第六章酶化学新

第六章酶化学本章内容

一、酶的概述二、酶的结构与功能的关系三、酶的作用机制四、酶促反应动力学五、酶的应用及发展（一）酶的概念（二）酶的化学本质（三）酶的命名（四）酶的分类（五）酶的特性一、酶的概述（一）酶(Enzyme)的概念:

酶是活细胞产生的，具有催化生物反应功能的蛋白质大分子及核酸。

一、酶的概述几个有关名词底物(substrate,S)：酶作用的物质。产物(product,P)：反应生成的物质。酶促反应：酶催化的反应。酶活性：酶催化化学反应的能力。（二）酶的化学本质1、大多数酶是蛋白质：元素组成与分子量化学结构与空间结构；理化性质:两性性质；胶体性质；变性失活；可被蛋白酶分解；结晶；测序。2、某些RNA具有催化活性,将本质为RNA

的酶称核酶（ribozymes)。（三）酶的命名习惯命名法1.习惯命名法的原则：（1）根据其底物命名，如淀粉酶、蛋白酶（2）根据其催化的反应性质命名：如水解酶、转氨酶（3）根据底物及反应性质命名：如乳酸脱氢酶（4）在（1）（2）（3）基础上有时加上酶的来源或其他特点，如胃蛋白酶、碱性磷酸酶。2.习惯命名的优缺点：优点是简单，缺点是缺乏统一性

国际系统命名法系统名称(systematicname)应当标明酶的底物和反应的性质当底物多于两个时应同时列出,并用“:”隔开。例：

①

根据酶催化反应的类型分为六大类：1.氧化还原酶类2.转移酶类3.水解酶类4.裂分酶类5.异构酶类6.合成酶类②

根据底物的性质和反应键的性质，每一类又可分为若干亚类及次亚类。仍然用1，2，3，…编号。③

在次亚类中编号。系统名称：系统名乳酸脱氢酶

EC1.1.1.27EC(EnzymeCommision)第1大类，氧化还原酶第1亚类，氧化基团CHOH第1亚亚类，H受体为NAD+该酶在亚亚类中的流水编号

系统名：包括所有底物的名称和反应类型。乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+乳酸：NAD+氧化还原酶

惯用名：只取较重要的底物名称和反应类型。乳酸：NAD+氧化还原酶乳酸脱氢酶1.氧化还原酶类：主要是催化氢的转移或电子传递或加氧的氧化还原反应。AH2+B（O2）供氢体

受氢体A+BH2（H2O2，H2O）根据受氢体的性质，氧化还原酶类可分为：（1）脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应。AH2

+BA+BH2（需辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ）（2）氧化酶类①催化底物脱氢，氧化生成H2O2：AH2+O2A+H2O2②催化底物脱氢，氧化生成H2O：2AH2+O22A+2H2O（3）过氧化物酶ROO+H2O2RO+H2O+O2（其它）（4）加氧酶（双加氧酶和单加氧酶）O2+OHOHC=OC=OOHOH（顺，顺-已二烯二酸）2.转移酶类：催化化合物中某些基团的转移。A·X+BA+B·X根据X分成8个亚类：转移碳基、酮基或醛基、酰基、糖基、烃基、含氮基、含磷基（激酶）和含硫基的酶。

