演示文稿分析方法验证的基本思路

演示文稿分析方法验证的基本思路目前一页\总数三十二页\编于十一点（优选）分析方法验证的基本思路目前二页\总数三十二页\编于十一点3测定方法HPLCGC滴定分析方法类型含量有关物质或溶残溶剂残留含量验证项目系统适应性YesYesYesNo专属性YesYesYesYes(空白校正)精密度YesYesYesYes线性及范围YesYesYesYes准确度YesYesYesNo定量限及检测限NoYesYesNo耐用性YesYesYesYes目前三页\总数三十二页\编于十一点44含量（HPLC）一系统适应性2.专属性3.精密度线性及范围准确度耐用性目前四页\总数三十二页\编于十一点系统适应性是分析方法达到其分析目的的前提；严格说来，作为方法验证的一个项目是合适的；在分析方法验证前应进行系统适应性的测试，并在验证过程中确保系统适应性符合要求。55含量（HPLC）1.系统适应性溶液配制空白溶液；系统适应性溶液；对照液可接受标准满足专论的系统适应性要求；对称因子应在0.8~1.5之间（EP2.2.46）；RSD（EP2.2.46&USP621）需报告内容主峰与已知杂质RT（RRT）；分离度；主峰峰面积及RSD；可能包括拖尾因子或对称因子或理论塔板数

。目前五页\总数三十二页\编于十一点66含量（HPLC）2.专属性溶液配制空白溶液；对照液；供试液可接受标准空白溶液在供试液和对照液中主峰RT处无干扰；供试液中主峰RT与对照液中主峰RT保持一致；供试液与对照液中主峰的峰纯度因子≥995或者符合色谱系统默认参数需报告内容主峰RT及主峰纯度因子目前六页\总数三十二页\编于十一点中间精密度：同一实验室内不同人、不同日期、不同仪器

重现性：不同实验室之间3.精密度——对方法n次重复，不是对某个溶液n次重复重复性溶液配制对照液，2份；供试液，6份可接受标准RSD（n=6）≤2.0%重现性溶液配制同重复性可接受标准RSD（n=6）≤2.0%；RSD（n=12）≤2.0%；（作用不大）重复性与重现性均值的绝对差值≤2.0%；样品检测溶液配制ATS和基地对不同于验证使用的另一批次样品进行检测。可接受标准ATS与基地QC检测的含量的绝对差值≤2.0%。重现性中已经进行，此项不一定必需需报告内容主峰峰面积；6份及12份含量单值，Mean±SD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的绝对差值。7目前七页\总数三十二页\编于十一点8溶液名称进样针数目的空白溶液1或2针消除残留，排除干扰，通常必需专属性溶液1或2针若非综合验证，不必需系统适应性溶液1针看系统适应性项目和要求对照液15针/6针这是真正的系统适应性对照液22针供试液6份各1针对照液12针重现性下进样序列：目前八页\总数三十二页\编于十一点线性和范围是两个不同的概念。应根据方法的特征首先确定范围，然后在范围内验证方法的线性Y轴截距的大小应当根据范围的开始点设定，对于含量等范围较窄，且范围起始点离远点较远的方法，Y轴截距不必需或者应放宽。99含量（HPLC）4.线性及范围溶液配制

50%~150%的线性溶液（至少5个点）可接受标准r≥0.9990;Y轴截距/100%浓度时Y轴响应值的绝对值≤2.0%需报告内容线性点的实际浓度及峰面积；线性图；线性范围；线性方程；相关系数；残差平方和；Y轴截距；Y轴截距的95%CI；Y轴截距/100%浓度时Y轴响应值的绝对值。目前九页\总数三十二页\编于十一点1010含量（HPLC）5.准确度溶液配制

