兽医临床检验学

试验室常规、技巧与注意事项一、 器材准备和使用二、 化验室用水三、 试剂使用和管理四、 溶液浓度及其计算五、 试剂配制关于问题六、 样品测定关于策略七、 血液样品采取与保留SHAPE\器材准备和使用吸管使用方法吸官选择：大小规格，内径粗细，尖端孔径移取溶液时，先用所移取溶液润洗吸管内壁2〜3次，以确保溶液浓度不变、量准确。(洁净、烘干吸管无须!) 1、定量取液器使用方法1.要定时进行校准，失灵误差很大;2.选择规格大小适宜取液器；3.吸头应配匹，安装紧密；吸头洁净问题。4.正确握持取液器;5.吸收时将顶杆揿至第一位(不能揿至第二位!)，将吸头尖端浸至被吸收液体液面稍下，慢慢松开顶杆；6.排液时，将吸头尖端靠在承接溶液器皿侧壁，边将顶杆揿下经过第一位并直至第二位，边将吸头沿器皿壁轻轻上提；7.吸收黏滯性大液体时，可将吸头尖端切去小部分； 8.调整钮不得旋至超出最大允许容量；9.长时间不用时最好将调整钮调至最大容量刻度处；10.取液器不用时垂直挂放(吸有机溶剂，酸、碱溶液时更应注意）；11.不要像耍玩具一样往返抽动顶杆与旋转调整钮。2、容量瓶使用何时应使用容量瓶？1.容量瓶选择规格、刻线2.可先用溶剂荡涤容量瓶数次3.固体试剂放在小烧杯内溶解后，再转移入容量瓶，用玻棒导引，也可用漏斗。4.溶质要充分溶解，必要时加热或撹拌；用溶剂洗涤烧杯3〜4次，一并转入容量瓶中。5.当溶液盛至容积约3/4时，将容量瓶摇摆作初步混匀，再加至刻度。(最终逐滴加）6.观察刻度时，视线应与标线最低点相切。7.盖好容量瓶塞，将溶液充分混匀。8.从满容量瓶中取用溶液时，应先将颈段溶液注意:1.热溶液应在冷却至室温后，才能注入容量瓶中，不然会造成体积误差；2.不应将容量瓶作试剂瓶使用；3.量器不能高温烘干。3、电子天平使用注意⑴天平应置稳定、洁净台面上。环境干燥。⑵天平不得经常移动，移动后应调整水平，并用标准缺码校正。⑶向称量台放置秤量物品应轻拿轻放。⑷所称物品（含器皿）不得超出天平最大秤量。(5)称取精度要求不高、量大物品不要用精密电子天平。 (6)不得称量酸、減等腐蚀性、挥发性物品(7)禁止样品与称里盘直接接触，不应将试剂、样品洒落天平内（使用称量纸时尤应注意！）。(8)称量完成，及时清理称量室称盘和天平周围遗留物。关好天平门。4、玻璃器皿洗涤方法新玻璃清洗：1.因新玻璃器皿含有游离碱，应先放入2%盐酸中浸泡数小时；2.取出后用自来水重复冲洗；3.再用温肥皂水浸泡、刷洗；4.用自来水冲洁净；5.最终经蒸馏水冲洗3遍，烘干备用。用过试管、离心管清洗：1.试管用后及时倒去溶液，用水冲洗，不能让其干涸。2.以温热洁净水或肥息水浸泡.用试管刷刷洗。“上下两三次，到底扭一扭”3.用自来水冲洗，直至汰洁净，通常可浸泡数小时，其间数次（10次以上）换水。4.用少许蒸馏水分数次洗涤，洗去所沾自来水，晾干或烘干。5、超声波清洗器1.由超声波发生器发出高频信号，经过换能器转换成高频机械振荡而传输到介质一一清洗溶剂中。（人听觉20〜20000Hz，>0HZ声波→超声波）2.清洗原理：超声波疏密相间地向前辐射，使液体流动而产生数以万计Ф50~500μm微小气泡，在负压区形成、生长，而在正压区快速闭合——“空化”效应。SHAPE\气泡闭合连续不停地产生瞬间高压，就像一连串小“爆炸”不停地冲击物件表面，从而达成清洗净化目标。使用方法在清洗箱中加入水，使待清洗物品淹没,加适量清洁剂能改进洗涤效果。加水亦不能过满，以免溢出，造成电子短路。将网架放入清洗箱中，将待洗物品放入网架内。若物品直接放入、接触仪器底部，不但影响洗涤效果，还会损坏仪器！将电源插头插入220V/50HZ电源插座，打开电源开关，指示灯亮。