水解阻酶类：催化回加水控分解无作用樱。AB档+H2OAOH+厉BH4.裂解适酶类：催化询非水筝解性浇地除求去基律团而费形成始双键贵的反狸应或在逆反疏应。CH3C=OCOOHC—泡C键CH3C=OH+CO2（脱羧酶、坑醛缩带酶）C—挽O键CH2COOHHO—CH—COOHHCCOOHHOOCCH+H2O（脱水介酶）C—膊N键COOHCH—NH2CH2COOHCOOHCHHCCOOH+NH3（脱氨幼酶）5.异构绍酶类：催化馋各种胁异构导体之喜间的授互变闲。AB常见遮的有渡消旋充和变制旋、惜醛酮构异构驾、顺朴反异娃构和疑变位荒酶类。6.合成诸酶类:催化智一切闹必须门与AT益P分解畏相偶度联、购并由务两种馒物质后合成衣一种擦物质污的反烤应。A奔+迷B喜+冻AT崖P点C隙+棋A们DP（或AM举P）+央Pi艰(或PP依i)（四使）酶隆的分判类1、根榜据酶挎的组待成分制类：（1）单极纯酶（简陈单蛋裹白质秃）：其活玩性仅交取决胆于其记蛋白央质结抢构。如：帝蛋白脸酶、级淀粉脚酶等云。（2）结虹合酶存：酶州蛋白+辅因霉子=全酶辅因秋子(co米fa粒ct哀er)：热稳距定的螺非蛋疫白小言分子讯。按分业子组坛成：金属躁离子：Mg2+、Mn2+小分背子有晓机物：维生耍素全匠酶酶蛋白辅助因子金属离子小分子有机化合物决定怨反应重的特包异性决定搅反应遗的种甘类与椅性质同一迫辅因斜子可肺与多咏种不丹同酶序蛋白士结合史，显驼示不气同催止化活陷性辅助役因子廉按其松与酶贿蛋白口结合旨的紧脂密程遍度分乘为：辅酶(c急oe猾nz挤ym恋e)属:与酶鬼蛋白请结合棒疏松顺，可舱用透醒析或纱超滤碑的方轰法除称去。辅基(p街ro家st恒he思ti争c季g托ro纤up摔):与酶孔蛋白堆结合爷紧密狠，不浸能用辆透析木或超柏滤的大方法脚除去。（3）多扶酶体军系及恼其分万类１）碗多酶垫体系(m休ul颂ti罪en忌zy号me龙sy拾st协em身)：细胞电内存榜在着热许多由几流种不并同功炕能的经酶彼母此聚朱合形嘉成的绸多酶述复合蜡物。主五要指决结构涉化的海多酶固复合构体如蔬丙酮岩酸脱葡氢酶逮系、针脂肪株酸合透成酶鲁复合块体等苏。２）吃多酶随体系栽的分旧类：可溶傅性的做多酶艰体系如催徒化糖夕的有身氧氧弃化的叠多酶港体系链中的吃各个氏酶，萝在细苗胞质误中以扛可溶期性形歇式作先为独写立的肝单体亮存在良，彼低此之优间没真有结分构上样的关迫系。丙酮社酸脱亩氢酶稿复合阿体（py育ru倍vi痒c局ac趟id酱d芬eh食yd谦ro翠ge梨na掘se匠c漫om毫pl克ex什)由三侧个酶宵组成拍：丙酮山酸脱壶氢酶雹、二滑氢硫证辛酸丸转乙袍酰基定酶、和二氢牵硫辛书酸脱饲氢酶脂肪暮酸合置成酶聪复合板体：7种不同特的酶荣围绕耽着酰基梨载体夹蛋白商（AC还P）排列陆成紧金密的矿复合继体结构焰化的春多酶香体系（五间）酶继的特塘性酶的属生物往学意盯义:酶能坚在机锯体十凶分温伐和的正条件猴下高累效率坡地起罗催化惊作用,使生旺物体刷内的男各种撤物质侦处于归不断结的新闷陈代犁谢之乡丰中,因此邪酶在杏生物省体的观生命放活动贺中占言有极驳其重覆要的宋地位粘。酶与遭一般猛催化抹剂的博共同抹点在反悠应前修后没晚有质卸和量堆的变味化；只能角催化谋热力蚁学允喘许的循化学剑反应功；只能胸加速舱可逆反反应你的进此程，畜而不腔改变笋反应座的平型衡点星。（1）酶浙促反店应具趟有极购高的端效率1.酶催范化作妨用特柜点：酶的余催化喝效率办通常棵比非纷催化递反应舟高108～1020倍，范比一氧般催根化剂尸高107～1013倍。酶加划速反交应的主机理倾是降驰低反乞应的犬活化魔能(a良ct马iv嘴at卡io势n础en晕er较gy肺)。反应总能量改变非催化反应活化能酶促反应活化能一般催化剂催化反应的活化能能量反应过程底物产物酶促寻反应割活化谦能的件改变活化搏能：底物烛分子篮从初嘱态转宅变到落活化狮态所活需的葡能量。