实验一双向琼脂扩散试验

演示文稿实验一双向琼脂扩散试验目前一页\总数二十二页\编于二点（优选）实验一双向琼脂扩散试验目前二页\总数二十二页\编于二点目前三页\总数二十二页\编于二点目前四页\总数二十二页\编于二点γμδαε目前五页\总数二十二页\编于二点目前六页\总数二十二页\编于二点实验目的：了解双向琼脂扩散的原理和用途。掌握抗体效价的测定方法。观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。目前七页\总数二十二页\编于二点可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。实验原理目前八页\总数二十二页\编于二点目前九页\总数二十二页\编于二点

将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。双向琼脂扩散试验目前十页\总数二十二页\编于二点一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。

目前十一页\总数二十二页\编于二点

免疫学及免疫学检验

A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜Ab；D：扩散率近似，浓度Ag＞Ab；E：浓度Ag＞Ab，扩散率Ag＞Ab；F：浓度Ag＜Ab，扩散率Ag＜Ab沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系目前十二页\总数二十二页\编于二点

免疫学及免疫学检验

(1)沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。(2)沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。(3)沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。(4)沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。A1：待检抗原；A2：标准抗原目前十三页\总数二十二页\编于二点抗体效价滴定

用梅花型孔，中间放抗原，周围孔放下不同稀释度的相应抗体，以出现沉淀线的最高稀释倍数为该抗体的效价。

免疫学及免疫学检验目前十四页\总数二十二页\编于二点材料与试剂1．琼脂粉2．平皿3．打孔器4．生理盐水或其他缓冲液5.抗原、抗体目前十五页\总数二十二页\编于二点目前十六页\总数二十二页\编于二点操作方法1．称取一定量的琼脂粉，按1.5%的比例加入生理盐水或缓冲液，煮沸融化。2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径3－5mm）打成梅花形孔图。目前十七页\总数二十二页\编于二点目前十八页\总数二十二页\编于二点4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。6．吸取样品加入孔内(约15ul)，，以加满为度。7．加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，37℃自由扩散24h～48h。目前十九页\总数二十二页\编于二点目前二十页\总数二十二页\编于二点目前二十一页\总数二十二页\编于二点结果判定．用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比