浅论吴茱萸及其炮制品中总酚酸含量测定

浅论吴茱萸及其炮制品中总酚酸含量测定【摘要】目的：建立吴茱萸中总酚酸含量的测定方法，测定吴茱萸及其炮制品中总酚酸的含量。方法：以绿原酸为对照品，用分光光度法在760nm处测定吸光度。体系中加入%十二烷基磺酸钠溶液2mL，1%铁氰化钾-1%三氯化铁(1∶1)混合液2mL，用/L盐酸溶液定容。结果：测定的两批吴茱萸药材中总酚酸的含量分别为%和%，经t检验差异没有统计学意义()。吴茱萸炮制品中以醋制吴茱萸总酚酸含量最高，其次为甘草制吴茱萸，其余炮制品中总酚酸的含量都明显低于生药中的含量，经t检验，差异均有统计学意义()。结论：吴茱萸经不同方法炮制后总酚酸的含量不同。所用检测方法简便、准确、快速，可作为吴茱萸中总酚酸含量的测定方法。

【关键词】吴茱萸;总酚酸;炮制品

【ABSTRACT】Objective:ToestablishamethodfordeterminingthecontentsoftotalphenolicacidinEvodiarutaecarpa(Juss.)Benthanditsprocessed:Totalphenolicacidwasdeterminedbythemethodofspectrophotometryat760nmwithchlorogenicacidasreferencethesystematicsolution,%dodecylsulfonicacisodiumsalt2mL,andmixedsolutionwith1%K3[Fe(CN)6]1%werealsoFeCl3(1∶1)/Lhydrochloricacidwasaddedtothesolutiondilutedto:Thecontentsoftotalphenolicacidwere%and%.inthetwokindsofEvodiarutaecarpa(Juss.)Benth,therewasnonotabledifferencebyttest().Thecontentsoftotalphenolicacidwasthehighestinitsprocessedproductbyvinegar,thesecondwasliquorice,theotherswerenotablelowerthanEvodiaru

taecarpa(Juss.)Benth,therewasnotabledifferencebyttest().Conclusion:Thecontentsoftotalphenolicacidweredifferentinitsdifferentprocessedmethodwassimple,accurateandwasabettermethodtodeterminethecontentsoftotalphenolicacidinEvodiarutaecarpa(Juss.)Benth.

【KEYWORDS】Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth,Totalphenolicacid,Processeddrugs

吴茱萸[Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.]又名淡茱萸、吴萸，是芸香科植物吴茱萸接近成熟的果实。吴茱萸性味辛、苦、温，入肝、肾、脾、胃经。有温中散寒、疏肝理气、降逆止呕、燥湿定痛、抑菌、驱蛔、抗血栓形成、利尿、抗肿瘤、抗缺氧、镇痛、升高体温等作用。吴茱萸气味芳香，有小毒，临床上多炮制后入药。

吴茱萸中含有多种有效成分，但有关吴茱萸中总酚酸方面的研究报道少见。据文献报道[13],总酚酸具有抗血栓形成、溶纤和抗脂质过氧化的作用，是治疗心肌缺血、心绞痛、心肌梗死等心血管疾病的有效成分。我们以铁氰化钾三氯化铁混合液为显色剂，绿原酸为对照品，用分光光度法测定吴茱萸及其炮制品中总酚酸的含量，为全面了解吴茱萸提供参考依据。

1材料与方法

仪器与试药

752紫外可见分光光度计

绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，编号：110753200413)

乙醇、铁氰化钾、三氯化铁、盐酸、十二烷基硫酸钠均为分析纯试剂。

实验方法

对照品溶液的制备精确称取绿原酸对照品，用95%乙醇溶解，定容为，得/mL绿原酸对照品溶液。

供示品溶液制备精密称取吴茱萸生药和各种炮制品约，均精密称定，用50mL蒸馏水浸泡4h，沸水浴提取三次，提取时间分别为40min，20min，20min，提取液合并(包括残渣)，置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，取20mL续滤液备用。

吴茱萸炮制品制备

(1)醋炙吴茱萸:吴茱萸按10∶3(g∶g)加米醋浸透,文火炒干。

(2)盐炙吴茱萸：吴茱萸按10∶2(g∶g)加盐水(浓度为15%)喷匀，闷润至柔软，微火炒干。

(3)甘草炙吴茱萸：吴茱萸按10∶(g∶g)称取甘草片，浸泡20min，第一煎加8倍量水，煮沸后保持30min;第二煎加5倍量水，煮沸后保持25min。二煎滤液合并，浓缩，趁热拌入吴茱萸，闷润，翻拌，至汁液全部吸尽，个身膨起，文火炒干。