过氧但化氢杰分解付反应职所需仓活化芝能催化剂每摩尔需活化能无18000cal胶态钯11700cal过氧化氢酶2000cal一种山酶仅落作用务于一剧种或贵一类烦化合像物，雁或一忽定的件化学舍键，例催化唉一定坐的化怜学反习应并蕉生成筹一定忆的产趁物。腥酶的渠这种听选择蔬性称袍为酶持的特唱异性馅或专桐一性。*酶的算特异强性(s派pe工ci润fi绳ci棚ty龙)（2）酶讯促反肢应具惧有高穿度的夕特异迎性绝对泡特异渣性(a慰bs自ol露ut券e闷sp尼ec晕if炭ic父it孟y)相对搅特异厕性(r倡el侵at醒iv松e保sp探ec然if浪ic挑it市y)立体么结构饺特异既性(st睛er猫eosp木ec芳if贿ic成it籍y)绝对锡特异捧性酶只白作用诵于特距定结坡构的棚底物键，进度行一欣种专医一的症反应旱，生患成一湿种特悦定结校构的掘产物。如：相对禁特异妹性酶作昼用于挤一类边化合沈物或悄一种思化学缸键。如：立体复结构急特异洞性酶仅炉作用棉于立棕体异局构体锹中的则一种叠。(1陕)延胡妈索酸悬水化喇酶，涉只能桥催化计反-丁烯搁二酸米，而颜不能叔催化性顺-丁烯撤二酸反-丁烯蝇二酸顺-丁烯失二酸(2诊)L弯-A艺A氧化定酶只抢催化L-铅AA的氧巧化。（3）高爹敏感暂性：即酶帆易失赴活，蠢酶作绣用需恒要比法较温尖和的充条件拘，如愁常温肠、常酬压和榴接近忌中性彼的酸雪碱度谈等。梅这是父由于锤酶的持化学惠本质均为蛋搞白质惹，凡虫使蛋尝白质骡变性霜的因援素都刑能使套蛋白笋质失稍活（4）可景调节仆性：包括唱抑制粮剂调袋节、怜共价板修饰卧调节朴、反废馈调敬节、介酶原傻激活浓和激停素控末制等（5）与肾辅酶洞、辅社基和释金属徒离子时的相泛关性：结剑合酶腥的催垫化活懂性与砌辅酶北、辅佩基和拉金属扎离子丹的作赔用是毙相关耽的：二、镇酶的省结构擦与功痛能的央关系1.酶的耍活性纸中心2.酶原低与酶考原的钢激活3.同工数酶4.抗体茧酶5.核酶二、酶的萝结构巨与功浅能的要关系1.酶的沾活性畜中心活性拘中心建：酶分聪子中叶能同兆底物接结合看并起炕催化夺作用型的空语间部夺位。羧肽示酶的气活性侨中心实验贪：酶蛋穷白经丑水解团切去贴部分岸肽链罩后，展残留榴部分聪仍有屈活性战。说明逼：参与茅催化英反应造的只清是其顾中一尊小部令分，爹即活性溪中心宇。活性减中心徐的实丹质活性嚼中心即酶象分子怕中在胁三维皇结构尺上相霉互靠退近的限几个aa残基乔或其蛋上的鼓某些张基团骂。活性今中心贺以外最的部员分对中酶催雨化次盯要但句对活牛性中拍心形肾成提柴供结开构基毙础。胰凝独乳蛋惩白酶靠的活旱性中溜心活性莲中心煮的功还能部约位：结合眠部位耽：酶分肚子上咸与底昨物结救合的巡寿部位胆。催化佣部位泊：底物雕在此刮发生穴一定促的化诉学变披化。活性沫中心结合部位决定酶的专一性催化部位决定酶所催化反应的性质构成图酶活极性中铁心的慎常见贸基团漠：Hi随s的咪俩唑基姨、Se渐r的－OH、Cy哲s的－SH、Gl仇u的γ-C铲OO饲H。活性星中心乏的特侵点：1）仅为慌酶体怎积的歪很小间部分垒；2）具父有一扣定的薪空间扭构象旱；3）S与E靠次桂级键衡结合翁；4）是料由特扛定空雁间构奏象维茎持的韵一个裂隙。溶菌霸酶活孤性中凯心底阵物活性场中心故以外盆的必射需基息团结合崇基团催化浩基团活性恳中心63研究裙酶活伏性中钞心的疫方法禁：1、通过瓶研究托专一吃性底真物判烛断确架定E活性辱中心废的结痕构；2、用邀化学铸修饰乐法共异价修背饰E分子盖的一叠些功遮能基孤团，肺以查针出哪富些基第团是腐活性阁必需钓的；3、X-衍射挎直接焰探明吹活性液中心挥。2.酶原截与酶脑原的够激活酶原(zy铺mo骂ge每n)有些截酶在冰细胞达内合愚成或昨初分呀泌时绿只是贴酶的广无活殿性前风体，号此前惜体物卸质称友为酶脱原。酶原室的激锹活在一拿定条外件下且，酶文原向贪有活米性酶后转化息的过亚程。酶原驾激活振的机辫理酶原分子构象发生改变形成或暴露出酶的活性中心

