紫外可见分光光度计1

一、光的吸收定律（三）Lambert-Beer定律当一束平行单色光垂直通过某一具有一定光照面积的、含吸光物质的稀溶液时，若该溶液均匀、无散射，则在入射光波长、强度及溶液的温度等条件保持不变的情况下，该溶液中的吸光物质对单色光的吸光度A与溶液的浓度c及溶液液层厚度L的乘积成正比关系。

Lambert-Beer定律是分光光度法定量分析的理论依据。一、光的吸收定律（四）吸光系数1.摩尔吸光系数在入射光波长一定时，溶液浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时所测得的吸光度称为摩尔吸光系数，常用ε表示。2.百分吸光系数在入射光波长一定时，溶液浓度为1﹪（W/V）、层厚度为1cm时所测得的吸光度称为百分吸光系数，常用表示。二者的关系：

二、偏离Beer定律的因素

1.化学因素:(1)溶液的浓度(2)物质的化学变化(3)溶剂的影响

2.光学因素:(1)非单色光

(2)反射光(3)散射光

(4)非平行光

3.仪器因素

第三节显色反应及测定条件选择一、显色反应在光度分析法中将被测组份转变为有色化合物的反应，称为显色反应。

显色反应:X＋RXR被测物显色剂

一、显色反应（一）显色剂和显色反应的要求1.被测物质与所生成的有色物质之间，必须有确定的定量关系。2.反应产物必须有足够的稳定性。3.显色剂在测定波长处无明显吸收。4.反应产物的摩尔吸系数足够大(104)，以保证灵敏度。5.显色反应须有较好的选择性，才能减免干扰因素。一、显色反应（二）显色反应的条件

1.显色剂的用量显色剂的用量是通过实验从A—V曲线来确定。

2.酸度显色反应最适宜的pH范围(酸度)是通过实验由A—pH关系曲线来确定。3.显色时间显色时间是通过实验从A－t曲线来确定。

4.温度显色反应适宜的温度仍可通过实验方法从A—T曲线确定适宜温度。

二、测定条件的选择

（一）测定波长的选择选择原则：吸收最大，干扰最小。

（二）吸光度范围的选择吸光度A在0.7～0.2范围时，测定结果的相对误差较小，为测量的最佳区域。

（三）空白溶液的选择1．溶剂空白溶液2．试剂空白溶液

3．试样空白溶液4．平行操作空白溶液第四节紫外-可见分光光度计的结构与光学性能一、仪器主要部件光源—单色器—吸收池—检测器—显示器（一）光源要求：能发射强度足够且稳定的连续光谱，寿命长。

1.钨灯或卤钨灯(适用波长范围是350nm～1000nm)，必须使用稳压电源。

2.氢灯或氘灯(适用波长范围是150nm～400nm)，必须使用稳流电源。一、仪器主要部件（二）单色器

作用：将光源发出的复色光按波长顺序分离成单色光。

组成：狭缝、准直镜、色散元件(棱镜、光栅)。一、仪器主要部件（三）吸收池也称比色杯玻璃吸收池只可以在可见光区使用，石英吸收池可在紫外-可见区使用。盛放参比溶液与盛放样品溶液的吸收池需互相匹配。（四）检测器1.光电管2.光电倍增管II0一、仪器主要部件（五）讯号处理与显示器放大器表头显示数字显示荧屏显示二、分光光度计的类型(一)单光束分光光度计二、分光光度计的类型(二)双光束分光光度计(三)光多道二极管阵列检测的分光光度计二、分光光度计的类型(四)常用分光光度计二、分光光度计的类型(四)常用分光光度计三、分光光度计的光学性能

1.波长范围2.波长准确度3.波长重现性