高效液相色谱常见故障排除及维护保养

关于高效液相色谱常见故障排除及维护保养第1页，课件共45页，创作于2023年2月

一、高效液相色谱仪器出现故障可以从多方面入手1.从部件的运转情况推测，如压力、流速的变化2.从色谱图的异常情况推测，如出峰时间、峰形3.从数据结果中分析第2页，课件共45页，创作于2023年2月（一）、从压力变化判断 1.压力无现象判断故障排除面版灯不亮电源不通检查电源接头松脱拧紧接头泵头漏液接口太松拧紧泵头螺丝泵密封垫磨损更换密封垫第3页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除泵不送溶剂泵头有气泡排气泡，溶剂需脱气使用的溶剂黏性太高换低黏性溶剂溶剂贮液器中过滤器脏清洗贮液瓶、过滤器排空阀打开关闭排空阀控制器设定不正确设置正确流动相不够补足流动相第4页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除压力值高泵流速设定太高设定正确的流速流动相使用不恰当使用恰当的流动相缓冲结晶盐沉淀冲洗样品与流动相不互溶稀释或改变流动相柱温太低升高温度色谱柱性能下降换柱2.压力高第5页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除压力值高溶剂贮液器中过滤器脏清洗链接管路阻塞冲洗，必要时更换进样阀阻塞冲洗进样器第6页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除压力值低泵流速设定太低设定正确的流速色谱柱选择不恰当更换恰当的色谱柱柱温过高降低柱温系统漏液检查漏液位置并维修流动相使用不当改变流动相3.压力低第7页，课件共45页，创作于2023年2月4.压力不稳现象判断故障排除压力变化重现性不好采用梯度所引起的压力是正常泵内有气泡溶剂脱气不适当排气泡，溶剂需脱气压力波动泵密封垫损坏更换密封垫溶剂混合器故障清洗或更换混合器漏液连接口太松拧紧接口管路损坏更换第8页，课件共45页，创作于2023年2月1.峰前沿现象判断故障排除峰前沿柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度（二）、从色谱图的异常情况推测第9页，课件共45页，创作于2023年2月2.峰拖尾现象判断故障排除峰拖尾柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相第10页，课件共45页，创作于2023年2月3.峰变宽现象判断故障排除峰变宽柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相流动相流速太低调节流速第11页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除峰变宽缓冲液浓度太低增加浓度系统没到达平衡使系统到达平衡进样器问题检查进样器环境温度变化使用柱温箱漏夜检查漏夜的位置并维修出现两个或多个未被完全分离的物质的峰选择其它色谱条件以改善分离效果检测器时间常数太大使用较小的时间常数第12页，课件共45页，创作于2023年2月4.峰分叉现象判断故障排除峰分叉柱性能下降更换色普柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度样品溶剂不溶流动相改变溶剂或采用流动相溶解样品第13页，课件共45页，创作于2023年2月5.无峰现象判断故障排除无峰检测器参数设置错误设置正确的检测器参数样品降解检查样品配制过程，更换样品自动进样器故障检查进样器无样品加样品检测器与数据处理装置链接故障检查并正确链接第14页，课件共45页，创作于2023年2月6.负峰现象判断故障排除出现所有负峰连接数据处理系统信号线接反正确连接记录仪或检测器信号极性相反改变极性设置出现一个或几个负峰离子对分离体系对峰的影响在流动相中溶解样品使用的流动相吸收高使用流动相稀释样品自动进样器注射进空气清洗自动进样器第15页，课件共45页，创作于2023年2月