一个或几个特定的肽键断裂，水解掉一个或几个短肽在特定条件下胰蛋讽白酶奇原的迟激活找过程酶原姥激活隙的生青理意隔义避免未细胞脆产生煮的酶撞对细尸胞进怠行自英身消秆化，举并使使酶在票特定凉的部会位和锅环境毁中发嘉挥作妨用，病保证段体内霜代谢贩正常贩进行侮。有的聋酶原西可以烫视为棵酶的昌储存牺形式棕。在族需要猴时，纳酶原丛适时牙地转鱼变成返有活色性的针酶，尿发挥务其催约化作才用。3.同工甘酶*定义同工耗酶(is债oe棚nz述ym萄e)是指蜘催化蛛相同闸的化献学反鉴应，甩而酶孟蛋白疏的分团子结局构、蒸理化客性质脖乃至锈免疫背学性鬼质不桨同的究一组耻酶。同工肢酶是企寡聚逃酶。存在掏于同球一种奶属或砍同一输个体苍的不赞同组武织或短同一置组织往、同析一细统胞内证。目前六发现花约50俗0种。*举例辈：乳粉酸脱灰氢酶(L挂DH1～LD讲H5)临床链意义心肌节梗死猴和肝吵病病票人血炎清LD膊H同工瓣酶谱贪的变帅化1酶活结性心肌榆梗死倍酶谱正常脆酶谱肝病谎酶谱2345同工宏酶的破性质由于阔同工亦酶一意级结洁构的纱不同得，因誓此分花子量、pI、Km、物理煮化学傍性质泡、免紧疫性誉质、粒电泳坦行为注等方牺面都习表现猎出差律异。可以微用电概泳的宋方法拐对它削们进郊行分筋离。思考稼：为相什么同工瘦酶能催化鹿相同顽的化积学反殖应？4.抗体锅酶既是啄抗体瞧又具辆有催洗化功歇能的饶蛋白之质.本质拌是免疫足球蛋腔白(i菊mm翁un做ol牛og己lo熔bu吐li熄ns纤)人工般的方偶法使佳其获继得了锻酶的魄属性呀，所扑以又议称为催化勿性抗单体(c练at国al庭yt均ic焰a墓nt森ib役od舞y)。抗体鼠蛋白瞧的特浸性酶与逝抗体突这两注种蛋没白质港之间集尽管功能困不同，但付它们与各残自的偏配基(酶-底物沫、抗俗体-抗原)的结伸合特尝性，如结合渐方式赞、动塞力学脑过程等都驱非常便相似斗。从20世纪60年代狂起，著有人阀开始披了对春抗体霸进行修饰，并使其鸟获得烂酶的板属性的研寸究。核酶绩（Ri镜bo金zy恋me)质:具催倦化活抱性的RN计A。核酶居的发疮现:19虎82年Ce掠ch等发慌现四朴膜虫26悟SrR蔽NA前体牛具有现自我声剪接(s板el抽f-扑sp物li拴ci弊ng侄)功能毕，并耻于19颤86年证怒明其册内含诵子L-送19商R跳NA具有牌多种拖催化翁功能亭。此武后陆毙续发铃现多伤种具帽有催域化功隆能的RN诸A，底物颂也扩痒大到DN崇A、糖类贺、氨翠基酸涝酯。5.核酶Al浅tm戏an发现RN暴as鞭e-P的蛋挠白部草分不聪具催画化功财能，踩而RN水A部分在有干足够甲浓度Mg2+存在隔下，添能起核酸为水解互酶的作悦用。证明拖了核私酸既这是信重息分犯子，络又是烤功能禽分子稳。核酶仙的催僻化性掉质RN蜡A作用于RN基A；核酸似酶催情化的犁反应楚主要番包括:水解喝反应(R植NA限制陆性内塑切酶亭活性)，连接脑反应(聚合早酶活隔性)和转核冬苷酰算反应等；最近骡核酸膀酶的代其他扎作用夕底物软也已腹被发店现，致如多糖遭、DN丑A以及轧氨基暮酸酯付等。核酶创研究放中的愈两个己问题核酶净催化蚂效率尾太低掘。由于哨核酶通本身厅是RN勤A，很容滑易被扑核酸牲水解强酶(RN娘as图e)所破慈坏。因此绒，要蛾将核害酶应骂用于扎体内挤阻断脖基因横表达症或作送为抗或病毒止的临楼床药赠物，忘还要膊做大性量的市研究餐工作放。三、盛酶的指作用理机制降低挑化学樱反应陵所需复的活蹦化能（1）中栋间产毒物学涝说：学说燥认为嘉：当酶赴催化畜一化吸学反念应时鉴，首粉先E和S结合举形成虎中间新产物ES，然后畜它再亲分解运成产片物P并释题放酶E。ESE吓+睛SE倍+暮Pk1k2k3中间算产物甚学说1）中恢间产归物比豪底物帽需较警少的拨活化极能就揉可分甲解成甲产物笋并放街出酶在。2）[E驳S]决定腊酶促已反应独速度锹。3）中盈间产洪物形托成的实验货依据：同位俊素32P标记愈底物肾法（胃磷酸兄化酶余与葡为萄糖如结合播）吸收防光谱暗法（类过氧抵化物达酶与左过氧吹化氢拢结合瘦）（2）决航定酶释作用键专一皮性的决机制锁钥那学说：18趣94年E.赌Fi蔑sc棒he驳r提出惠：S分子浪或其枣一部类分像如钥匙慰一样垮楔入E活性头中心添部位殖。此学弃说强疯调E与S结构跨互相降吻合(刚性彻模板)。物理如吸附诱导研契合轮学说19沫58年Ko费sh海la菌nd提出炊：当E与S接近亏时，E蛋白受S分子北的诱导，鞋其构鸭象发衬生有利于S结合届的变呢化，E与S在此典基础咳上互补契膨合、皇进行勒反应哄。诱导斤契合坦假说（3）使箭酶具披高催柳化效撕率的徐因素丝式：１）糟酶与奥底物怒的“悉邻近蓝”及勇“定败向”梳效应邻近(p叛ro土xi顶mi汪ty醒)：在酶茶促反巷应中废，底睡物分爪子→士酶的决活性闹中心接→酶仔活性规中心嘱的有显效浓记度大莲大增址加→钻提顿高反郊应速恰度。定向(o幻玉ri扣en沾ta品ti芬on蠢):底物遇分子季中参屑与反若应的茫基团坡与酶叨活性建中心踩的相有关基船团相改互接垦近，救并正冤确定场向→护高效县率和捐专一抛性特判点。分子出间反缘瑞应变攀为分替子内谜反应恋。2）“张力”和“形变”X衍射抹证实雾：E使S分子点中敏疑感键摘中某终些基怪团的掘电子秒密度泳变化薄，产桶生电译子张祖力，使浊其发陵生变苦形，些更易繁于断纱裂。A：S变形B：S和E都变你形3）酸营碱催重化·指E分子瞧上某些基恋团作眼为质子供警体和笨质子受体爽对S进行（广逆义的泛）酸碱催室化。广义杆酸－少碱催垂化是器指通过汉质子悼酸提炒供部引分质跳子,或是间通过赞质子牢碱接粮受部宝分质堂子的康作用石，达骆到降村低反腰应活和化能律的过监程。4）共度价催演化E分子掌中的颠亲核须基团踪蝶提供幻玉电子刑，对S中亲塘电子至的碳互原子榆进行测攻击饭，生成ES使反铁应活仪化能奸降低，S可越雷过较听低的因能垒忙而形场成产挽物。使酶慌具高丈催化敏效率健的因益素：１）注酶与皂底物塌的“铲邻近品”及迷“定惨向”腾效应2）“张力”和“形变”3）酸拢碱催顶化4）共岁价催畏化酶促贩反应枣动力积学研究卷各种庄因素缎对酶促太反应脾速度的影跳响。影响禁因素只包括柜有底物阵浓度占、酶霞浓度它、温铸度、pH、抑制叔剂、剩激活双剂。四、零酶促顺反应截动力缩慧学单底食物、颠单产繁物反怠应。酶促束反应代速度用单富位时育间内恐底物趟的消衔耗量莲和产放物的拳生成掏量来锣表示亿。研究贺前提1.底物确浓度捏对反甚应速骆度的累影响矩形键双曲剖线※19跃13年Mi废ch战ae裙li确s和Me报nt数en提出叙反应萝速度健与底厅物浓被度关蹄系的副数学惠方程这式，喷即米－怠曼氏饭方程永式，简修称米书氏方者程式(Mi公ch隆ae焰li摘seq趋ua青ti播on本)。ＶVmax[S]

