医疗器械生物学评价 第五部分 体外细胞毒性试验

精整医器生学价第分体细毒试1范围GB/T16886本分述评医器体细毒的验法这方规了列试以接通扩的式培细接和行育a）器的提，／）器接。这方是相的物数定乳物胞体生学应2范引文下文中条通GB/T16886的本部的用成本分条。是注期引文，随所的改（包勘的容或订均适于部，而鼓根本分成议各研是可用些件最版。是注期引文，最版适于部。GB/T16886.1疗械物评第1分评与验（）医疗械物评第部分样制和照料（idtISO10993-12:1996）

精整3术语与定GB/T16886.1/ISO1993-1中立以下术和义用本分3.1阴对材negativecontrolmaterial按本分验不生胞性应材。注：阴性照的目的是验证背景应，例如高密度聚烯

）

已作为合聚合物的阴性对照材，氧化陶瓷棒则用牙科材料的阴性照物。3.2阳对材pos按本分验可现胞性应材。注：阳性照的白目的是验证相试验系统的反应，如用有机锡作稳定剂的聚乙烯对照，酚稀释液用于浸提液的性对照。_____________________________________

）已用作固材料和浸提液的阳高密度聚烯可从美药典委员会（和Hatano研究所食品和品安全中心（Ochiai729-5,Hanagawa.257-Japan）得。提供这一信息是为本部分使用者提供方便，但对使用该产品提供担保。有机锡聚氯乙烯阳性对照材料可从SIMSPortexLtd,Hythe,Kent,CT216JL,UK（产品号码499-300-000）得。ZDEC和ZDBC聚氨甲酸酯可从Hatano研究所食品和药品安中心（获得。提供这一信息是为部分的使用者提供方，但ISO使用该品不提供保。3.3试对在加验料条下按提件试步得的提质。注：在本分中，该定义取代GB/T16886.12/lSO10993-12中给出的定义。3.4培器

精整适于胞养器，插璃养、料养或料孔培板微滴板器。注，在这试验方法中，这些器只要符合组织培养别的要求并适用于哺乳动物细胞培养．以互换使用。3.5近合subconfluency在数长末约80%细汇。品备4.1总则供品选：）料提液和或）料身样制应合CB/T16886.12/ISO10993-12。4.2材料浸液制4.2.1浸原则为测潜的理危，浸提条应拟严临使条但应致验料生诸如化溶或学构变明变。注：浸提中任何内源性或外源物质的浓度及其接试验细胞量取决于接触面积、浸提体积pH化学溶解、扩散率、溶质、搅拌、温度、时间和其他因。4.2.2浸介质哺动细检中使下一或种剂对提质选择进验：含清养；无清养；c)生理水液d)其适的剂注：溶剂选择应反映出浸提的的，并应考虑使用性和非极性两种剂。适宜的溶剂包纯水、植物油、二甲基亚（DMSO）在所选择的测试系中．如浓度大于0.5%（体积分数），则有细胞毒性。4.2.3浸条件lSO10993-12的本求

精整a)37℃±2℃不于24h；b)50℃±℃72h±；℃±℃±；℃±℃下0.2h。可据械性具使情选推的件当提程用血培基，能用4.2.3.2a）规的提件4.3直接接试材的备4.3.1在胞性测，种状尺或理态即液或态的料经整可行试固样品至有个面其形和理态样应行整4.3.2应虑验样的菌。用试系之，备验料应虑菌法灭剂器械影。4.3.3对体行试应）接着；b）着具有物性吸性基上注：滤膜适用的基质。4.3.4对吸性材，果能试前用养将浸，防收试器中培基细胞5.1先用建的胞并从认的源取

）5.2需特敏性，能用直由体织取原细、胞和官培养，需明反的现和确。5.3胞原培贮时应放相培基，℃℃以冻，养内有胞护，二甲亚或油，期存几至年只在-130或130以下冻。5.4验使无原污细，使前用靠法测否在原污。培养6.1养应菌6.2血或血培基符选定胞的长求

精整注培基允含对验不影的生。培基稳性其分贮条有含氨胺血的培基2℃～℃条件贮不过周含氨胺无清养在2℃～8℃条下存超2周6.3培养基pH值应为细胞种养备7.1选的胞和养制试验需够细。用存胞，加细保护应去使前少代养次7.2出胞用宜酶散和／机分法备细悬液————————————3）推荐的细胞系如CCL1（NCTCclone929），（Balb/3T3cloneA31、（MRC-5）（Wl-38）（Vero、CCL10[BHK-21(C-l3)和。这一信息只是为部分的使者提供方便，但ISO对使用该产品不提供担保。也可使用其能得出相同或更佳结的细胞系。验骤8.1平行样至采三平试样数对数8.2浸提液验8.2.1该验于细毒定和量价8.2.2从续拌细悬液吸等的浮，入浸液触每培器内轻转培器使细均地散器的面8.2.3根培基择或含5%（帜数）二氧碳空作缓系在℃2温下进培。试应近合层胞新悬细上行如是测隆成应用低细密。8.2.4试前显微检培细的汇和态况8.2.5试可用：浸原；b)以养基稀剂系浸稀液试如用层胞应去养皿的养，每器内加量提或述释。如悬细进试，胞浮制好立将提或述稀释加每平器中

精整8.2.6采水非理提液，提用养稀后在高理容度试验注：建议稀释浸提液时使用浓的（如倍、倍）培养基。8.2.7加等的白剂阴及性照至他行血中注：如需，还可以用新新鲜培基做对照试验。8.2.8器按中述样件进培，养间符选方的求8.2.9经至的养，接8.5确定细毒反。8.3直接接试8.3.1该验于细毒定和量价8.3.2从续拌细悬中取量悬液入试验品接触每器内轻平动皿使胞匀分在只皿表。8.3.3根培基择或含5%（积数二氧碳空作缓系，37℃±℃度进培，直培细生至汇。8.3.4试前显微检培细的汇和态况8.3.5弃培器皿的养，新培基各皿。8.3.6在只皿中部的胞上轻放一试样，确样品盖胞表约分操时注防样不耍移，则能导细的理性伤这从移细的片判断注：如可，在细胞加入前将样放入培养器皿内。8.3.7同制阴性阳对材平器。8.3.9去上培基接确细毒反应8.4间接接试8.4.1琼扩散验注：各种同分子量和纯度的琼脂可通用吸性料于脂前用养进湿处，防琼脱水用体色如性可助检细毒。体色可培养或养与品起入如培养加应避条下行胞养以因色光化用而起胞伤8.4.2滤扩试验

精整m、表活剂滤，并入量续拌细悬液轻水转培皿使胞匀分在只滤的面8.5细胞毒判8.5.1可用性或量法测胞性）性价用微检细（如需，用胞学色评诸一形、泡形、落细溶和完性方的化一形的变描性在试报中录以字录以是试验料分有方。细需计含细毒轻微胞性中度胞性重度胞性试报中包评方和价果b）量价：定胞亡细生抑、胞殖细克形。可用观方对胞量蛋总、的放活染的放还或他测参进行量试使的法测结应试验告记。注：一些测细胞毒性的特殊方，可能需要零点或线细胞培对照。8.5.2应重择价法试样如释对验统或检有响物时试结可无。注：评价胞活力，释放甲醛的料须经过可靠的试验证。8.5.3各平培皿检结如显差