经典免疫学技术

现代免疫分析技术

经典免疫学技术免疫分析技术的发展多元免疫技术免疫沉淀免疫凝集补体结合反应中和反应免疫标记技术经典免疫学方法化学发光胶体金酶免疫免疫荧光放射免疫PCR-免疫分析时间分辨荧光分析Chapteroutline沉淀反应（Precipitation）凝集反应（Agglutination）补体结合反应中和反应概念：沉淀反应又称免疫沉淀反应，是指可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病理浸出液或血清以及其他来源的蛋白质、多糖、类脂质体等）与相应抗体在液相或凝胶中特异性结合后，形成的免疫复合物在一定条件下出现的蛋白质析出现象。

A.

Precipitation

原理：蛋白质表面—极性分子—水膜

适量电解质+比例适合的抗原抗体=沉淀

A.

Precipitation

沉淀反应的类型溶液中沉淀反应凝胶中沉淀反应絮凝沉淀试验，环状沉淀试验，免疫比浊法，免疫沉淀技术，免疫共沉淀技术

单(双)向免疫扩散，免疫电泳，对流免疫电泳，火箭免疫电泳，交叉免疫电泳，免疫固定电泳，免疫印记技术1.溶液中的免疫沉淀反应Negativetest

PositivetestUsesfineparticlesofantigentodetectantibodyinpatient’sserum.1.1絮凝试验(Flocculation)抗原抗体比例是关键！稀释法、方阵滴定法。梅毒的检测1902年，Ascoli建立。早期用途：兽类内脏、皮毛浸液等标本中的炭疽杆菌抗原。

1.2环状沉淀试验(ringprecipitationtest)抗血清抗原37℃与絮凝实验相比：减少了反应体积；提高了反应灵敏度。可用于较少量的抗原检测，如血迹分析、病原昆虫的流行病学分析。原理：抗原抗体充分反应后，所形成的絮状或颗粒抗原抗体复合物会增加反应体系的浊度。特点：现代光学技术与自动分析技术相结合，提高了灵敏度和易操作性。分类：透射比浊法、散射比浊法（灵敏度高）

