4定量的细胞化学分析技术有( ),( )等

《细胞生物学》题库参考答案第三章细胞生物学研究方法一、名词解释分辨率离称为分辨距离。分辨距离越小，分辨率越高。一般规定：显微镜或人眼在25cmμm;光学显微镜的最大分辨率是0.2μm。荧光(fluorescence红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光;第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光，称为诱发荧光。荧光显微镜(Fluorescencemicroscope)：以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发吸收、运输、化学物质的分布及定位等。相差显微镜(Phasecontrastmicroscope)：相差显微镜是荷兰科学家Zermike于1935相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能:①将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开;②将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。放射自显影(autoradiography)：放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α 或β 粒子)作用于感光材料的卤化银晶体，从而产生潜影，这种潜影可用显影显示，成为可见的“像，因此，它是利用卤化银乳胶显像检查和测量放射性的一种方法。放射性核素的原子不断衰变，当衰变掉一半时所需要的时间称为半衰期。各种放射性核素的半衰期长短不同(表)，在自显影实验中多选用半衰期较长者。对于半衰期较短的核素，应选用较快的样品制备方法，所用剂量也应加大。扫描电子显微镜(scanningelectronmicroscopy，SEM)：1965扫描透射电子显微镜(scanningtransmissionelectronmicroscopy，STEM)：既有透射电子显微镜又有扫描电子显微镜的显微镜。象SEM一样，STEM能够获得TEMSTEMTEMSEM高压电子显微镜(high-voltageelectronmicroscopy，HVEM)：同透射电子显微镜基本相同，只是电压特别高。TEM使用的加速电压是50～100kV，而HVEM使用的电压是1000kV1μmTEM10负染色(negativestainning)：用重金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的铸型技术(shadow反差的方法。基本过程包括:①将样品置于云母的表面，然后干燥;②在真空装置中将样品以扫描隧道显微镜(scanningtunnelingmicroscope，STM)：扫描隧道显微镜使用电子学(1nm以下)，针X和YZ字形扫描，可保持电流的恒定。酶细胞化学技术(enzymecytochemistry)：将细胞内的酶与底物相互作用，再将酶反作用下产生反应产物，经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。酶的细胞化学反应包括两个反应:第一反应是酶作用于底物的反应，称酶反应，形成的产物称为初级反应产物;第二反应是捕捉剂与初级反应产物的作用，称捕捉反应，产生最终反应产物：┌─────────酶的细胞化学反应─────────┐│ 酶＋条件 初级 捕捉剂 │底物─────────→反应产物───────→最终反应产物（酶反应） （捕捉反应）免疫荧光技术(immunofluorescence下检出，从而可对抗原进行细胞定位。免疫电镜(immunoelectronmicroscopy)：将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同，分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金染色体分选(chromosomesorting)：用流式细胞计分选特定的染色体，基本过程与细胞DNA然后与细胞分选过程一样将特异的染色体分选出来。显微分光光度术(microspectrophotometry术。它以物质分子的光吸收、荧光发射和光反射特性作为测定基础，可用来分析生物样品细微结构中的化学成分，同时进行定位、定性和定量。显微荧光光度术(microfluorometry(cytofluorometry对于研究细胞的结构、功能及其变化具有重要意义。18核磁共振技术(nuclearmagneticresonance，NMR)：核磁共振技术可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。核磁共振的基本原理是:原子核有自旋运动，在恒定的磁场中，自旋的原子核将绕外加磁场作回旋转动，叫进动(precession(NMR-spectrum)。由于不同分子中原化合物进行结构分析细胞工程技术(cellengineering转移、细胞及组织培养。原代培养(primaryculture)：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即愈伤组织(callus，在适宜的条件下，愈伤组织可再分化，形成芽、根，再生成植株。细胞融合(cellfusion)：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融(heterokaryon有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。单克隆抗体技术(monoclonalantibodytechnique)：1975MilsteinKohler所发明，并获得1984年诺贝尔医学奖。它是将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖将杂种细胞，并以此生产抗体的技术。其原理是:B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂;而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。显微操作术和微量注射的技术属显微操作技术。显微操作仪是在显微镜下对细胞进行显微操作的装置，可用于细胞核移植、基因注入、染色体微切和胚胎切割等手术。差速离心(differentialcentrifugation)：主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离到分离不同大小颗粒的目的。等密度离心(isodensitycentrifugation)：等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度。在这种离心分离方法中，要用介质产生一种密度梯度，这种密度梯度覆盖了待1%就可用此法分离。蔗糖或者甘油(它们的最大密度是1.3g/cm3心中梯度原理是不同的，在移动区带离心中梯度的惟一目的是减少样品的扩散，即使是在离心分离密度大于1.3g/cm3的样品，如DNA、RNA，需要使用密度比蔗糖和甘油大的介(CsCl:1.65g/cm3部为:1.75g/cm3。因为DNA的密度是1.70g/cm3，会停留在离心管的中部。层析分离技术分离方法。