80%，100%，120%的准确度溶液各三份，可用一个母液稀释。可接受标准单个回收率及平均回收率应在98.0%~102.0%；回收率（n=9）的RSD≤2.0%。需报告内容实际测得值；理论值；单个回收率；平均回收率及其95%CI及RSD。目前十页\总数三十二页\编于十一点116.耐用性溶液稳定性溶液配制系统适应性溶液；对照液；供试液可接受标准系统适应性溶液：如分离度符合要求；对照液及供试液：各时间点主峰含量（或峰面积）与0h相比应在98.0~102.0%；

主峰峰纯度因子≥990。需报告内容系统适应性要求；主峰含量（或峰面积）及峰纯度因子；各时间点含量（或峰面积）与0h的比值；符合要求测试点的RSD。色谱条件的影响溶液配制系统适应性溶液；对照液色谱条件流动相比例；流速；pH值；柱温；色谱柱批号。可接受标准同系统适应性项下的可接受标准。需报告内容同系统适应性项下各报告内容目前十一页\总数三十二页\编于十一点12耐用性——个人理解

耐用性的目的是通过有意识地对测定参数进行调整，来测试方法对检测条件变化的容许能力，从而为日常检测提供指导。通常以系统适应性指标来评估

目前的方法验证中，关于耐用性的验证操作方法太过复杂，且对实际检测的指导意义不大。

需思考和讨论的问题：EP、USP中都有在保证系统适应性满足要求的前提下，允许对系统进行调整的参数范围。这里面允许的参数范围要远宽于耐用性验证的范围。请问你怎么考虑这两个参数的范围差别。

目前十二页\总数三十二页\编于十一点1313有关物质或溶残（HPLC）二系统适应性2.专属性精密度检测限及定量限线性及范围准确度耐用性目前十三页\总数三十二页\编于十一点1414含量（HPLC）1.系统适应性溶液配制空白溶液系统适应性溶液对照液

灵敏度溶液可接受标准满足专论的系统适应性要求；对称因子应在0.8~1.5之间（EP2.2.46）RSD（EP2.2.46&USP621）S/N≥10需报告内容分离度或拖尾因子或对称因子或理论塔板数；主峰及已知杂质RT，RRT；主峰峰面积及RSD；主峰信噪比。目前十四页\总数三十二页\编于十一点15152.专属性空白干扰及增敏试验溶液配制空白溶液；供试液；对照液；系统适应性溶液，增敏溶液。可接受标准空白溶液在各杂质及主峰RT处（和/或RRT）无干扰供试液和对照液中已知单杂及主峰与相邻峰的R≥1.5供试液和对照液中主峰及已知杂质的RT保持一致供试液与对照液中主峰的峰纯度因子≥990增敏溶液与系统适应性溶液中的已知杂质RT保持一致增敏溶液与供试液相比，已知杂质RT处峰面积增强需报告内容分离度；主峰及已知杂质峰RT（和/或RRT）及其峰面积；主峰峰纯度因子。目前十五页\总数三十二页\编于十一点16162.专属性（续上）强制降解试验溶液配制未破坏供试液；各破坏试验空白溶液；酸破坏试验；碱破坏试验；氧化破坏试验；光照破坏试验；高温破坏试验。注：1.光照强度总量：ICHQ1B要求要达到1.2×106Luxhours；2.破坏后主峰含量的计算：用未破坏供试液为对照液进行外标计