Km+[S]＝1）米掌氏方技程的芹推导根据架中间撤产物窗学说委：式中K1,K2,K3分别敏为各遗反应马常数超，可家知：ES形成骆速度=K1[E]猾[S]ES分解塑速度=(K2+K3)[ES罢]当反魄应达讯恒稳豪态时,二速亏度相移等,即:K1[E钞]催[S桨]=(K2+K3)秩[E久S]S+E→ES→E+PK1K2K3①整理奸并令锡：由于[E滤]与[E桃S]之和斯为总朴的酶秤浓度[E扎t]伯,即:[E叛t]尿=沉[E度]县+延[E肃S][E徐]番=拣[Et迹]-忌[ES乒]将③词代入付②:[ES]K1=

=[E][S](K2+K3)Km②③[ES]=([Et饮]-壤[ES胞])[S邮]×Km整理喜得:∵酶促将反应毯速度蜡由[E娇S]决定,而υ=K3[E探S]∴疏[E鬼S]砖=将⑤诞代入里④整猾理得:[ES]=[Et]．[S]Km+[S]④υK3⑤=[Et]．[S]Km+[S]υK3．⑥此时擦达到总最大鹅反应脆速度Vma蹲x:Vma主x=K3[Et栗]琴⑦将⑦忽代入趣⑥,得米暑氏方红程:当[S役]升高,所有E为S所饱慎和时,即:[E斗t]顾=殖[E响S]ＶVmax[S]

Km+[S]＝当v=蓝Vma败x/2时Km＝[S雨]（1）Km值等暖于酶违促反献应速症度为议最大振反应首速度误一半领时的剩底物薯浓度丹，单位痰是mo胸l/捧L。2＝Km+[S]

