植物超氧阴离子自由基含量的测定LT

植物超氧阴离子自由基含量的测定一、 实验目的了解实验原理，掌握实验技术二、 实验原理超氧阴离子（。二）能与羟胺反应生成N03-，反应式为：0毘+NH2OH+2 +H=NO2+H2O2+H2O其中NO2进一步反应生成对氨基磺酸、反应后再生成 a苯胺，最后生成红色的偶氮化合物。其中，偶氮化合物在520nm到560nm下有吸收峰，本次实验在530nm下进行比色。三、 实验材料与仪器植物材料小麦叶片，荠菜叶片试剂NaNO2-AR100卩；蒸馏水；对氨基酸苯磺酸； a苯酸；PBS;盐酸羟胺；对氨基苯磺酸； a苯胺。仪器可见光分光光度计，型号V-1100D四、 实验方法标准曲线1234567NO2-标准液（50卩g/m）00.20.40.81.21.62.0蒸馏水2.01.81.61.20.80.40对氨基酸苯磺酸2.02.02.02.02.02.02.0a苯酸2.02.02.02.02.02.02.0然后置于30°C培养箱中保温30min显色反应测定A530,以NO?-为横坐标，A530值为纵坐标，绘制标准曲线。°二的提取小麦叶片称取1.0g。加入少量PH7.8的PBS研磨。之后定容到5ml。10000rpm45°C离心10min。之后取上清液备用。注：空白对照直接用上清液显色测本底值 NO?含量。*3•组织中°二测定(1)NO2-的产生O'PBS盐酸羟胺标样2.01.50.5调零2.02.00之后置于25oC保温20min（2）NO2-显色，调标准线

上述反应液对氨基苯磺酸a苯胺标样2.02.02.0调零2.02.02.030°C恒温箱中保温30min4.°f含量计算从标准曲线中计算出测定液相对应的 N°2浓度，并换算成超氧阴离子的浓度 （X）,再算出超氧阴离子的含量。。匚含量（ugg-1FW）=2X・Vtn/gFWVs注：Vt为样品提取液总体积；n为稀释倍数；Vs为显色时提取液体积； X为从标准曲线上计算出的N°2的浓度。五、结果与计算每管浓度（卩g0 *16810吸光值0 0.1 0.211 0.445 0.652 0.854 1.005标准曲线如下图:0.80V=0,10306)(+0,01029.*10121.每管浓度（卩g0 *16810吸光值0 0.1 0.211 0.445 0.652 0.854 1.005标准曲线如下图:0.80V=0,10306)(+0,01029.*1012y=0.10306x+0.01029（其中x为NO?y=0.10306x+0.01029（其中x为NO?溶液浓度，y为反应溶2.超氧阴离子含量计算2.1小麦叶片测得的实验数据

（1）测得的吸光值数据:处理本底值试验值A5300.5070.718（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得x（N°-2浓度）：处理本底值试验值X（每管NO-2浓度ug4.8196.867将Xa=4.819、Xb=6.867,Vt=5ml,n=2,FW=1.094g,Vs=2ml分别带入公式°2-.含量（ugg-1FW）°•=2X-Vtn/gFWVs中求出 含量如下:处理本底值试验值°-.的含量（ugg-1Fw）44.04962.7692.2荠菜叶片测得的实验数据（1）测得的吸光值数据：处理本底值试验值A5300.4690.685（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得x（N°-2浓度）：处理本底值试验值X（每管N°-2浓度ug4.4516.546将Xa=4.451、Xb=6.546,Vt=5ml,n=2,FW=1.023g,Vs=2ml分别带入公式O2-.含量（ugg-1FW）O■=2X・Vtn/gFWVs中求出含量如下:处理 本底值 试验值O'的含量（ugg-1Fw） 43.509 63.988六、结果分析由实验数据可得，小麦叶片中°】含量的试验值为62.769ugg-1FW,本底值为44.049ugg-1FW;荠菜叶片中°二含量的试验值为63.988ugg-1FW，本底值为44.049ugg-1FW。**去除本底所含有的°1过后，以小麦为试验材料的试验管 。了的含量为18.675（⑷-gFw）,以荠菜为试验材料的试验管°$的含量为19.939（冯-gFw）。即植物叶片细胞内生理平衡被打破后，氧化态产物因无法被消耗而积累。七•注意事项否则显