算破坏后主峰含量，降解率在5~10%，降解率与总杂偏差≤5%可接受标准各破坏溶液中新增降解杂质与主峰及已知杂质R≥1.5（可调整，至少保留主峰与相邻杂质的R的标准）各破坏溶液中主峰的峰纯度因子≥990。需报告内容分离度；主峰峰纯度；主峰含量及降解率；对比破坏前后各杂质变化情况（包括RRT，含量及总杂）；列出主要降解杂质。目前十六页\总数三十二页\编于十一点173.精密度分析重复性溶液配制对照液，1份；供试液或100%加标液或杂质限度浓度的主成分考察溶液，6份可接受标准RSD（n=6）≤10.0%重现性溶液配制同分析重复性可接受标准RSD（n=6）≤10.0%RSD（n=12）≤10.0%；重复性与重现性已知单杂含量均值（或主成分则以主峰计）的绝对差值≤0.05%（可调整）。样品检测溶液配制ATS和基地对不同于验证使用的另一批次样品进行检测。可接受标准ATS与基地QC检测的已知杂质含量的绝对差值≤0.05%，总杂的绝对差值≤0.10%（可调整）需报告内容主峰或已知单杂峰面积；6份及12份主峰或已知单杂含量单值，Mean±SD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的绝对差值。目前十七页\总数三十二页\编于十一点18溶液名称进样针数空白溶液1或2针系统适应性溶液1针灵敏度溶液1针专属性溶液（如必要）1或2针对照液3、5、6针（根据RSD定）供试液6份各1针灵敏度溶液1针系统适应性溶液1针应考虑成本重现性下进样序列：目前十八页\总数三十二页\编于十一点19含量（HPLC）4.检测限及定量限溶液配制对照液逐级稀释至S/N≥3和S/N≥10时的浓度溶液，连续进样三针。可接受标准检测限：S/N≥3;定量限：S/N≥10；RSD（n=3）≤10.0%或15.0%；

定量限≤忽略限（或报告限）。需报告内容信噪比；主峰峰面积及RSD（RSD仅是用于定量限）

；定量限及检测限的浓度及其相当于供试液中主峰浓度的百分比。目前十九页\总数三十二页\编于十一点2020含量（HPLC）5.线性及范围溶液配制报告限~杂质限度的150%（至少5个点）注：若方法描述中对照液的浓度超过了杂质限度，则线性最高点做到对照液浓度的150%。可接受标准r≥0.990;Y轴截距/最低杂质限度时Y轴响应值的绝对值≤5.0%（最大可放宽至10.0%）需报告内容线性点实际浓度及峰面积；线性图；线性范围；线性方程；相关系数；残差平方和；Y轴截距；Y轴截距的95%CI；Y轴截距/杂质限度对应的响应值的绝对值。目前二十页\总数三十二页\编于十一点杂质准确度测定通常采用回收率的方式检测，杂质标准品可得时可行对于原料药，杂质标准品不可得时不可行。对于制剂，杂质标准品不可得时可用主成分代替。应考虑检测验证成本。不一定为做准确度而进行杂质标准品的制备和标定。从定量限起做准确度，有回收率超标的风险。21含量（HPLC）6.准确度溶液配制