Vmax

Vmax[S]VmaxV[S]KmVmax/22）Km与Vma椅x的意桨义（2）Km是酶布的特恐征性逆物理待常数拘。只与E性质引有关赠，与[E圆]无关生；（3）同一E有几安个S就有扶几个Km，Km最小竿的为拔最适S或天以然S。（5）Vma恼x定义：Vm是酶宫完全本被底辛物饱愚和时你的反旦应速著度，拣与酶丝式浓度睬成正脱比。意义：Vma哲x=K3[E悠]如果朗酶的罢总浓愈度已应知，指可从Vma暂x计算让酶的往转换喘数(t捧ur呼no疾ve什r拉nu婶mb睁er津)，即动竟力学厚常数K3。定义—当酶被担底物花充分伟饱和时，勉单位纺时间锁内每脉个酶钢分子差催化予底物蔬转变边为产决物的仪分子偶数。意义—可用抗来比芳较每逃单位歉酶的这催化擦能力包。酶的蹄转换强数3）Ｋm值与难Ｖma钩x值的业测定①双倒阶数作酷图法(d切ou挑bl果e捞re缩慧ci钳pr诵oc跟al倒p总lo猜t)，又称素为日林-贝氏(Li嗽ne潮we萌av窄er-允Bu缓rk密)作图墓法

Vmax[S]Km+[S]V=（林跨－贝霜氏方寻程）两边同取倒数

双倒趋数作缝图法②Ha品ne损s作图亿法斜率=1/VmKm/Vm-Km[S]/V[S]在林-贝方渣程的绝基础鸣上，猫两边清同乘[S扬][S勾]/V=Km/Vm碍ax+[S泼]/Vm纹ax③Ea举di剪e-钻Ho虽fs瞒te凶e作图剥法Vmax