1.3免疫比浊法(Immunoturbidimetry)YYY光线穿透待测溶液时，会受到抗原抗体复合物的作用而发生散射，散射光的强度与复合物的含量以及散射夹角成正比，因此可以通过测定散射光强度的变化来推测抗原抗体反应的情况。LightsourceDetector1.反应动力学测定2.快速、敏感、精确度高（ng）3.仪器价格昂贵、对抗体要求高散射比浊法(Nephelometry)利用抗原抗体的特异性结合作用，使靶蛋白（抗原）形成抗原抗体复合物并最终从溶液中沉淀出来。第一阶段改进：改变反应条件促进抗原抗体多聚物形成，使其更加容易沉淀。第二阶段改进：加入二抗，促进更大的抗原抗体网络形成。第三阶段（20世纪70年代）改进：采用固相载体提高对靶蛋白的沉淀。细菌蛋白质A，细菌蛋白质G。1.4免疫沉淀法(immunoprecipitation)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是利用抗体将相应蛋白沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子同时被沉淀出来。通过进一步与其他技术结合，如SDS，Westernblot可以进一步对靶蛋白质进行分析。以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。1.5免疫共沉淀法(co-immunoprecipitation)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，保持了蛋白质的天然活性；蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；如用westernblot检验，必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，若预测不正确，实验就得不到结果。优点缺点2.凝胶中的免疫沉淀反应2.趟1单向与免疫冈扩散(Si棕ng克leIm渔mu声no蚀di先ff编us殊io次n)凝胶队中抗励原或激抗体增其中竖之一句保持抄相对冷静止冶，通挤过对农应的膜抗原析或抗勿体分战子的按运动虎而在披合适甘的位是置上然形成要沉淀意。可单用于抗原或抗腰体的忌定量散。2.筋2双向搜免疫慕扩散(D角ou万bl框e挎Im渠mu堪no额di愈ff购us咽io烤n/促Ou精ch悉te姜rl位on剑y全Me巨th赞od弯)Te键st答in勤g谣pe猜rf属or绢me虽d她in圆a选ga垄r自ge娇l.An伪ti鉴ge膝n丑is皆p许la依ce狂d软in园o罪ne滤w物el跨l.An临ti他bo桃dy陵i谱s哄pl腰ac遍e忆in堡o献th按er殊w饭el狠l.Ea眉ch常d冷if课fu昨se晒s榴th抛ro孤ug哲h荷ge听l.If签a哥nt哲ib耗od被y戚is压s用pe盯ci劫fi档c惠to股t铅ha哪t载an驼ti提ge架n,调a驻p孝re脱ci额pi幅ti吩n编li粥ne之w箭il方l浑fo肌rm坡w戚he什re闸t刺he鸦2投m船ee盏t.Ag01/4Ab1/2Ab1/1Ab1/16Ab1/8Ab2.勿3免疫布电泳(I象mm棉un粉oe她le广ct眯ro闹ph划or售es蹦is池)琼脂平板电泳+双向扩散2.勺4火箭眯免疫奶电泳(R五oc可ke罢t醉im闷mu横no锯el猜ec载tr央op险ho么re冠si稍s)单向扩散+水平琼脂电泳pH条件灰：抗体暴分子待不带厅电荷鸦，抗原吹分子独带负测电荷霞。2.蜂5交叉陪免疫耳电泳(R腥oc翁ke职t墨im表mu塌no臂el嚷ec异tr胀op牛ho液re擦si飘s)双向板火箭唱电泳农（电蚕场方陶向垂虽直的旋两次涛电泳仍）抗原冬根据新不同叉迁移液率分例离抗原系抗体拖复合梨物形表成火湾箭峰2.势6免疫熔固定恰电泳(I虽mm棒un跑of色ix复at惹io运n芳El逃ec也tr拣op剥ho熟re巧si桐s)与免袄疫电趋泳原堂理相趟同。电泳绪后直标接将抛抗体五加于裕蛋白蓄质区军带表罪面，物形成劝的复段合物芝嵌于璃固相萝支持百物中黎。洗去功游离州的抗毙原抗习体后谣，染绞色观叉察被若固定廉的区规带。An著od遗ePa钟ti黄en游t罪se哲ru编mCa汪th能od士e(+绣e迟le归ct馆ro船de啊)贝(厦-腔el辨ec悲tr谢od则e)Ap休pl纤ic沿at痒io盯n呜po鼠in冰tWe净st等er稀n燥bl溪ot彻ti场ng(I恼mm糊un腔ob湿lo眨tt议in留g)19抚79，Re鼻ba捆rt磨&T事ow锣bi肝n--次-笔Id估en死ti猛fi秩ca惧ti塔on劝o漫f沃pr谜ot碑ei叠n肠an柏ti廊ge陈n蒜fo躬ll衡ow厉in监g跳SD京S-夜PA组GE2.照7免疫祥印记(I惧mm拴un踢ob妖lo怜tt缸in章g)WesternblottingSDSIFE（固免）•高分溉辨率•操作京简单•高特胡异性•高灵丈敏度Se勿pa之ra红te讯p华ro称te神in债s跪by量S顽DS迷P潜AG曲ETr博an齿sf禾er备p兆ro丝式te支in封s滑to到m蛾em受br秧an街es践(笋i.的e.罚N怠it敞ro邀ce骑ll李ul姓os变e)Bl袭oc壮k厨no飞n-忽sp俩ec造if垦ic蛋s贷it签es哀o往n就me米mb党ra安neIn值cu睬ba尸te拨w幅it达h贤pr谅im逮ar牵y觉an依ti超bo顷dy纷,过wa涛shIn若cu满ba徒te忙w缘瑞it犯h资se览co锈nd内ar怠y之an封ti葵bo熔dy撞,膊wa刚shDe贞te裁ct舒s旗ec耐on钟da容ry委a北nt瘦ib绍od葵y2.担7免疫其印记(I细mm智un她ob详lo耗tt暴in喘g)2.菌7免疫洞印记(I劣mm盾un再ob举lo威tt屠in银g)颗粒尼型抗分原或细胞研型抗如原与相合应抗弹体结绒合后甩，在苗有适樱当电绘解质株存在潮下，茎抗原顶与抗马体充秋分反疤应，杨相互饮聚集予，形循成肉眼罗可见的凝报集块吐团。B.凝集反应Agglutinogen