(4)汤洗7遍：用热水洗7遍，自然晾干。

(5)汤洗7遍后干燥：用热水洗7遍后文火炒干。

(6)酒炙吴茱萸：净吴茱萸按10∶2(g∶g)加黄酒浸透,文火炒干。

(7)姜炙吴茱萸：净吴茱萸按10∶1(g∶g)称取鲜姜，捣烂，加少许水，取汁，拌入吴茱萸浸透，微火炒干。

总酚酸测定方法

精密吸取供试品溶液适量，置于25mL容量瓶中，加无水乙醇至5mL，加入%十二烷基磺酸钠溶液2mL，1%铁氰化钾-1%三氯化铁(1∶1)混合液2mL，摇匀，暗处放置5min，加/L盐酸溶液至25mL，摇匀，暗处放置20min，平行空白，在760nm处测定吸光度。

2009年10月甄攀等：吴茱萸及其炮制品中总酚酸含量测定第5期2009年10月河北北方学院学报(医学版)第5期

2结果

吸收曲线

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各适量，按总酚酸测定方法显色后，从400nm到800nm扫描，每隔10nm(峰值时隔2nm)读一次吸光度。以吸光度为纵坐标，波长为横坐标作图，得到吸收曲线(图1)。在760nm处有较大吸收，因此选定760nm作为检测波长。

图1对照品和样品的吸收曲线

1.样品2.绿原酸对照品工作曲线

精密称取绿原酸，用无水乙醇定溶至10mL,分别精密吸取50、100、200、300、400、500μL，按法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，绿原酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=+，r=，在～μg/mL范围内呈线性关系。

显色稳定性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各适量，按总酚酸测定方法显色后，分别于5、10、15、20、25、30、35、40min测定吸光度。吸收值随放置时间的延长有明显减小的趋势，但在40min内基本稳定，RSD=%。显色后尽可能在30min内完成测定。

精密度试验

精密吸取对照品溶液适量，按总酚酸测定方法显色后，于760nm测定吸光度。吸光度的RSD=%，精密度较好。

重复性试验

分别称取同一批生吴茱萸6份，每份约为，精密称定，按法制成供试品溶液，分别吸取360μL于6个25mL容量瓶中，按方法测定吸光度，利用工作曲线计算总酚酸含量，RSD为%，说明方法的重复性较好。

回收率实验

样品与标准品以1∶1，2∶1，4∶1混合，按方法测吸光度，计算回收率，分别为%、%、%，平均回收率为%，RSD为%。

含量测定

吴茱萸生药总酚酸含量测定实验中测定了两批吴茱萸总酚酸的含量。分别称取吴茱萸，精密称定，各3份，按方法制成供试品溶液，然后取25mL滤液稀释至50mL，取1mL上样，按方法测定含量，结果如表1。表1吴茱萸生药总酚酸含量

吴茱萸炮制品中总酚酸的含量测定分别精密称取吴茱萸炮制品约，精密称定。按法制成供试品溶液，然后取，按方法测定含量(见表2)。表2炮制后吴茱萸中总酚酸含量

3讨论

测定的两批吴茱萸药材中总酚酸的含量分别为%和%，经t检验差异没有统计学意义()。吴茱萸炮制品中以醋制吴茱萸总酚酸含量最高，为%，其次为甘草制吴茱萸，为%，其余炮制品中总酚酸的含量都明显低于吴茱萸生药中的含量，经t检验，这些炮制品中总酚酸的含量与生药相比差异都有显着性意义(),说明这些炮制方法使酚酸类成分损失严重。

测定总酚酸时，为了后续研究的需要，使用了绿原酸对照品，使得总酚酸含量数值较高。为了说明这个问题，实验中又使用没食子酸为对照品进行了校对，发现没食子酸的显色灵敏度提高约10倍，回归方程为A=+(r=)。因此，如果以没食子酸表示，吴茱萸1中总酚酸的含量为%，吴茱萸2中总酚酸的含量为%。说明以不同的对照品表示，同一药品中总酚酸的含量不同，与文献[5，6]报道一致，可能是绿原酸和没食子酸所含的酚羟基数目不同造成的。

【参考文献】

1年国侠，黄正明，杨新波，等.水芹总酚酸对小鼠CCl肝损伤的保护作用[J].解放军药学学报，2008,24(6):501

2李玉红,徐强,高秀梅,等.丹酚酸与三七总皂苷不同配比对大鼠离体心脏冠脉流量的影响[J].天津中医药大学学报，2008，27(4):261

3王丽君，张鑫毅，廖矛川.紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠大鼠的抗早孕作用[J].中国中药杂