无菌检查方法的验证

无菌检查方法的验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要工程和准确的根底，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2023版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和简洁觉察问题的区域。验证要求与方法无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，依据预定验证方案进展的验证。假设没有充分的理由，任何检查方法必需进展前验证。有发生飘移而进展的重验证及对检查方法进展修订、转变时进展的验证。求确定是否需要进展前处理;然后依据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最终验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培育条件等均不影响样品中微生物的生长。这里，验证的重点环节包括：前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点生物生长的影响。具体的验证方法如下：菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的掌握菌的标准菌株同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003[CMCC(B)64941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98001]代表酵母菌、黑曲霉菌[CMCC(F)98003]代表霉菌。菌液的制备养分琼脂培育基上，接种生孢梭菌的颖培育物至硫乙醇酸盐流体培育基中，30~35℃培育18~24h;接种白色念珠菌的颖培育物至改进马丁培育基中或改进马丁琼脂培育基上，23~28℃24~48h0.91ml100cfu菌悬液。接种黑曲霉的颖培育物至改进马丁琼脂斜面培育基上，23~28℃培育5~7天，参加3~5ml0.05%(ml/ml800.9的方法吸出孢子悬液至无菌试管内0.05%(ml/ml800.9%无菌氯化钠溶1ml100cfu样品的前处理即可，而不必像样品日常检测中按规定的容器数取样。是有效的，并且其使用对微生物生长无影响;或者制备过程中需要对样品进展加热助溶、离需前处理的样品免做。消退样品抑菌性的方法稀释，用直接接种法验证，常用中性稀释液或淋洗液。对于具有抑菌性样品的验证方法，首先确定样品的抑菌作用(抑细菌、真菌试验验证)，选择敏感标准菌株对供试品抑菌活性去除效果检查(阳性菌回收试验)。常用的消退样品抑菌活性的方法如下：稀释法：利用降低供试品的相对浓度，将样品稀释至最低抑菌浓度下进展。如：取规定量的样品溶液至较大量的培育基中，使单位体积内的样品含量削减，至不含抑菌作用。薄膜过滤法：利用体积差异分别，通过薄膜过滤，微生物被截于滤膜无微生物生长。通常薄膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50?mm，假设承受其他直径的滤供试液其滤膜和滤器在使用前应充分枯燥。供试液经过滤膜过滤后，假设需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100?ml。1000ml。化学中和法：利用化学(生物)专属性灭活，常用中和剂或灭活方法有：对氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80β-内酰胺酶。强的中西药制剂。3样品组：选择以上适当的方法中和样品，参加少量验证微生物(接种量少于100?cfu)。比照组：0.1%蛋白胨或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100?cfu)。阳性比照组：将试验菌株直接接种于培育基中(接种量少于100cfu)。最终结果分析如下：样品组与比照组微生物生长数量相像因素。为考察验证方法的稳定性和重现性，验证至少需3个不同批次的同类样品，分别进展3次验证试验。无菌检查方法验证试验设计洗，在最终一次的冲洗液中参加小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培育或改进马丁培育基中，或将培育基加至滤桶内。另取一装有同体积培育基的容器，参加等量试验菌，作为比照。依据药典的要求的温度和时间进展培育。8管，分别接100cfu2接接种法培育基用量要求的改进马丁培育基4100?cfu211要求的温度和时间进展培育。结果推断证。GMP是产品本身的抑菌性，检查方法的选择，是直接接种法还是薄膜过滤法等。无菌检查方法验证的硬件是否具备及是否已经进展了相关确实认状况等，智能集菌器、全封闭无菌试验过滤培育器的型号、性能，滤膜是否符合规定等。无菌检查中偏差的处理是否真的找到了根本缘由检查并依据的检查结果放行产品。验证的方法与无菌检查操作规程和无菌检查记录是否完全全都检查环境、试验耗材均需与实际检查操作规程及验证过程完全相符。为了考察验证方法的稳定性和重现性，验证时是否至少承受了3个不同批次的同类样3组和阳性比照组的验证确认。除非样品不能承受过滤的方法(难溶解)，企业是否承受全封闭的薄膜过滤法。菌液的保存条件和保存期限是否符合药典的要求料。无菌检查的留意事项培育基的适用性检查包括培育基的无菌性检查和培育基的灵敏度检查。中国药典附录中规定的检验数量不包括阳性比照用样品量，虽然附录另处有特地说明，仍旧简洁无视。大量的样品;工作菌株的传代次数不得超过5代，以防止过度的传代增加菌种变异的风险。这里“被认为是转种或传代一次。菌液参加，按规定应在最终一次冲洗液中参加阳性菌液，主要是考虑过滤器的有效性。过滤器的有效性应由供给企业掌握，用户可承受适当方法抽查(如检查阳性菌液通过滤筒的流出液)。试验室菌种的处理和保存的程序应标准化，以尽可能削减菌种污染和变异。间不能太长。菌液制备后假设在室温下放置，应在2?h2～8℃，24?h2～8℃，在验证过的贮存期内使用。的特性，如能承受过滤的方法均应承受薄膜过滤法检查。滤膜对样品的吸附，削减冲洗量，进而削减微生物的