五\0点免疫细胞数目的检测免疫细胞功能的检测免疫细胞的分离当前第30页\共有80页\编于星期五\0点二、临床免疫检验在临床医学中具有重要价值当前第31页\共有80页\编于星期五\0点疾病的诊断疗效的观察复发的评估预后的判断当前第32页\共有80页\编于星期五\0点hepatitisCausesofhepatitisViralHepatitis,A,B,C,D,E,F,G,TTVetc.Otherviruses-CMV,EBV,HSV,Dengueetc.DrugsAlcoholIschaemiaSystemicDiseasesandInfections当前第33页\共有80页\编于星期五\0点HBVserologicmarker当前第34页\共有80页\编于星期五\0点SLE(Systemiclupuserythematosus)SLEisanautoimmunediseasecharacterizedbyimmunedysregulationresultingintheproductionofantinuclearantibodies(ANA),generationofcirculatingimmunecomplexes,andactivationofthecomplementsystem.InSLEthereisapredilectionforclinicalinvolvementofthejoints,skin,kidney,brain,serosa,lug,heartandgastrointestinaltract.

Butterflyerythema当前第35页\共有80页\编于星期五\0点TheAmericanRheumatologyAssociation(ARA)criteria

当前第36页\共有80页\编于星期五\0点ANA

当前第37页\共有80页\编于星期五\0点ArealstoryabouttumormarkerCharacter:ApastcolleagueworkingintheUniversityofAlabamaatBirmingham.Hydatidiformmole(葡萄胎)?Suggection:TimeThefrequencyofdetectingβ-hCGFirstthreemonth1/weekNextninemonth1/monthNextyear1/halfyear当前第38页\共有80页\编于星期五\0点当前第39页\共有80页\编于星期五\0点HIVandAIDS当前第40页\共有80页\编于星期五\0点CD4+CellcountandCD4+/CD8+InpatientswithAIDS,totalTcellsand

CD4+Cellsdecreasesignificance(<1.5×109/Land<2.0~4.0×108/L,furthermore,

CD4+/CD8+<1.0.)Monitorcurativeeffect.当前第41页\共有80页\编于星期五\0点当前第42页\共有80页\编于星期五\0点当前第43页\共有80页\编于星期五\0点对应的章节二十二章:感染免疫及其免疫检测二十三章:超敏反应疾病及其免疫检测二十四章:自身免疫性疾病及其免疫检测二十五章:免疫增殖性疾病及其免疫检测二十六章:免疫缺陷性疾病及其免疫检测二十七章:肿瘤免疫及其免疫检测二十八章:移植免疫及其免疫检测当前第44页\共有80页\编于星期五\0点三、临床免疫检测的现状近年来，随着生物学、基础医学和计算机技术，特别是单克隆抗体技术与免疫标记技术的快速发展，免疫学检验取得了明显的进步，大量新的检测方法及检测指标不断出现，并向自动化、微量化及定量化方向飞速发展.当前第45页\共有80页\编于星期五\0点早期的免疫检验方法逐渐退出检验市场。免疫标记技术在免疫检测中占主导地位。免疫检验自动化已逐渐普遍。免疫检验的对象不断增加。当前第46页\共有80页\编于星期五\0点早期的免疫检验方法逐渐退出检验市场早期的一些免疫学检测技术，常通过肉眼观察是否有沉淀、凝集以及溶血现象的发生来进行免疫学分析，如免疫扩散、凝集实验以及经典的补体结合反应等，尽管这些方法具有成本低廉，操作简单等优点，但是大部分只是半定量、定性实验，且需要耗费较长时间，越来越难以满足临床诊断的需要，已慢慢地被随后发展起来的各种先进的免疫学检测技术所代替。当前第47页\共有80页\编于星期五\0点凝集反应（Agglutinationreaction）当前第48页\共有80页\编于星期五\0点当前第49页\共有80页\编于星期五\0点免疫标记技术