/KmVmaxVV/[s]在林-贝方特程的役基础眨上，袍两边涨同乘V歪.V貌ma扰x2.酶浓段度对床反应遣速度展的影粱响当[S那]＞＞[E乌]，反北应速箱度与恼酶浓复度成贝正比答。0V[E己]关系登式为驼：V抵=作K3[E挡]双重均影响3.温度机对反久应速冒度的率影响最适爬温度(o培pt万im着um车t椅em轰pe悦ra旅tu红re枕)：酶促裹反应拦速度增最快固时的删环境谎温度搏。酶活性0.51.02.01.50102030405060温度ºC温度耻影响扑酶促凯反应宰的机给理：温度紫对反标应速博度的博影响1）低于最适枣温度锡：反偷应速度浸随温奖度上辽升而加筹快；2）高于最适颤温度婶：E蛋白随温栋度上崭升而因变性鬼失活霞。酶活性0.51.02.01.50102030405060温度ºC例1.蔬菜母干制(霸王僚花、钉黄花旁菜)酶促捞褐变灿条件作：酚舰酶、理酚类咬底物地、O2例2.加工肤豆奶豆腥凳味产圆生条茄件：彩脂氧炸化酶辞、油饱脂、O2例3.茶叶绿茶填：鲜义叶象→充杀青肾→揉梨捻绿→费干燥红茶沃：鲜染叶井→滚萎雕产→揉废捻些→贡发酵穷→干南燥4.舞pH对酶淋作用烤的影荣响最适pH：酶泊具有调最大制的催奏化活塑性时干的环罚境pH值pH酶的滔活性胃蛋耐白酶淀粉洪酶胆碱匪酯酶0246810酶的宝最适pH不是伴酶的钢特征良性常促数：我因底芒物、姐缓冲丝式液的辉不同掌而不球同。不同盯酶的酱最适pH各不延相同奏，一么般在pH叫5-留8之间项。pH影响骗的机捎理：1）pH影响E活性燥中心冬及附兔近有井关基说团的障解离，使傅之易或不易与S结合灯；2）pH影响S的极盟性基汽团，从游而影伴响这厦些基团与E的结蒜合；3）过尝酸、亭过碱坑可使酶肝变性初失活。5.激活菌剂对必酶作吉用的孟影响概念：凡能名提高编酶活扎力的旅物质梨称激幻玉活剂脚。种类：1）无巷机离铜子的疑激活喷作用瘦：作为型活性较部位买的组草分；作为羞辅助痰因子错的组糕分；如：Mg2+、Ca2+、Co2+、Mn2+等。2）中译等大直小的傍有机双分子：包括度还原挨剂（坚使二舞硫键拿还原鹊）、ED璃TA（去绝除重摆金属肤杂质答）等妄。3）蛋统白质驼类大底分子申物质泡：激活培酶原凶、解盾除抑检制剂顿的抑巡寿制作旦用。如：pr与重掩金属姨离子匪结合允，解盗除抑蛛制剂暖的抑制翼。6.抑制挂剂对嚷反应读速度搬的影雾响酶的缠抑制纸剂(i乒nh老ib句it信or将)凡能妨使酶迫的催咸化活晃性下壶降而拿不引间起酶盛蛋白把变性夜的物管质统叫称为逮酶的稍抑制仓剂。区别挠于酶失的变络性抑制种剂对种酶有沟一定亏选择擦性，招而变罢性的扯因素是对酶砍没有伪选择泻性。抑制叹作用热的类丝式型不可标逆性宾抑制(i漂rr针ev源er参si矮bl业e当i府nh停ib赔it语io链n)可逆支性抑崭制(r刊ev到er拥si爱bl佳e弯i经nh闷ib涛it伞io随n)：竞争仿性抑秋制(c落om梯pe列ti罚ti皮ve孟i牙nh搬ib祝it竹io愈n)非竞遇争性忽抑制(n万on朝-c硬om钩pe欲ti夜ti利ve腹i歉nh贩ib僚it遍io念n)反竞卧争性煎抑制(u踏nc传om怪pe懒ti拐ti肉ve爆i障nh肢ib匠it逐io巨n)1最)不可仿逆性鸟抑制雀作用*概念抑制范剂通持常以范共价趴键与疲酶活轻性中充心的骡必需驾基团筝相结胡合，抬使酶惠失活郑，不能攻用透开析、矩超滤巩等方颠法予矿以除抽去。*步举例农药:有机身磷农贡药、有冲机氯邻农药竞、有政机汞抄农药2）缠可逆赞性抑箭制作灿用*概念抑制榴剂以梯非共酸价键洪与酶还或酶-底物悄复合绍物可萌逆性资结合臭，使齿酶的求活性限降低祝或丧摸失；抑制碌剂可忙用透凉析、励超滤膏等方亮法除适去。竞争贼性抑博制非竞套争性字抑制反竞鞋争性副抑制*类型（1）竞桨争性怠抑制假作用定义抑制枪剂与底物的结构葛相似，能吧与底醉物竞粗争酶西的活决性中窄心，郑从而惧阻碍薪酶底咬物复凑合物饭的形赶成，部使酶暴的活歇性降源低。竞争租性抑汁制*特点抑制首程度椒取决掌于抑桑制剂筋与酶钟的相磨对亲婚和力瞎及［S］；I与S结构奶类似撞，竞默争酶蓄的活连性中浓心；动力浆学特饼点：Vma则x不变猫，表枕观Km↑。抑制贵剂↑无抑肌制剂1/鞭v1/怜[S牌]*举例①丙二痰酸对酬琥珀辈酸脱扎氢酶饲的抑递制琥珀酸琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸②磺胺淹药对基细菌FH2合成宇酶的磨抑制2.非竞玩争性哈抑制抑制承剂与旷酶活央性中弓心外存的必侧需基址团结图合，底物着与抑桶制剂齐之间店无竞定争关蔑系。非竞令争性墓抑制*特点抑制监剂与述酶活呆性中涂心外钟的必峡需基命团结番合；抑制福程度转取决共于［I］；动力灿学特谋点：Vma桐x↓，表致观Km不变滋。抑制跟剂↑1/吴v1/换[S绒]无抑分制剂2.反竞签争性洁抑制抑制付剂仅碌与酶芬和底词物形宇成的饺中间粉产物德结合，使ES的量舟下降雁。反竞复争性继抑制*特点抑制微剂只畏与ES结合疫；抑制口程度备取决朝与［I］及光［S］；动力艘学特弊点：Vma隔x↓，表挽观Km↓。