各种不同的层析方法都涉及共同的基本特点:有一个固定相和流动相，当蛋白质胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等是目前最常用的层析方法。凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)：凝胶过滤层析法又称排阻层析或分亲和层析(affinitychromatography)：将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的逆的，改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。基因工程(geneengineering微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。基因克隆(genecloning70为：分、切、连、转、选DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNADNADNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA是指通过特殊的方法将重组的DNADNADNA基因敲除(geneknockout)：是指一个有功能的基因通过基因工程方法完全被剔除的人工MarrioCapecchiUtah被敲除了功能基因的小鼠就称为敲除小鼠(knockoutmice)。基因敲除技术已成功地应用于等，因此是研究基因功能的一项非常有用的技术。基因敲除是一套组合技术，包括基因重组、细胞分离培养、转基因等核体（karyoplast）：胞膜的细胞核。胞质体（cytoplast）:细胞经处理排核后剩下的包有细胞膜的细胞质部分。细胞的培养(cellculture使之生存和生长的技术。贴壁生长：分散的细胞悬液在培养瓶中很快（几十分钟至数小时内）称为细胞贴壁。接触抑制（contactinhibition）：都将停止的现象。群体培养(massculture)：将含有一定数量的细胞悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合后生成单层细胞。克隆培养(clonalculture)后彼此距离较远，经过生长增殖，每个细胞形成一个生长集落。原代培养(primaryculture)：直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行的培养。有人将1-10代的细胞培养称为原代培养。继代培养(subculture)：在体外培养的条件下对细胞进行的持续传代培养密的细胞单层，这种培养方式称单层细胞培养。的转动，使培养细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。原代细胞（primarycell）：从机体取出后立即培养的细胞。传代细胞（subculturecell）:适应在体外培养的条件下持续传代培养的细胞。（cellstrain)定性质或标志的细胞群，在培养过程中其特征始终保持不变。细胞系（cellline）:在培养条件下可进行无限分裂的细胞群。培养的细胞类型：原代细胞和继代细胞；细胞株和细胞系；细胞培养物的名称：克隆、外植体和愈伤组织克隆(clone)：由单一祖先经过无性繁殖产生的遗传性一致的后代群体。外植体（explant）:取自成体或胚胎，用于体外培养的组织和细胞群二、填空题物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是自发荧光血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光;第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光。写出一种细胞融合的物理性方法电融合技术灭活的仙台病毒和聚乙二醇，PEG。染色体DNA的三种功能元件为着丝粒，端粒，复制起点。异染色质可分为质，兼型异染色质4定量的细胞化学分析技术有显微分光光度分析，流式细胞仪等。写出两种特殊显微镜的名称，如荧光显微镜，扫描隧道显微镜，相差显微镜。5.、、NADH、木质素、卟啉。三、选择题通过选择性或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志的细胞群体B 。A.CellLine B.CellStrain C.CellLibrary D.Others研究DNA在细胞中的代谢,常用的同位素标记物D 。A．14C-戊糖 B．32P-磷酸 C．15N-鸟嘌呤D.3H-胸腺嘧啶3.细胞融合的诱导剂主要有 A 。A.PEG(聚乙二醇) B.TMV(烟草花叶病)病毒C.亚硝酸-诱变剂 D.PHV(植物凝集素)-外围培养细胞培养技B 。可用来研究细胞生理和细胞各种功能首先用胰蛋白酶将动物或植物组织进行酶解,游离出单细胞再进行培养用小牛血清配制的培养基进行培养培养过程可用普通光学显微镜进行观察在杂交瘤技术中, B 。BB在培养基中加入氨基喋呤可选出杂交细胞氨基喋呤可抑制瘤细胞的蛋白质合成B光镜同电镜比较,下列各项中D 是不正确的。电镜用的是电子束,而不是可见光电镜样品要在真空中观察,而不是暴露在空气中电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色用于电镜的标本要彻底脱水,光镜则不必在动物细胞培养过程中要用 C 来进行观察。A.相差显微镜 B.荧光显微镜 C.倒置显微镜 D.普通光学显微镜在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是 D 。核糖体 B.线粒体 C.未破碎的 D.微粒体细胞核D。A.细胞是构成有机体的基本单位B.一切有机体均来自于细胞C.细胞是有机体生长发育的基础D.细胞具有遗传的全能性显微镜的分辨率与下列哪一项无关D A.光源的波长λ B.物镜的镜口角α C.介质的折射率n D.放大倍数四、问答题动物体细胞克隆有什么意义?物的体细胞具有全能性，而且有巨大的应用前景。例如结合转基因技术生产药物。现在很该项技术也可以生产供动物本身和人类器官移植的动物，解决器官捐赠长期缺乏的问题。什么是细胞培养，应注意哪些问题?答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术()即可进又使细胞的形态与功能不能与体内的同类细胞完全等同。体外培养细胞必需注意三个环节∶物质营养、生存环境和废物的排除。由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。为此，研究人员正在(如EGF)、促贴附物(如层粘连蛋白)和其它活性物质(如转铁蛋白)。无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。体外细胞培养必需模拟体内细胞生长的环境。环境因素主要是指∶无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。气体主要有两种∶O2

和CO2

。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。重要的。什么是细胞系和细胞株?答：原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cellline)，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系(finitecellline)，如可以连续培养，则称为连续细胞系(continuouscelll