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文档简介

病理检验技术

特殊染色病原微生物

螺旋体螺旋体(spirochaeta)是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状,运动活泼的原核细胞型微生物，具有细菌的基本结构，细胞壁有脂多糖和壁酸。螺旋体在自然界和动物体内广泛存在，而对人类能致病的有以下几种。

1.密螺旋体(treponema)菌体长约6~14um,宽为0.25~0.5um,有8~12个细密而均匀的螺旋,两端尖直。对人致病的有梅毒螺旋体。2.疏螺旋体(borrelia)有5~10个稀疏而排列不规则的螺旋。对人致病的有回归热螺旋体。3.钩端螺旋体(leptospira)菌体细长,螺旋数目较多而细密,一端或两端弯曲成钩状。菌体常屈曲呈C形、S形。常在染色后,由于菌体粗大,细密的螺旋看不清楚。如引起高热、出血和黄疸等多种症状的钩端螺旋体。

梅毒螺旋体多用组织块镀银的Levaditi法显示,切片亦可用Warthin-Starry法、改良的Dieterle法、Steiner和Steiner法,这些都属镀银法。显示钩端螺旋体则多用Warthin-Starry镀银法。回归热螺旋体则可取血液涂片作Giemsa染色。硝酸银法(I)

根据(Levaditi)(一)试剂配制1.2%的硝酸银(silvernitrate)2.还原液

焦性没食子酸(pyrogallicacid)4g

浓甲醛(formaldehyde)5ml

蒸馏水100ml(二)染色步骤1.取组织厚约1-2mm为宜,10%的甲醛固定2-4天。2.流水冲洗一晚。3.95%的乙醇浸泡24小时。4,蒸水没洗,并不时轻轻摇动,至组织下沉为止。5.再换馏水浸洗约10分钟。6.移入2%的硝酸银液(加盖),置于37℃的温箱内3天,其间于第2天更换新的2%的硝酸银液1次。

7.蒸馏水浸洗3次,每次10分钟。

8.还原液(加盖)于室温置暗处2天。

9.蒸馏水浸洗3次,每次约2分钟。

10.常规脱水透明,浸蜡包埋。

11.切片厚6~8um,贴片,烤干。

12.二甲苯脱蜡2次。

13.中性树胶封固。(三)结果

梅毒螺旋体呈黑色或棕黑色,背景呈淡黄色至淡棕黄色。(四)染色机制梅毒螺旋体用通常的染色方法是不易着染的,但它有嗜银性,在一定条件下,螺旋体可从银液中吸附银离子,经还原液处理后,螺旋体内吸附的银离子被还原为黑色的金属银而显色。(五)应用这方法可显示梅毒螺旋体,也可显示钩端螺旋体(leptospira)。梅毒螺旋体有8~12个均匀的螺旋,两端尖直；钩端螺旋体细长,螺旋数目较

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