补体的检测及应用

（优选）补体的检测及应用当前第1页\共有30页\编于星期三\15点第四节补体受体的测定第五节补体测定的应用

思考题小结当前第2页\共有30页\编于星期三\15点补体：具酶样活性、不耐热的糖蛋白其存在与抗原性异物的刺激无关在正常人血清中含量相对稳定某些疾病时，含量及其活性可发生改变可辅助抗体发挥溶细胞作用。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是体内具有重要生物学作用的效应放大系统。当前第3页\共有30页\编于星期三\15点补体不是单一成分，其在功能效应上是以连续反应的程序进行的，故又称为补体系统。当前第4页\共有30页\编于星期三\15点1.补体系统的组成（1）补体固有成分：存在于体液中，参与补体激活过程的补体成分。（2）补体调节蛋白：指参与调控补体活化的抑制因子或灭活因子。（3）补体受体：是清除免疫复合物，净化机体内环境的重要膜性成分。一、补体系统当前第5页\共有30页\编于星期三\15点2.补体成分的含量补体大多为糖蛋白，属β球蛋白，

C1q、C8等为γ球蛋白，C1S、C9为α球蛋白。正常血清中各补体成分成分含量相差较大。当前第6页\共有30页\编于星期三\15点3.补体理化性质由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因子含量最低固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最小。对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10°C条件下活性只能保持3～4d。多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加剂等均可破坏补体当前第7页\共有30页\编于星期三\15点补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）C1q390γ270C979α240C1r95β35B95β210~240C1s85α35D25α2C2117β120~30P220γ225C3190β11300C1INH150α180C4180β2430~600C4bp1100250C5190β275I因子93β50C6128β260H因子159β400~480C7120β255S因子88α500C8163γ1200当前第8页\共有30页\编于星期三\15点经典途径补体的活化途径当前第9页\共有30页\编于星期三\15点当前第10页\共有30页\编于星期三\15点经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相关的丝氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物学作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用三种途径比较当前第11页\共有30页\编于星期三\15点二、补体的生物学作用1.补体的细胞溶解作用；2.调理和免疫粘附作用；3.炎症介质作用；4.清除免疫复合物的作用；5.免疫调节作用。当前第12页\共有30页\编于星期三\15点第一节补体结合试验补体结合试验(complementfixationtest，CFT)

将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法。当前第13页\共有30页\编于星期三\15点试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定。5种成分，3个系统反应系统：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）补体系统指示系统：SRBC与相应溶血素。试验时常将其预先结合，成为致敏绵羊红细胞（sensitizedsheepredbloodcell,SRBCS）。当前第14页\共有30页\编于星期三\15点反应分两步进行

第一步:反应系统与补体的作用

第二步:指示系统利用剩余补体的反应不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性当前第15页\共有30页\编于星期三\15点试验虽然敏感度高，特异性强，但缺点较多：1.参与反应的5种成分必须逐步仔细滴定,否则难以取得预期效果,操作麻烦;2.补体不稳定,难以标准化;3.抗体或抗原可能有抗补体作用,所以,目前临床上已很少用.当前第16页\共有30页\编于星期三\15点第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，称为CH50补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体途径基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目）应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规）MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立当前第17页\共有30页\编于星期三\15点（一）CH50测定法的原理

应用绵羊红细胞（sheepredbloodcell,SRBC）和其相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性。当前第18页\共有30页\编于星期三\15点溶血程度与补体含量的关系

在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关系呈现“S”形曲线在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化对溶血程度的影响不大，即溶血对补体量的依赖不敏感。但在30％～70%溶血时，补体含量仅出现较小的变动，溶血程度也会发生较大的改变当前第19页\共有30页\编于星期三\15点（二）CH50测定方法1.红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使用前，调制成2%～5%SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。

当前第20页\共有30页\编于星期三\15点2.溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化试验前需先行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活性测定中，大多使用2个单位。溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定当前第21页\共有30页\编于星期三\15点

3.稀释缓冲液4.50%溶血标准管

5.50%溶血总补体值的计算当前第22页\共有30页\编于星期三\15点（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关。总补体活性的参考范围为50～100U/mlCH50增高见于：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等。CH50降低见于：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎、急性肾小球肾炎等，细菌感染，尤其是G-感染时，严重肝病、肝坏死时降低。当前第23页\共有30页\编于星期三\15点（四）APH50测定未致敏的家兔Rbc可激活血清中的B因子，引起旁路途径活化，导致家兔Rbc溶解，当Rbc量一定时，在规定的时间内，溶血程度与血清中参与旁路激活的补体量及活性呈正相关。

当前第24页\共有30页\编于星期三\15点第三节单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等测定方法：免疫溶血法（检测单个补体成分的活性）免疫化学法（检测单个补体成分的含量）自动化免疫散射比浊法当前第25页\共有30页\编于星期三\15点一、C3含量测定单向琼脂扩散试验（目前常用免疫比浊法测定C3含量）

C3含量的参考范围为：男性0.86—2.52g/L；女性0.86—2.06g/L；C3含量降低见于：反复感染，急性肾小球肾炎，免疫复合病和膜增生性肾小球肾炎。当前第26页\共有30页\编于星期三\15点二、C4活性测定免疫溶血法；C4活性的参考范围为：7898.67±1893.40U/mlC4含量降低见于：遗传性血管性水肿发作时，C4含量极低（先天性补体C4缺陷）；原发性混合性冷球蛋白症患者C4降低。当前第27页\共有30页\编于星期三\15点第五节补体受体的测定补体受体：

存在于多种细胞清除免疫复合物、净化机体内环境检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计数相应的细胞数量当前第28页\共有30页\编于星期三\15点补体测定的应用补体相关试验：

诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰）HLA分型的补体依赖性细胞毒试验抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验抗体形成细胞