仪器设置:(1)按“确认”键，“状态”指示灯闪跳;(2)按“功效”键至所需设定功效（如时间、温度及功率），则该功效指示灯变红；(3)按“确认”键至要调整数字位闪动，调整“<>”键至所需设定参数值；(4)以（2)、（3)相同时骤设定功率（50%〜100%)、温度（5〜80)等参数；(5)按“停顿”键，设定完成。通常工作条件：清洗或脱气超声频率40KHz(100%);清洗通常物品，工作时间20min左右；温度通常不超出50°C(超声过程中温度会升高，洗不耐温物品时温度不能设太高)。（可依照物件大小和污垢情况合理设定，必要时作预试确定。）按“运行”键，仪器开始工作。运行中需要停止工作时可按“停顿”键。超声清洗结束后，应将物品及时取出，用流水冲洗。清洗箱内水应经常更换。★切勿将强酸、强碱及其它腐蚀箱体化学品放入或接触本清洗器。不得将水进入仪器内部及关于操作键。★清洗器不能长时间工作（绝不要超出30min),在确保清洁前提下尽可能缩短时间，必要时采取间断性工作。6、高速冷冻离心机使用注意事项使用规格相同离心管，严格配对配平。离心管盖、套管应统一配平，用密度相同液体做配平管。2、 离心管内液体不能装得太满，以免溢出3、 正确设定所选取离心转头。4、 设定离心温度、速度和时间，或选择已储存离心程序。5、转速不能超出所用转头限定转速。*24x1.5ml角转头 18750r/min(33016xg)*8x50ml角转头 14000r/min(21255xg)*4x200ml水平转头4400r/min(3074xg)6、使用完成应将机仓和转头内可能沾有污物擦洁净，敞开仓盖让水汽蒸发;仓内已干燥、长时间不用时关上仓盖。★（旧）机械^定时器不能回转（旧）调速开关旋钮应迟缓旋转加速9、不需冷冻、转速不高勿使用冷冻离心机!勿以流氓、土匪方式横蛮操作仪器!7、铬酸洗液处理玻璃器皿洗液配制：取工业重铬酸钾l000g，加热水l0000mL，搅拌助溶，冷后向其中缓缓加入浓硫酸2000mL(速度不能过快，以免产热而使容器破裂，更不能反过来加)。储放：以耐酸陶瓷缸配制和贮存，也可用耐热塑料容器配制，冷后移入并酔存于玻盖玻璃瓶(缸）中备用。特点：具备很强氧化性，对有机物和油污去除能力尤其强。注意事项:如玻璃器皿太脏，须先用自来水和毛刷洗刷倾尽水后再入洗液浸泡，以免洗液被稀释。以温热格酸洗液浸泡，洗涤效率更佳(难)洗液浸泡后器皿,应先用自来水彻底冲净(尤其培养用器m),再用蒸馏水润洗2〜3次铬酸洗液吸水性强，应随时把容器盖严，以防吸水而降低去污能力。当出现绿色时，不能继续使用。洗液腐蚀性极强，易灼伤皮肤及损坏衣物，配制和使用时应注意安全。★本洗液不适于金属、有机玻璃及沾污有钡盐、铅盐器皿。废弃洗液不能随意乱倒，以免锈蚀下水管，并污染环境。塑料器皿洗涤小吸头、小离心管较难洗净，除非逐一洗、冲、漂塑料培养皿不能用毛刷子刷，用后立刻用水冲，预防干涸。试用脱脂柔软纱布。以2%氢氧化钠浸泡过夜，水冲；以5%盐酸浸泡30min;以自来水、蒸馏水洗漂、浸泡数遍，晾干，备用。橡胶制品洗涤新橡胶制品带有滑石粉，需先用自来水漂用2%氢氧化鈉煮20min，水冲洗5〜6次;再用1.3%盐酸煮30min;分别用自来水、蒸馏水漂洗，晾干，包装、灭菌。(不能烘烤，高压时控制10lbf)二、化验室用水蒸馏水器使用注意事项：进、出水管和阀要用聚乙烯制成，需用橡皮管也要尽可能短些。冷却水可用胶管。用市售蒸馏水作再蒸馏，比直接用自来水作蒸馏效果要好使用一段时间后，蒸馏瓶内水要换新，贮水容器要清洗；冷却水保持一定压力；若停自来水且热敏保护器失灵有爆裂危险调整进水管流速，预防蒸德瓶内水蒸干或过满；发觉蒸馏瓶内水过少应立刻切断电源，不能马上进水。尤其注意：重蒸馏水器、高压灭菌锅、高温烘箱、电炉等使用中要有些人看护，记住按时关闭！杜绝事故发生！(二）离子交换水离子交换法制得化验用水，称去离子水或离子交换水。能除去原水中绝大部分盐、碱和游离酸，但不能完全除去有机物和非电介质。离子交换柱若长久不用，会荤生细菌，污染离子交换柱。