7.鬼峰现象判断故障排除色谱图出现鬼峰样品前处理时产生降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品前一次进样的洗脱物增加分析时间或梯度洗脱、提高流速、如问题仍存在，两次进样间用强溶剂冲洗色谱柱注射器脏清洗注射器、冲洗进样口第16页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除色谱图出现鬼峰流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂柱被污染清洗柱或更换柱六通阀污染清洗六通阀检测器污染清晰检测器管路污染冲洗流动相中含有稳定剂或稳定剂变化使用无防腐溶剂第17页，课件共45页，创作于2023年2月8.保留时间变化现象判断故障排除保留时间不重复系统不问或未达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温波动大使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱被污染冲洗柱或更换柱溶剂配比不合适调节溶剂配比进样体积太大或样品浓度太高减小进样体积第18页，课件共45页，创作于2023年2月9.保留时间不断变化现象判断故障排除保留时间不断变化流速变化重新设定流速,检查泵是否正常工作系统没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡柱被污染冲洗柱或更换柱流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂系统泄漏检查并进行维修第19页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除保留时间不断变化流动相脱气不够充分清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂室温变化使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱恒温箱设置有误设置正确的温度第20页，课件共45页，创作于2023年2月10.基线漂移现象判断故障排除基线漂移系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温不稳使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂流动相脱气不充分脱气重新平衡系统第21页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除基线漂移流动相配比不当或流速变化更改配比或流速柱被污染冲洗柱或更换柱固定相流失为说明问题存在，用一段连接管路代替色谱柱，通流动相检测基线检测池被污染或有气体用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池第22页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除基线漂移测定的波长选择有误使用分光光度计说明背景吸收，如背景值高，说明流动相含有紫外吸收化合物导致基线漂移。使用的流动相应在紫外截止波长以外，或更换溶剂系统泄漏检查并进行维修样品中有强保留的物质用强度合适的溶剂清洗色谱柱第23页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除无规则基线噪音系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡系统泄漏检查并进行维修流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂柱被污染冲洗柱或更换柱色谱柱填料流失或阻塞更换色谱柱11.无规则基线噪音第24页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除无规则基线噪音流动相混合不均或混合器工作不正常维修或更换混合器检测池被污染或用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池系统内有气泡用强极性的溶剂清洗系统检测器内有气泡清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器检测器灯能量不足更换灯第25页，课件共45页，创作于2023年2月12.规则基线噪音现象判断故障排除规则基线噪音流动相、检测器或泵内有气泡流动相脱气，冲洗系统除去检测器或泵内的空气室温不稳稳定环境温度。使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相回收使用除非特殊需要不使用回收溶剂流动相混合不完全使流动相混合均匀或使用低黏度的溶剂第26页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除规则基线噪音泵振动在系统中假如脉冲阻尼器泵入口管路松或阻塞检查泵入口管路在同一水平上有其他设备关掉仪器，检查干扰是否来自于外部第27页，课件共45页，创作于2023年2月（三）、从数据结果中分析1.定量结果现象判断故障排除精密度降低样品预处理时样品降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品保留时间改变，峰形不正常见“峰形不正常”的故障排除方法检测器响应故障检查检测器第28页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除精密度降低峰积分不正确重新设置参数进样问题（对外标法）随手动进样器的类型不同而异，有下列情况：（1）如使用全部定量环的手动进样器，在进样前需在“取样”状态下清洗三次；（2）如使用部分定量环的手动进样器，进样量需少于定量唤体积的50%第29页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除精密度降低进样问题（对外标法）（3）如使用注射器的手动进样器，需确保进样操作重复；（4）如使用自动进样器需确保正确的进样体积，注射器不含空气，样品瓶有足够的样品，系统不泄漏（5）如手动进样器、自动进样器都使用，应确保系统的平衡第30页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除准确度降低峰积分不正确见“精密度降低”的故障排除方法进样问题见“精密度降低”的故障排除方法样品预处理时样品降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品样品蒸发样品密封保存在适当的温度下第31页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除准确度降低样品前处理不当检查样品的处理过程内标物配置不当配置新的内标物第32页，课件共45页，创作于2023年2月现象判断故障排除峰不能分辨改变保留时间见“保留时间改变”的故障排除数据处理装置的参数不正确适当输入参数，进标准样，提高准确度无峰改变保留时间故障排除方法数据处理装置的参数不正确重新适当输入参数，进标准样，提高准确度鬼峰见“鬼峰”可能的原因见“鬼峰”的故障排除方法2.定性结果第33页，课件共45页，创作于2023年2月二、高效液相色谱仪器日常维护第34页，课件共45页，创作于2023年2月贮液器

清洁是保持流动相贮液器正常使用的关键，必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45μm薄膜过滤。改变流动相时应防止交叉污染，陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃，防止生长微生物和组分改变。贮器内壁定期清洗，里面的附件要经常更换。

第35页，课件共45页，创作于2023年2月泵

泵的密封圈是最易磨损的部件，密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。有人建议3个月换一次垫圈。但也不能一概而论，要看垫圈的材料质量，使用压力大小、保养以及缓冲液的情况而定。第36页，课件共45页，创作于2023年2月采取下列措施可以延长垫圈的寿命：

①每天要把泵中的缓冲液体洗干净，防止盐沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中；

②用HPLC级试剂；

③使用过滤滤芯，以注意防止因泵阻塞

造成压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。第37页，课件共45页，创作于2023年2月泵的压力不稳定

在安装调试时以及在日常使用过程中，若出现压力不稳的现象。原因有几点：

1、管路里有气泡，建议由流动相多走些时间。或打开排空阀，用配件里的针筒多抽几下。还有就是关紧排空阀，堵住检测器上的背压管，使流通池的压力增加，赶出气泡。

第38页，课件共45页，创作于2023年2月2、输入单向阀失效所致，这也是经常遇见的。首先如何判断输入单向阀失效。判断步骤为：

如果是双泵梯度分析系统，故泵压力不稳必然是其中一台泵压力不稳所致，须逐个分析。

第39页，课件共45页，创作于2023年2月a、在不开UV检测器，工作站的前提下，将其中一台泵接上蒸馏水作为流动相。

b、打开排空阀，用针筒抽出些流动相，确认泵中已有该流动相，然后将针筒内的液体排出，并重新接在排空阀上。

c、启动冲洗功能。流量3ml/min，时间5min（注意：此时排空阀仍要打开，否则将冲坏色谱柱）

d、

冲洗完毕后，查看针筒内流动相体积是否为15ml（3×5=15），若正确，则说