类风湿诊断与抗CC抗体检测

类风湿诊断与抗环瓜氨酸肽抗体

（抗CCP抗体）的检测anticycliccitrullinatedpeptideantibodyanti-CCPantibody概述

类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病。由于一方面自身免疫的病理机制决定了这类疾病的疑难和复杂；另一方面由于这类疾病累及多个系统和器官，临床表现较为复杂。所以RA以往在临床上更多的表现为“疑难杂症”。风湿性疾病的现状可以概括为“四多”，累及脏器多；起病首发表现多；误诊误治多；致残多。从而也引发出另外一多“病人花费多”！由于风湿性疾病早期表现不典型，有些疾病有两种或两种以上表现相互重叠；同时，风湿性疾病存在相互转化的情形；所以风湿性疾病的早期诊断有一定的困难。因此，对风湿性疾病患者的随访和定期检查显得尤为重要，这也是验证我们早期的诊断是否正确的必由之路。正确的早期诊断是采取规范化治疗、提高患者的生活质量、改善预后的前提。美国风湿病学会（ACR）1987分类标准①晨僵;②3个或3个以上关节肿胀（软组织）;③手关节肿胀（近端指间关节，掌指关节或腕关节）;④对称性肿胀（软组织）;⑤皮下结节;⑥血清类风湿因子阳性;⑦骨关节X线片示手或腕关节侵蚀性缺损和（或）关节周围骨质疏松。以上1～4项必须为医师所见，持续6周或以上，具备上列7项标准中的4项，即可诊断类风湿关节炎。ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）2009年的RA分类标准和评分系统类风湿关节炎的早期诊断和早期治疗已成为治疗类风湿关节炎迫切需要，以往的分类标准不能达到早期诊断的目的，分类标准不等于诊断标准。临床工作更需要一个可靠的疾病缓解标准（包括临床缓解与结构进展等问题）。但实际上制定一个早期类风湿关节炎的分类标准很困难，有人提出了炎性关节炎的概念，甚至提出了早期炎性关节炎的概念，正是因为这部分患者炎性关节炎不是全部，而是部分发展为类风湿关节炎，在新的分类标准中如果判断有可能发展为持续炎性关节炎或破坏性关节炎，这类关节炎就被认为是类风湿关节炎。2009年的RA分类标准和评分系统必要条件至少一个关节肿痛，并有滑膜炎的证据（临床或超声或磁共振成像）在未分化关节炎中需要排除其他疾病引起的关节炎症状和体征。其他条件①血清学：抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）和类风湿因子（RF）;②受累关节的种类（小或大关节）和数量;③滑膜炎的病程;④急性血象反应：红细胞沉降率（ESR）和C-反应蛋白（CRP）。类风湿关节炎的诊断诊断第一步满足2项必要条件，并有常规典型放射学RA骨破坏的改变，可明确诊断为类风湿关节炎，类风湿关节炎的诊断诊断第二步如没有常规典型放射学类风湿关节炎骨破坏的改变，需要进入以下分类评分系统，请记住以下分值表中的得分。不同的关节受累情况再加上区域辨别条件中的任何项目，评分大于6分提示为确定的类风湿关节炎ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）2009年的RA分类标准和评分系统

受累关节数分值（0~5分）1

中大关节02~10

中大关节11~3

小关节24~10

小关节3>10

至少一个为小关节5血清学抗体检测（0~3分）RF或抗CCP均阴性0RF或抗CCP至少一项低滴度阳性2RF或抗CCP至少一项高滴度阳性3滑膜炎持续时间（0~1分）<6周0≧6周1急性期反应物（0~1分）CRP或ESR均正常0CRP或ESR增高16分或以上肯定RA诊断

类风湿关节炎的诊断诊断第三步树枝计算法，根据关节受累情况：①》10个关节（至少1个小关节）;②4～10个小关节;③1～3个小关节;④2～10个中大关节;按图2是或否继续分类。树枝计算法用文字描述：①如满足受累关节大于10个关节（至少1个小关节）（5分）同时满足血清学阳性（或滑膜炎病程≥6周，或ESR/CRP升高），评分≥6分;②如满足4～10个小关节受累（3分）同时需要满足血清学高滴度阳性，或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程≥6周（或+ESR/CRP升高），评分≥6分;类风湿关节炎的诊断③如满足1～3个小关节受累（2分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程≥6周（或+ESR/CRP升高），或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程≥6周+ESR/CRP升高，评分≥6分;④如满足2～10个中大关节受累（1分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程≥6周+ESR/CRP升高，评分≥6分。所以只要满足以上任何一种情况，即提示为确定的类风湿关节炎。实验室检查目前临床上对于RA的疑似患者所采取的初步筛查实验室检测手段多为常规风湿四项，为血沉检测（ESR）、C反映蛋白检测（CRP）、类风湿因子检测（RF）、抗“O”检测（ASO）。ESR和CRP与RA的活动性有关，其检测结果受多因素的影响，故只作为病情活动性的参考指标；ASO是一项排除性指标。这三项检测对于RA疑似患者的早期诊断意义不大。RF是目前最为常用的RA诊断指标，但目前常用的RF检测多为检测IgM型，而IgM-RF在RA诊断中的敏感性只有40～70%，特异性只有70%左右，同时尚可见于5%的正常老年人、其它自身免疫性疾病、肝炎、结核等疾病。RF阴性并不能排除RA的诊断，约30%的早期RA患者RF为阴性。所以单纯依靠常规风湿四项检测对于RA作出早期诊断并指导临床治疗还远远不够。实验室检查近年来形成了一些敏感性和特异性都非常高的RA诊断技术，如抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）检测、抗角蛋白抗体（AKA）检测、抗RA33/RA36抗体检测、抗Sa抗体检测、抗核周因子抗体检测等。以上抗体中两项同时阳性者RA的可能性高达91.3%。其中，抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体检测对早期RA诊断的敏感性和特异性高，是目前最常用的早期诊断指标。抗CCP抗体的定义：一种自身抗体。是类风湿性关节炎特异而敏感的早期诊断指标，可鉴别侵蚀性、非侵蚀性类风湿性关节炎，阳性者通常出现或易发展为严重的关节骨质破坏。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对类风湿性关节炎（RA）具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。研究简史

抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）ELISA法是1998年Schellkens等建立起来辅助诊断RA的检测方法，该技术一出现，立即备受关注，现已有商品供应。按照前丝集蛋白cDNA序列，人工合成可能具有抗原表位的9~19个氨基酸短肽，并经胍氨酸化修饰，经ELISA筛选出具有抗原性片段。检测鸭方法现有EL字IS拔A法、湿增强司化学乔发光馆法、意胶体低金法张目前验国内守已有夺许多缸厂家草有商给品试汪剂盒引供应且。EL畏IS家A检测任原理应用壳双抗刮体夹窜心酶美标免猫疫分进析法奸测定移标本藏中CC汤P水平蛾。用痰纯化里的抗钟体包马被微训孔板焦，制鸭成固耗相抗尝体，练往包抹被单窗抗的姜微孔漠中依墓次加凶入CC凉P抗原泻、生近物素沟化的饼抗人CC风P抗体鼠、HR苦P标记绘的亲表和素物，经浆过彻逮底洗流涤后错用底浇物TM抵B显色壶。TM批B在过蒙氧化息物酶居的催亲化下质转化饿成蓝赤色，泼并在打酸的爽作用曲下转饥化成兽最终歼的黄柳色。秘颜色粥的深徒浅和仇样品浓中的CC勇P呈正床相关查。用炒酶标久仪在45堂0n嗽m波长泡下测厨定吸穿光度(O观D值)，计哑算样洒品浓漠度。检测使范围哗：3.判9食ng牺/m顾l弊-2元50巧n击g/咐ml增强规化学镇发光细法宝原理利用识抗原险抗体厕特异绞性结芬合及破酶底浇物Lu管mi伙no杨l发光贺体系姥定量袭检测CC拨P。1．灵近敏度扫：10滑U/驾ml寻2．特胸异性勺：与1m株g/壳ml的脂糟蛋白震、25旧mg颤/m继l的球饺蛋白猫、0.娱1m最g/切ml的血植红蛋葬白、0.涛1μ橡g/健ml的透带明质远酸、2m晓g/竖ml的粘解蛋白衣、0.掩05慕mg临/m聪l的β2孩-微球岸蛋白兔不发惜生交谅叉反办应。3．精隆密度尝：批伴内CV值小爸于10占%、批否间CV值小兼于15分%。4．线金性范餐围：0～16盲0U剧/m哭l胶体剪金法掏原过理采用伤胶体济金免朵疫层蹄析技刷术，飘以间惹接法桐检测然血清脖中的学自身麦抗体甲。检测疾结果吩：阴丢性、增阳性标本裤的采益集及谅保存1.细胞宽培养谢物上僵清：活请离缘瑞心后栗收集川上清忍，并善将标负本保基存于-2抄0℃，且月应避蠢免反推复冻列融。2.血清购：标身本请迁于室背温放券置2小时史或4℃过夜脖后于10史00商x激g离心20分钟灰，取避上清猛即可魂检测唇，或显将标脚本放洪于-2积0℃保存么，但俊应避间免反瓦复冻欢融。3.血浆唱：可荒用ED冲TA或肝相素作请为抗登凝剂喉，标屋本采渔集后30分钟往内于2遗-美8°狱C歌1阿00伸0用x不g离心15分钟司，或博将标厦本放资于-2固0℃保存较，但捧应避宾免反豪复冻备融。EL膝IS充A操作本注意飞事项1.洗涤夏过程疫非常待重要足，不庸充分塞的洗棉涤易愿造成顷假阳哨性。2.一次破加样脉时间亚最好禽控制忘在5分钟盯内，炸如标苏本数归量多钟，推抱荐使移用排字枪加着样。3.请每历次测涉定的但同时示做标冷准曲氏线，杰最好蝴做复正孔。4.如标句本中对待测挂物质洋含量溜过高娇，请长先稀做释后须再测扎定，梦计算券时请胞最后瓦乘以梳稀释替倍数黄。5.在配眨制标聪准品行、检嗽测溶慌液工粒作液灿时，迹请以侧相应音的稀觉释液求配制污，不僚能混肺淆。6.底物榆请避煤光保捷存临床凝应用1．敏成感性捎和特摩异性隶：抗CC侄P抗体锯与RF具有召相同幕的敏奸感性胡（抗CC乳P抗体魂：80％征，RF：79％）滑，但册特异述性更击高（当抗CC碰P抗体锤：96％，RF：63％）洲。2．可液应用奥于Ｒ顺Ａ早诸期诊宗断：苹研究蜻发现朝抗Ｃ府ＣＰ插抗体怪与早惊期Ｒ轧Ａ强酸相关辆，在79％的滴早期驼患者亮中可央检出么抗CC恢P抗体胡，阳搅性预眨测值油为84络%。3．区独别RA和其浇它风爽湿性简