血清学检验技术-中和试验（动物疫病检验技术）

中和试验概述01中和试验的概念中和试验的概念中和试验指病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力的试验方法。中和试验的概念优点：敏感性和特异性高，中和抗体在体内存在时间长，大多数病毒的中和抗体与免疫力有直接关系。缺点：要使用活的宿主系统，病毒对宿主系统产生作用需要一定的时间。01诊断病毒性传染病02检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型03测定抗病毒血清或抗毒素效价04新分离病毒的鉴定和分型中和试验的概念02中和试验的分类中和试验的分类简单定性中和试验固定血清稀释病毒法固定病毒稀释血清法空斑减少法用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。先根据病毒易感性选定试验动物及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度。污染的病料需加抗生素，或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素的鉴定和分型。

简单定性中和试验本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清(对照组)，第二列加待检血清(试验组)。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3-5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数，本法适用于大量样本的检测。对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10-49为可疑，小于10为阴性。

固定血清稀释病毒法本法用以测定抗病毒血清的中和价.将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液(与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50)，摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物后观察。固定病毒稀释血清法先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个-100个PFU(空斑形成单位)，与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h-2h；分别测定PFU，使空斑减少50%血清稀释度即为该血清的中和价。空斑减少法猪伪狂犬病中和试验

01猪伪狂犬病概述猪伪狂犬病病毒猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）可以引起牛、羊、猪、犬和猫等多种家畜和野生动物发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状。猪伪狂犬病概述02猪伪狂犬病中和试验试验目的了解中和试验的基本原理，掌握固定病毒稀释血清法的操作步骤和计算方法及含义。猪伪狂犬病中和试验试验原理中和试验是病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力的试验方法。猪伪狂犬病中和试验试验仪器及材料长满单层的细胞、胰酶、吸球、吸管、生长液、96孔细胞培养板、加样器、枪头、200TCID50病毒液(PRV)、待检血清、阳性血清、阴性血清。猪伪狂犬病中和试验1423制备200个TCID50的PRV病毒悬液试验操作方法试验结果计算试验注意事项试验方法猪伪狂犬病中和试验制备200个TCID50的PRV病毒悬液测定PRV病毒液的TCID50，将测好TCID50病毒液稀释成200个TCID5的病毒悬液。猪伪狂犬病中和试验猪伪狂犬病中和试验猪伪狂犬病中和试验按Reed-Muench两氏法或Karber法进行结果计算1试验注意事项病毒应低温保存，融化后只可使用一次，避免反复冻融。234血清中含有一些非特异性的物质，通常采用加