抗原尤性质激，反液应方皆式，夜实验灯目的---直接霜凝集裹反应屠（Di丢re靠ct释ag脉gl土ut酷in扇at稿io展n）--搂-间接械凝集晴反应浑（In结di乎re泊ct劳a撕gg怎lu竟ti柏na白ti坊on）--此-血凝葬和血况凝抑蛙制反辱应（In姜hi执bi治ti胡on今o逆f丽Ag眉gl公ut颗in断at辫io槐n）细菌柱、螺捡旋体妨或红足细胞达与其蚊相应衔抗体余直接络混合雹，经姻一定哭时间宋，形跃成细醋菌或光红细数胞凝陕集。Of林te嚼n继pe炎rf牺or葵me惯d邪at露r弹oo线m轰te棒mp伯er掩at于ur折e.Ma姜y裙us误e补ce悠nt爷ri宰fu音ga配ti省on突t烧o灭br赢in旷g厕an语ti榆ge交n积an网d纵an乏ti振bo严dy钻i劫nt归o加cl凝os捉er雪p声ro暮xi咳mi辱ty蚀.某些虏病原掏菌感港染的展检测着（伤斜寒、含副伤悲寒）洲。Cl绸ic请k旁on清i田ma忙ge污a尺t蜘ri击gh伞t掠wa经it歼f蒸or证a世ni耽ma青ti哑on福t欢o刑be漏gi谢n.1直接痒凝集Di勾re息ct石A坝gg棒lu圈ti彻na昨ti淡on载体弊种类：血细问胞聚苯困乙烯熄胶乳梨颗粒央（羧棚化）2间接阴凝集Pa缝ss匠iv两e锐Ag纲gl捧ut桶in匙at幻玉io匙n与直仔接凝跟集不催同，欧间接轻凝集劲反应陡中的择可溶路性抗刊原或渡抗体静需要钥吸附吉或偶云联在读一种与免晕疫无恼关的、具栽有一高定大躺小的坑不溶冰性颗竿粒物破的表豪面，萌使其欲成为致敏猎载体。间接阻血凝交试验呀，胶饥乳凝茂集试买验，谎活性乖碳粒闸试验正向冤间接桨凝集护反应隔，反茶向间嘴接凝奸集反季应An罗ti非ge光nson举a靠c独ar档ri调er胖m榨ol判ec斗ul简e,杨s扎uc忌h鲁as寒l须at恩ex赔,榜co搜mb基in策e言wi帅th姻p瞒at书ie敬nt剖’s骗s虫am至pl购e亭fo板r海an海ti甚bo婆dy居d绪et士ec茂ti进on臣.Cl水ic袖k计on武i偿ma猪ge镜a拣bo车ve盒w续ai盯t笑fo罚r跌an眠im守at役io荷n咬to薪b虽eg车in悠.2.枪1正向构间接贯凝集Fo扬rw怪ar勉d槐Pa酱ss孕iv哥e痕Ag车gl诵ut铲in民at明io舞nAn症ti弄bo朽dyis堡b毫ou树nd女t两o呢th焦e盈ca穿rr无ie闻r猪mo猎le萍cu许le植,也wh锄ic达h梢is怜t跑he格n之mi支xe依d草wi忌th佣p鞠at担ie挠nt撤’s平s占am毯pl惑e蚀to谊d称et窝ec暴t所an滨ti对ge趴n.Cl着ic郊k买on炸i制ma芽ge园a祥bo项ve监w残ai祝t挺fo置r映an喊im绕at挺io情n泊to尚b品eg绕in做.2.峡2反向霸间接燃凝集描试验Re勤ve溜rs夜e逗Pa于ss救iv抛e贝Ag旱gl饶ut凝in欢at切io茄n提高了单纯抗原抗体反应的灵敏度对微量抗原（真菌毒素）检测具有一定优势An溉ti至bo谱dy落r趣ea政ge灭nt宾i极s呜co乡丰mb拨in宅ed融w劈燕it部h疲pa妨ti淋en沸t’它s辉sp密ec聪im洒en罢.If纷p羽at塔ie妄nt常’s指s楚pe链ci矩me钩n墨co午nt可ai覆ns界t材he隆a护nt杂ig岭en蔑f戴or桥t物ha波t反an剩ti舞bo巩dy句,仰th细ey稳w脾il必l姑re晴ac策t.Er鱼yt尚hr撑oc腿yt辜e（红狱细胞影）is矮a胶dd录ed肌.Apo遗si夺ti倡vere醋ac川ti刚on胁w却il击l诱sh命owno荒a开gg羡lu汽ti费na辆ti裹on.Ane球ga侵ti螺vere粪ac土ti惠on至s作ho迈wsag涛gl需ut附in隙at夸io文nbe露tw乞ee闸n殖re元ag妨en袋t东an尺ti牺bo肃di叼es开a拍nd然a纷nt辱ig僻en用.YYYYYY3血凝和抑制丈反应In痕hi浑bi湖ti效on息o非f箱Ag避gl蛮ut宵in遭at袜io地n+-含血生凝素桑（HA）的倍病毒霸能凝讽集人肥或动云物红普细胞够，称举为血专凝现色象！Ju肤le课s腾Bo栗rd支et（18兼70如-1修96粉1）Di象sc惩ov克er佳er启o杂f支co按mp白le膜me紧nt19世纪衫末概念荣：新鲜收血液扬中含阿有的欲一种读不耐烤热成传分，掘可辅需助和政补充隆特异增性抗汪体介膊导的犁免疫科溶菌童、溶唯血作养用；特点辨：补体往的激俱活没赌有抗腿原抗桶体特鸽异性截；原理胃：作为赚一种液通用闭试剂贯来检爷测反旷应体宪系中骂抗原警抗体岭复合斤物的照存在象，并落利用足补体丈对红塘细胞剪的裂截解作和用，偏通过深红细冒胞的读变化喷可以刮很容敲易的抬对反尊应进那行示役踪。

C.补体参与的抗原抗体反应补体徒结合各试验仪原理受检规系统指示奋系统溶血境反应补体费结合载试验1.仅有你抗原柔或抗美体补体红细毕胞溶血拔素阳性阴性2.抗原跌抗体罗反应红细沈胞溶血称素阴性阳性抗原抗体补体抗原/抗体

D.中和反应中和