离子交换树脂使用一定时间后会失去交换能力。阳（阴）离子交换树脂可分别用酸(碱)再生处理，重复使用。SHAPE\(三）超纯水制备装置使用与注意事项:以蒸馏水、去离子水作为制备超纯水水源，可延长纯化柱寿命。超纯水器不使用时置“OFF”状态，也定时自动循环，所以电源要常接通。保持贮水桶内有一定水量，预防空气进入及纯化柱脱水。较长时间不使用时，贮水桶内水也要定时更换，预防源水变质。取水枪头勿接触接水容器口，预防污染。冬天防冻。超纯水成本很高，不得作普通蒸馏水和双蒸水使用三、试剂使用和管理1、称取前核实所取试剂是否有误，进口试剂往往要对英文名称，以防差错。生化试剂要注意同分异构体，左旋或右旋，氧化型或还原型等。2、注意试剂含结晶水多少，要查对分子量再计算试剂用量。3、试剂规格是否符合要求4、 在一些要求较高或特殊分析中，不但要考虑试剂等级，还应注意生产厂家、产品批号等。必要时应作专题检验和对照试验。5、 注意试剂有否变质6、用清洁牛角勺或不绣钢匙从试剂瓶中取出试剂，一药一匙。7、全部试剂、溶液以及样品包装瓶上必须有标签，脱落要及时补上。8、依照试剂毒性、易燃性、腐蚀性和潮解性等不一样特点，以不一样方式妥善保管。9、优先使用已开瓶试剂，杜绝浪费，私藏。试剂安全使用：(1)剧毒试剂应专员严格保管、慎重操作;(2)会产生有害气体应在通风橱中操作;(3)易燃溶剂加热时，必须在水浴或沙浴中进行，防止使用明火； (4)操作腐蚀性强试剂（如高氯酸、硫酸、蛋白酶k、胶原酶等）应戴防护手套、防护眼镜；(5)试剂绝不可用舌头品尝，更不得食用，也不作药用。不用茶杯、食具盛装试剂，更不要用烧杯等当茶具使用。(6)不能使用化学试剂、废液要慎重处理，不能随意乱倒。(7)装过强腐蚀性、可燃性、有毒或易爆物品器皿，操作者应亲自洗净或处理掉。(8)化验室中应备有抢救药品、消防器材和劳保用具。四、溶液浓度表示及其计算惯用表示方法有：百分浓度、质量浓度、物质量浓度、体积比浓度、相对密、质量摩尔浓度等，其中百分浓度、质量浓度、物质量浓度最惯用。百分浓度1.质量百分浓度：即100g溶液中所含溶质克数。*符号为“％(m/m)”或Am。市售液体试剂浓度通常都以此表示。体积百分浓度：物质B体积分数，惯用％(V/V)表示。质量体积百分浓度：以100mL溶液中所含固体溶质克数表示，即％(m/V)如0.9%NaCl、10%TCA等。现在多用g/L取代。质量浓度即质量体积浓度，指单位体积（1L）溶液中所含物质质量（g）。质量浓度=10*质量体积百分浓度(三）物质量浓度*指单位体积溶液中含溶质B物质量，即1L溶液中所含溶质量(摩尔，mol)。*惯用单位：mol/L、mmol/L、μmol/L等，可简化为M、mM、μM，正式使用不要简化。■量浓度计算方法：量(g)=量浓度(mol/L)×摩尔质量(g/mol)×体积(L)①eg：溶质为固体时例：怎样配制0.5mol/LNa2C03溶液500mL?(Na2CO3MW为106)解：m(Na2CO3)=0.5×l06×500÷1000=26.5(g)〇称Na2CO326.5g溶于适量水中并定容至500mL〇②eg：溶质为溶液(液体)时例：怎样配制0.5mol/LH3P04溶液500mL?(H3P04MW为98，浓磷酸比重1.69、浓度85%)解：m(H3PO4)=0.5x98x500÷1000=24.5(g)V0=24.5÷1.69÷85%≈17(mL)量取浓磷酸17mL,加水稀释并定容至500mL。(四）溶液稀释原理：稀释前后溶质总量不变。C1×V1=C2×V2例：用2mol/LH2SO4溶液配制500mL15mmolH2SO4溶液，怎样配制？解：V1=C2×V2÷C1=0.015×500÷2=3.75(mL)取2mol/LH2SO4溶液3.75mL,加水稀释，使总体积为500mL，即成。