血液学一般的检查配套教学课件

实验一血液学一般检查(一)[内容]血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法）白细胞计数（WhiteBloodCellCount）

实验一1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法

该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。实验一血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特定波长（540nm）和光径（比色杯内径1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。原理Hb

Hi+CN-HiCNK3Fe(CN)6实验一[试剂]血红蛋白转化液（文齐氏液）：氰化钾（KCN）0.05g高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]0.20g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）0.14gTritonX—1001.0ml蒸馏水加至1000ml[器材]1.血红蛋白吸管，5ml吸管2.大试管3.722分光光度计上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊[标本来源]

EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血

实验一[操作]1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至20µl。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置5分钟。实验一3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量实验一将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。通过待测标本吸光度值查标准曲线。[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：实验一[参考值]成年男性：（120～160）g/L（130-170）成年女性：（110～150）g/L（115-150）新生儿：（170～200）g/L[注意事项]1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。废液倒入玻璃缸中。2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。3.722分光光度计的使用：转化液作空白(可共用)。透射比模式，开盖调0，闭盖调100；吸光度模式比色。[报告方式]吸光度：Hb：__g/L（小数点后留一位）实验一2.白细胞计数[原理]血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量实验一1.血细胞计数板，盖玻片2.血红蛋白吸管（具有10µl及20µl刻度）3.1ml吸管，小试管，玻棒4.光学显微镜[器材]实验一[试剂]白细胞稀释液：2%冰醋酸[标本来源]EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血实验一1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。2.加血：用血红蛋白吸管取全血20µl，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20µl处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.溶血：混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4.冲池：用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。[操作]实验一5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数（压线细胞：数上不数下，数左不数右）6.计算：白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液内

WBC数。×10：将一个大方格白细胞数换算为1µl

内的白细胞数。×106：1L=106µl。×20：为血液稀释倍数。白白白白白细胞计数区实验一实验一实验一实验一白细胞计数操作步骤实验一[报告方式]左上：右上：左下：右下：换算公式：白细胞数（WBC）：__×109/L[参考值]成人：（4～10）×109/L（3.5-9.5）

新生儿：（15～20）×109/L实验一1、EDTA-K2抗凝全血使用前必须混匀。2、计数盘和盖玻片在使用前需用纱布擦拭干净。3、血红蛋白吸管内腔要干燥，否则会影响吸血量。4、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因

RBC残存而干扰计数使结果偏高。5、显微镜调节：光镜光圈调暗，光源可调亮，微调计数。6、用好的器材及时清洗（Hb吸管、计数盘、盖玻片、吸管）,一次性的塑料吸管、棉球丢垃圾桶。整理台面，血标本和试剂放回原处。7、值日并记录。[注意事项]实验