病原微生物-细菌

病理检验技术

特殊染色病原微生物

细菌细菌(bacteria)是属原核生物界的一种单细胞微生物。细菌体积从1um至数微米,直径约0.8-1.2um。按其外形主要分为球菌、杆菌及螺形菌三大类。球菌菌体呈球形,又分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等；杆菌菌体呈杆状,长短不一,有些杆菌是直的,有些则稍弯曲,有些又有分支；螺形菌菌体弯曲,又可分为弧菌和螺菌。弧菌只有一个弯曲,呈逗点状，螺菌菌体可有数个弯曲。

细菌由细胞壁、细胞膜、细胞质和核质构成。细胞壁是一层较薄的膜状结构,其功能是维持细胞的外形。细胞膜位于细胞壁的内层,由磷脂和蛋白质构成；细胞质为细胞膜所包裹,是细菌的基础物质,内含核糖体等物质。核质多在菌体中央,无核膜和核仁。此外,有些细菌还有荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊结构。

细菌染色常用革兰(Gram)法,该法是由丹麦细菌学家Christiangram于1884年创建，至今有一百多年仍在广泛应用。Gram染色可把细菌区分为两类。标本先用结晶紫染色,再加碘媒染,使之生成结晶紫-碘复合物,此时不同细菌均被染成蓝紫色。继后通过用苯胺、丙酮等分化处理,仍保持不脱色的为Gram阳性菌,完全脱色的或经碱性品红、碳酸锂胭脂红染成红色的为Gram阴性菌。Gram染色,最古老的是Gram法,其后有Gram-Weigert法,Conn等改良Weigert法，Brown和Brenn的改良Gram法,Brown和Hopps改良的Gram法等。不管那一种方法，显示Gram阳性菌都是以结晶紫作为主要染料,结晶紫是一种六甲基对玫瑰苯胺,染色后呈明亮的蓝紫色，是一种较为理想的细菌染料。苯胺结晶紫法

(改良

gram-weigert)(-)试剂配制

1.苯胺结晶紫染液

结晶紫(

crystal

violet)2g

无水乙醇(

absolute

alcohol)10ml

苯胺(

aniline)2ml

蒸馏水88ml

结晶紫溶于无水乙醇,苯胺与蒸馏水盛于小口砂塞瓶加塞后稍用力摇匀混合,再与完全溶解的结晶紫液混合。此液用前需过滤,约可保存2~3个月。

2.

Weigert碘液

碘片(

iodine)

1g

碘化钾(

potassium

iodine)2g

蒸馏水100ml

取蒸馏水4ml,加入碘化钾使完全溶解,继续加入碘片,轻轻摇动使完全溶解后再加入其余蒸馏水。

3.苯胺二甲苯

苯胺(

aniline)1份

甲苯(

xylene)2份

(二)染色步骤

1.组织固定于10%的甲醛液中,常规脱水包埋。2.切片厚4um,常规脱蜡至水。

3.

Mayer苏木精液复染胞核3分钟。

4.流水冲洗10分钟。

5.伊红液于56℃的温箱内染5分钟。

6.稍水洗。

7.苯胺结品紫(用小滤纸过滤在切片上)染色5分钟。

8.倾去染液,用滤纸吸干切片周围染液。

9.

Weigert碘液直接滴在切片上约2分钟。

10.倾去碘液,稍水洗,用滤纸彻底吸干切片上的水分。

11.苯胺二甲苯进行分化,并轻轻摇动切片,必要时可更换新的苯胺二甲苯进行分化，至切片无颜色脱出,立即倾去切片上的苯胺二甲苯。

12.滴入二甲苯以洗去苯胺,然后在镜下观察。如分化不够,可再次滴入苯胺二甲苯进行分化,至切片上革兰阳性菌显示清晰为止。

13.二甲苯反复多