油脂不皂化物的测定

油脂不皂化物的测定不皂化物是指在规定操作条件下，试样用氢氧化钾皂化后的全部生成物，用一种特定的溶剂提取，蒸发溶剂，干燥后的残留物。不皂化物包括天然类脂物，如：固醇、高分子脂肪醇及萜烯类化合物等。除此以外，任何在103oC的温度下被溶剂提取的不会发的有机杂质（如矿物油等）也可能存在。测定过程中，提取试剂主要采用乙醚，当气候条件或环境条件不允许时，可使用己烷。一.乙醯提取法原理：油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流的情况下进行皂化，用乙醚从肥皂液中提取不皂化物，蒸二蒸发溶剂并对残留物干燥后称量。试剂：（1） 乙醚（不含过氧化物和残留物）（2） 丙酮（3） 氢氧化钾-乙醇溶液，CKOH=1mol/L。在50mL水中溶解60g氢氧化钾，然后用95%乙醇稀释至1000mL。溶液应为无色或浅黄色。（4） 氢氧化钾水溶液，c=0.5mol/L。（5） 酚酞指示剂溶液，10g/L的95%乙醇溶液仪器与设备（1） 圆底烧瓶，带标准磨口的250mL。（2） 回流冷凝管，具有与圆底烧瓶相配的磨口。（3） 500mL分液漏斗，使用聚四氟乙烯活塞和塞子。（4） 水浴锅（5） 电烘箱，可控制温度在（103±2）cCo操作流程：称样一加氢氧化钾-乙醇溶液一回流皂化一加水震荡一冷却一转移一提取一洗涤一蒸发溶剂一残留物干燥一称量一结果计算。测定步骤：称取5g试样，精确至0.01g,放入250mL烧瓶中。加入50mL氢氧化钾溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入100mL水并震荡。如果提取的不皂化物用于测定生育酚，则必须添加联苯三酚且尽快的完成操作（30min以内）。冷却后转移皂化液到500mL分液漏斗，用100mL乙醚分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗涤液倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，小心打开活塞，间歇的释放内部压力。静置分层后，将下层皂液尽量完全放入第二只分液漏斗，如果形成乳化液，可加入少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液破乳。采用相同的方法，每次用100mL乙醚，再提取皂化液两次，收集三次提取液，放入有40mL水的分液漏斗中。轻轻转动分液漏斗。等完全分层后，弃去下面水层，用40mL水再洗涤乙醚溶液两次，每次都要剧烈震荡，且在完成后弃去下面水层。排出洗涤液时需要留2mL,然后沿着其轴线旋转分液漏斗，等待几分钟让保留的水层分离，弃去水层，当乙醚溶液到达旋塞口时关闭旋塞。用40mL氢氧化钾水溶液、40mL水相连续洗涤乙醚溶液后，在用40mL氢氧化钾水溶液进行洗涤，然后用40mL水洗涤至少两次以上。继续用水洗涤，直到洗涤液加入1滴酚酞溶液后不出现粉红色为止。通过分液漏斗的上口，小心的将乙醚溶液全部转移到250mL的烧瓶中，此烧瓶需要预先在（103±2）oC下干燥，冷却后称量，精确至0.1mg，在沸水浴上蒸馏回收溶剂。加入5mL丙酮，在沸水浴上转动是倾斜握住烧瓶，在缓缓的空气流下，将挥发性溶剂全部蒸干。将烧瓶放在（103±2）oC烘箱中，干燥15min，然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。按上述方法每隔15min重复干燥，直至两次称量质量相差不超过1.5mg，如3次干燥后仍然不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。当需要对残留物中游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL乙醇中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇。用氢氧化钾乙醇溶液滴定到相同的终点颜色。以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。同一试样需要进行两次测定。用同样的步骤和试剂量进行空白实验，如果残留物超过1.5mg，需要对试剂和方法进行检查。结果计算：不皂化物含量按下式计算:其中：X——不皂化物含量，以质量分数计，％。m0 试样质量，g。m1——残留物的质量，g。