抑制眯剂↑1/蛙V1/塞[S摄]无抑晚制剂•各种淡可逆车性抑糠制作匆用的黑比较作用特征竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制与I结合的组分EE、ESES表观Km增大不变减小Vmax不变降低降低7.别构冤酶1)特点俘：亦称变构葬酶，是饭一类剥重要精的调叉节酶度。一般详为寡骂聚酶趣（两颗个以钉上亚钉基组废成）裙，易药发生凶构象宪改变优。其礼上有钟二个绢重要迹部位帝：活性乳部位和别构痒部位2)别构激酶结组构的波部位活性轰部位物：负责E对S的结饭合与畅催化淹；别构模部位阶：可结它合调刘节物大，负兆责调今节酶柿反应古速度训。这两扇部位怎可在给不同摸亚基踩或同煌一亚猾基不辱同部柄位上龄。3)别构争效应糟：概念塞：当S或S以外啊的物币质与E的相坡应部笑位非块共价结合伪后，刘通过E分子绸构象恶的变汇化影赤响E催化活性竿的效荐应。4）别触构效饼应剂别构盐激活锦剂：正协彻同，融加快结反应惨速度揭的，驳多为S。如：AT开P对AT序Ca删se(天冬贴氨酸滨转氨疯甲酰亩酶)。别构捏抑制挣剂：负协备同，允减慢脂反应否速度忧，多傲为代蚊谢终着产物烛。如：CT枝P对AT驾Ca嫌se。AT斥Ca磨se：合挂成CT骡P的多侨酶体总系中疯的第聪一个伏酶底物馅为天见冬氨仇酸、武氨甲姿酰磷烤酸负调解节物耳为CT清P；裕正调素节物尸为AT示PAT鼓Ca态se：天博冬氨闪酸转陶氨甲述酰基练酶生物伟学意认义：CT娱P：通过降低绩酶与矩底物废的亲势和力疮抑制AT惠Ca州se，保泰证了惜在嘧饲啶核班苷酸寻充足饮时，抓不再决进行东一些悟不必朴要的允合成推。AT提P：增灾强酶扫与底议物的务亲和汁力。作艘为信恭号表盾示有奴能量拖供应DN冰A复制别构咏酶通仁常为旁代谢嗽途径哲第一膨个酶砖或分荡支点垒上第乳一个酶。5）别防构酶外动力既学曲屑线：大多暖数别习构酶床不符锦合米幻玉氏方摩程。五、客酶的役应用孙与发贱展1.分离快纯化2.酶活矿力的沸测定3.酶的默应用1.酶的吨分离肢提纯分离第提纯痒的目麻的1）为渐了研造究酶繁的理路化性郑质或团鉴定约酶；2）作颗为生丽化试体剂或宫药物鞠。2、胞载内酶两的分华离提员纯步洒骤（胞厕外酶喜则易择于分厅离提葵纯）选材捡→破贡碎→亏抽提涉→分扮离纯泳化→晚保存（1）选求材：惯含酶剩量高落、易伏分离（2）破附碎细裙胞：3抽提：低温厌下，施用水注或低覆盐缓继冲液息将酶吃溶出异，所码得为徐粗提瓣液，打含较汁多杂斗质。4分离肃及提塔纯：酶是见蛋白讯质，侮故可棚用提耐纯蛋丢白质米的方威法：闭盐析臂、等溪电点赵沉淀肝、有馋机溶将剂、宣调节pH等。酶是勤生物望活性羞物质墓，故担应减征少酶固活性祖的损虎失，仓要求胡操作茅条件拨温和机，一攀般在斯低温0贞-老5旋°响C间进胖行，剧有时知还需急进一汤步提定纯。保存：酶制哑品浓兰缩、铅结晶进后-2研0°辽C保存颂。常用油方法骂有：（1）保映存浓敏缩的宇酶液何；（2）冰怒冻干讽燥；（3）浓驱缩液普加入恨等体劈燕积甘语油，筒在零悠下20捷°哗C长期菊保存杯。原则雀：在增页加酶饲得率历和纯税度的岸同时受，尽他可能歌避免吊高温丽、过衔酸、苹过碱薪、剧煌烈的吐震荡诊及其劣它可剧能使旧酶丧厨失活继力的塑一切储操作眠过程叨。尽最医大可捐能保驾存酶脚的活拦力。2.酶活湖力的脾测定1）酶欲活力（en禾zy缩慧me载a华ct解iv俘it盼y）：益指酶娃催化骆一定艳化学楚反应葡的能暮力。酶活陆力的鄙大小够可以津用在士一定梳条件暗下催概化的居某一毕化学脚反应存的反隙应速类度来斧表示啦。2）酶企反应伸速度：单位任时间县、单束位体催积内耕底物上的减捉少量恒或产希物的黄增加捐量，此其单示位为框：浓喜度/单位沿时间酶活呜力的狸测定从右腿图可峰知反应古速度韵只在困最初厉一段漠时间沿内保秋持恒凯定，随桌时间辛增长甲，酶神反应皆速度总逐渐昏下降早，故窃研究尽酶反钢应速滤度以锁酶促绞反应眯的初速笔度（in布it猴ia堪l煎ve巡寿lo妨ci政ty或in义it哑ia维l编sp度ee罢d）为资准。3）表哭示方盗法：（1）酶航活力克单位（ac垮ti缴ve闯u废ni引t,闪U甚,贩I.资U）：特定释条件住下（25献℃），顺在1分钟免内能转转化1微摩薪尔底财物的巩酶量绳。（2）酶丢的转郑换数（ka磁ta底l，ka脑t）：在最呈适条基件下鸭（30油℃）,每秒水钟可似使1m榆ol底物友转化铁的酶凑量。1ka夫t=6×挖107I.背U（3）酶援的比鸭活力指每mg酶蛋损白所目具有街的酶季活力银，一鞋般用U/棒m能g蛋白削表示折。3.酶的要应用工业碍上酶耀应用陈的优吊点：1）专掘一性格高，格副反模应很圣少，初后处底理容衬易。2）催否化效寄率高伞，酶毅用量纯少。3）反钉应条嚷件温呀和，福可以区在近滋中性股的水奶溶液誉中进除行反愧应。4）酶哑的催润化活颂性可德以进怀行人泪工控蚊制。缺点粪：1）酶叹易失恒活，梨酶反令应的朋温度坚、pH、离子响强度蛾等要免很好坛控制捡。2）酶絮不易情得到项，价孟格昂介贵。3）酶飞不易奏保存英。（1）酶森在工掌业中加的应估用不营断扩谱大。酶在僵食品呈工业鹿的应告用：酿造菊米酒云浸米龄→蒸阅饭→宗拌曲扣→装产缸→划糖化灵发酵粉