在免疫检测中占主导地位

标记免疫技术:所谓免疫标记技术是将可微量检测的标记物，如放射性核素、荧光素以及酶等，标记一定的抗原或抗体，用以检测未知的抗体或抗原,如放射免疫技术,酶标记免疫技术,荧光素标记免疫技术等.当前第50页\共有80页\编于星期五\0点当前第51页\共有80页\编于星期五\0点FIGURE6-15Separationoffluorochrome-labeledcellswiththeflowcytometerwhichusesalaserbeam&lightdetector.:differentAgindifferentcells/differentlevelsofAginthesametypeofcell→fluorescenceintensity/thesizeofcells.labeledwithfluorescein(green)labeledwithrhodamine(red)eachdotrepresentsacell(smallelectricalchange)(excitingthefluorochrome)↓eachdroplet(cell)emitsthefluorescence10.Flowcytometry&Fluorescence当前第52页\共有80页\编于星期五\0点免疫检验自动化已逐渐普遍免疫自动化分析是指用自动化仪器对待测物进行分析，它应包括两方面的内容：一是加样、测定以及仪器洗涤的自动化；二是数据处理的自动化。当前中国已能见到一系列的全自动免疫分析仪，

当前第53页\共有80页\编于星期五\0点当前第54页\共有80页\编于星期五\0点免疫自动化分析与传统的手工操作

相比较具有明显的优势

免疫自动化分析快速、标本报告时间缩短，一般数小时内即可向临床汇报检验结果。免疫自动化分析尤适用于大批量样品的测定，可节约大量的人力、物力，而且同一标本可同时用于检测几种待测物，血清用量少，通常以μl计。免疫自动化分析重复性好、干扰因素少，结果判断更加准确、客观，更有利于质量控制。免疫自动化分析能够避免标本对人的感染及标本之间的相互污染。当前第55页\共有80页\编于星期五\0点免疫检验的对象不断增加

经典的免疫活性物质其它生命化学物质IgGCERIgMTrfIgACRPC3AATC4α1MG当前第56页\共有80页\编于星期五\0点

HAPATITISCANCERFERTILITYPROTEINSTDMs/DRUGSTYROID,ANEMIAHBV

HCVM1071010-1510-4

g/L

AFPFERCEACA199PRLHCGLHFSHGHMyoglobinRHFIgGC3ASOCERTRFAAGQUIGENAMIPHYFT3FT4DigT3T4TSHProg

免疫分析谱当前第57页\共有80页\编于星期五\0点对应的章节第二章~二十二章当前第58页\共有80页\编于星期五\0点四、临床免疫检验中

值得关注的几个问题临床免疫学检验如何快速应对重大突发性传染病？蛋白芯片用于免疫检测值得期待。应建立有免疫检验特色的质量控制体系。

当前第59页\共有80页\编于星期五\0点免疫学检验如何快速应对重大突发性传染病？近年来，重大突发性传染病偶有发生，如SARS，禽流感以及猪链球菌感染等。这些疾病不仅严重危害人体健康，而且具有极高的传染性。如何尽快准确地为临床提供病原体感染的标志物，成为广大医学检验工作者的重要任务。由于单克隆抗体的飞速发展，众多的床旁测试也采用免疫学检测，如HCG、HBsAg以及TB-AB的检测等。因此建立重大突发性传染病的快速检测或床旁测试试剂值得免疫学检验工作人员的关注。当前第60页\共有80页\编于星期五\0点SARS（severeacuterespiratory

syndrome）病原体的确定与检测现状当前第61页\共有80页\编于星期五\0点电子显微镜发现为

某种冠状病毒当前第62页\共有80页\编于星期五\0点基因组测序锁定为

新型冠状病毒当前第63页\共有80页\编于星期五\0点复制出相应的动物模型当前第64页\共有80页\编于星期五\0点建立新的检测方法PCR法间接免疫荧光法ELISA当前第65页\共有80页\编于星期五\0点当前第66页\共有80页\编于星期五\0点快速免疫检验与重大突发性传染病当前第67页\共有80页\编于星期五\0点过敏原千千万???当前第68页\共有80页\编于星期五\0点蛋白芯片用于免疫检测值得期待蛋白芯片是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面行成微阵列，根据蛋白质分子间特异性结合的原理，构建微流体生物化学分析系统，以实现对生物分子的准确、快速、大信息量的检测。当前第69页\共有80页\编于星期五\0点当前第70页\共有80页\编于星期