m2——空白实验的残留物质量，gm3——游离脂肪酸质量，如果需要，计算方法为0.28VXc(V为滴定所用氢氧化钾乙醇标准溶液的体积，mL；c为标准氢氧化钾乙醇溶液的浓度，mol/L；0.28每毫摩尔油酸的质量，g)。两次测定结果的算数平均值作为结果。二.己烷提取法：原理：油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流的情况下进行皂化，用己烷或石油醚从肥皂液中提取不皂化物，蒸发溶剂并对残留物干燥后称量。试剂：正己烷沸程40-60oC的石油醚，碘价低于1，且不得含有杂质。10%乙醇溶液。酚酞指示剂，10g/L的95%乙醇溶液氢氧化钾-乙醇溶液，CK0H=1mol/L。在50mL水中溶解60g氢氧化钾，然后用95%乙醇稀释至1000mL。溶液应为无色或浅黄色。仪器与设备：（1） 圆底烧瓶，带标准磨口的250mL。（2） 回流冷凝管，具有与圆底烧瓶相配的磨口。（3） 250mL分液漏斗，使用聚四氟乙烯活塞和塞子。（4） 水浴锅.（5） 电烘箱，可控制温度在（103±2）oC，或者真空干燥器，如旋转蒸发器或其他类似设备。操作流程：称样一加氢氧化钾-乙醇溶液一回流皂化一加水震荡一冷却一转移一提取一洗涤己烷提取物一蒸发溶剂一残留物干燥一称量一结果计算。测定步骤：称取5g试样，精确至0.01g，放入250mL烧瓶中。加入50mL氢氧化钾溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入50mL水并震荡。冷却后转移皂化液到250mL分液漏斗，用50mL己烷分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗涤液倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，小心打开活塞，间歇的释放内部压力。静置分层后，将下层皂液尽量完全放入第二只分液漏斗，如果形成乳化液，可加入少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液破乳。采用相同的方法，每次用50mL己烷，再提取皂化液两次，三次提取液收集在同一分液漏斗中。用乙醇溶液洗涤提取液3次，每次用量25mL，并剧烈摇动，洗涤后弃去乙醇水溶液，每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余2mL洗涤液，然后将分液漏斗沿其轴线旋转。静置数分钟，使剩余的乙醇水相进一步分离，然后弃去，当己烷溶液到达旋塞孔道时关闭旋塞。继续乙醇水溶液洗涤。等完全分层后弃去下面的水层。用40mL水在洗涤己烷溶液两次，每次都要剧烈震荡，且在分层后弃去下面的水层。排出洗涤液时需留2mL，然后沿其轴线旋转分液漏斗，等待几分钟，分层后，弃去水层，直到洗涤液加入加入一滴酚酞指示剂后不呈粉红色。通过分液漏斗的上口，小心的将己烷溶液全部转移到已准确称量至0.1mg的250mL的烧瓶中［此烧瓶需要预先在（103±2）°C下干燥，冷却后称量，精确至0.1mg］，在沸水浴上蒸馏回收溶剂。将烧瓶放在（103±2）oC烘箱中，干燥15min，然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。重复进行干燥操作，直至两次称量质量相差不超过1.5mg，如3次干燥后仍然不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。当需要对残留物中游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL正己烷中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇。用氢氧化钾乙醇溶液滴定到相同的终点。以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。同一试样需要进行两次测定。用同样的步骤和试剂量进行空白实验，如果残留物超过1.5mg，需要对试剂和方法进行检查。结果计算：不皂化物含量按下式计算:其中：X——不皂化物含量，以质量分数计，％。m0 试样质量，g。m1——残留物的质量，g。m2——空白实验的残留物质量，gm3——游离脂肪酸质量，如果需要，计算方法为0.28VXc（V为滴定所用氢氧化钾乙醇标准溶液的体积，mL；c为标准氢氧化钾