五、试剂配制关于策略I、依照需用量配制，可略多些，不应配得太多而浪费，宝贵试剂尤应尤其注意节约。2、有些试剂要现配现用，如GSH-Px测定用底物、H2O2等，只能配当日用量。3、有些试剂可较长时间保留，则可预计一定时间内用量配制。有些溶液可配成数倍浓1度贮存液，用前稀释。4、怎样准确配制少许试剂？依照试剂性质和量选择试剂瓶：耐碱、避光、耐低温、大小。瓶盖应密闭性好。6、试剂瓶上应贴标签，标明试剂名称、浓度、用途、配制日期、保留方法及使用者等。7、同一试验室内普通公用试剂不要重复配制。8、需冻藏溶液，应分装后冻存，每次取出一瓶解冻使用，不宜大包装、重复冻融。9、试剂溶液要定时清理。放置整齐，用后偿还原处。主要试剂、样品处置要慎重！六、样品测定关于策略1、考虑项目中哪些试剂配制、加量要求十分准确。通常而言，标准液、测定底物剩下量项目标底物其配制和加量要求严格。2、试剂配好后，正式测定样品前，要作少许预试。尤其样品量少、难重复采集。3、待测成份稳定时间短项目优先做，合理分工协作巧安排。4、每批测定最好B、S作双份或3份，预防因B或S管误差影响全部U准确性。样品较多时，要在前、末及中段设S。 5、有些项目标空白管OD改变较大，除用B调“0”外，可用DW调“0”，ODU-ODB。6、大数量样品分批测定，确保准确性前提下每批完成最多数量样品：确保加样和作用时间相等，确保颜色或浊度稳定。*反应作用时间要求准确；显色或浊度稳定时间短，每批样品数不宜多，如10〜20个，例GSH-Px、1分钟胆红质测定。*作用时间不十分要求严格；显色或浊度稳定，每批样品可适当多，如30(—个试管架）或60个（两个试管架）。7、注意加样或加试剂及比色过程一致性。如加底物和样品是按从前至后次序，加终止反应试剂仍应按此次序，不能颠倒。确保时间一致。8、使用标准曲线计算测定结果项目，如ALP、ALT等，应定时校正标准曲线，特别仪器大修后应重新制标准曲线。9、按原试验组排序测定样品，有利于减小组内差异，但可能造成人为差异，可打乱分组排序或倒序测定。双盲编号？10、对照组结果直接影响试验分析，应确保条件一致，样品不被沾污。测定临成^样品时取好有健康动物样品同时做。11、已测样品应保留一定时间，以备核查。但过期样品应及时、妥善处理。12、怎样衡量某测定方法可靠性及操作者技术熟练程度？（1）重复性试验：每个样品作2〜3个平行管，OD<0.015;不一样时间、人员，OD<0.03。（2）数次重复测定结果误差（精密度）应在5%以内，最大不超出10%。（3）作回收试验，加一定量标准液后测定，回收率符合要求。（4）加0.5x、lx、l.5x及2x样品进行测定，计算结果是否相符。(5)插入参考或定值血清进行测定。（6）显色反应以普通分光光度计（如721型）测定OD在0.1〜0.8之间最好。（7）使绝大多数测定样品在线性范围内，线性范围满足健康和病理样本。（8）部分测定样品结果太高或太低，应将样品作稀释或加量。七、血准样品采取与保留符合要求样品是取得正确结果基础、保证：量够、新鲜，不浑浊、不溶血、无凝块、无污染，有标签、有统计。1、采取量：最大采样量，试验需用量小白鼠BW25g,总血量2〜2.5mL,心脏穿刺可采血0.7mL*大白鼠BW325g,可采血9mL(占体重1/36,最多可搜集到体重5%〜8%血量）。*豚鼠BW480g,可采血19mL左右（占体重4%，血液总量占体重4.5%~8.1%)。*成年兔每次可采血20mL。切断颈静脉放血可得到体重1/45血液。■2、常规采血路径:鼠从尾尖、眼球、心脏穿刺，以及麻醉、剖腹后从腹主动脉采血；*兔从耳静脉或心脏木血；*猪可从耳静脉及前腔静脉采血;*羊及大动物从頭静脉采血。*奶牛尾部血管采血法*操作者左手抬起牛尾，在尾内侧、离肛门4〜15cm*用5〜10mL—次性注射器、9号针头于正中凹陷处刺入3〜8mm，有时刺过血管，要抽出少许，能采血3〜5mL甚至10mL