报告限，杂质限度，及线性最高点的准确度溶液各3份，可用一个母液稀释。供试液，1份（供试品加标杂质）和/或对照液，1份（主成分方法）注：若本底太高，最低点可从50%做起，或用对照品代替供试品。可接受标准单个回收率及平均回收率应在90.0%~110.0%；回收率（n=9）的RSD≤10.0%。需报告内容实际测得值；理论值；单个回收率；平均回收率及其95%置信区间及RSD。目前二十一页\总数三十二页\编于十一点227.耐用性溶液稳定性溶液配制系统适应性溶液；对照液；供试液可接受标准系统适应性溶液：满足要求；对照液：主峰峰面积与0h相比应在0.9~1.1之间；供试液：总杂含量与0h相比应在0.9~1.1之间；各原单杂含量的极差|An-A0|≤0.05%；不得出现大于0.05%的新杂质。主峰面积变化可以增加，重点考虑杂质峰需报告内容系统适应性要求；主峰峰面积或含量，RRT；各时间点主峰峰面积与0h比值；单杂含量及极差；总杂质含量与0h的比值。色谱条件的影响溶液配制系统适应性；对照液（方法开发时应考虑供试液）色谱条件流动相比例；流速；pH值；柱温；色谱柱批号。可接受标准同系统适应性项下的可接受标准。注：在RSD符合要求的情况下，可减少为3针。需报告内容同系统适应性项下各报告内容。目前二十二页\总数三十二页\编于十一点2323溶剂残留（GC）三系统适应性2.专属性精密度检测限及定量限线性及范围准确度耐用性目前二十三页\总数三十二页\编于十一点2424含量（HPLC）1.系统适应性溶液配制空白溶液；对照液可接受标准对照液中待测溶剂峰与相邻峰的分离度≥1.5；RSD(n=6)≤5.0%或10.0%；需报告内容分离度；待峰溶剂峰的峰面积及RSD。2.专属性溶液配制空白溶液；对照液；供试液；100%加标溶液；专属性溶液（峰鉴别溶剂+对照液）；可接受标准空白溶液在待测溶剂峰的RT处（或RRT）无干扰；供试液和100%加标液与对照液中待测峰RT保持一致；专属性溶液及100%加标液中待测峰与相邻峰的R≥1.5100%加标液和供试液相比，待测峰的峰面积增加。需报告内容分离度；各溶剂峰的RT（或RRT）及峰面积。目前二十四页\总数三十二页\编于十一点253.精密度重复性溶液配制对照液，1份；供试液或100%加标液，6份可接受标准RSD（n=6）≤10.0%重现性溶液配制同分析重复性可接受标准RSD（n=6）≤10.0%；RSD（n=12）≤10.0%；重复性与重现性均值的绝对差值≤1/10溶残限度（对于痕量分析的可以放宽到限度的1/2）；样品检测溶液配制ATS和基地对不同于验证使用的另一批次样品进行检测.可接受标准ATS与基地QC检测的含量的绝对差值≤1/10溶残限度（对于痕量分析的可以放宽到限度的1/2）。需报告内容待测溶剂峰面积；6份及12份含量单值，Mean±SD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的绝对差值。目前二十五页\总数三十二页\编于十一点26溶液名称进样针数空白溶液1或2针专属性溶液（如必要）1或2针对照液6份各1针供试液6份（或100%供试品加标液6份）各1针重现性下进样序列：目前二十六页\总数三十二页\编于十一点2727含量（HPLC）4.检测限及定量限溶液配制对照液逐级稀释至S/N≥3和S/N≥10时的浓度，各平行配制3份。可接受标准检测限：S/N≥3;定量限：S/N≥10；RSD（n=3）≤10.0%或15.0%需报告内容信噪比；待测溶剂峰峰面积及RSD（RSD仅用于定量限）；定量限及检测限的浓度及其相当于供试液浓度的百分比（或ppm）。目前二十七页\总数三十二页\编于十一点2828含量（HPLC）5.线性及范围溶液配制

LOQ~150%的线性溶液（至少5个点）可接受标准r≥0.990;Y轴截距/100%浓度时Y轴响应值的绝对值≤5.0%（最大可放宽至10.0%）。需报告内容线性实际浓度及峰面积；线性图；线性方程；线性范围；相关系数；残差平方和；Y轴截距；Y轴截距95%CI；Y轴截与/100%浓度对应响应值的绝对值。6.准确度溶液配制

50%，100%，150%的加标液各三份，可用一个母液稀释；供试液，2份注：若本底太高，低浓度点可用对照品代替供试品。可接受标准单个回收率及平均回收率应在90.0%~110.0%；回收率（n=9）的RSD≤10.0%。注：痕量分析回收率最多可以放宽到70.0-130.%。需报告内容实际测得值；理论值；单个回收率；平均回收率及其95%CI及RSD。目前二十八页\总数三十二页\编于十一点297.耐用性溶液稳定性溶液配制对照液，1份；可接受标准对照液中待测溶剂峰的峰面积与0h相比应在0.90~1.10之间。需报告内容各时间点主峰峰面积及与0h的比值。气相色谱法，溶液稳定性测试可不考虑色谱条件的影响溶液配制对照液，1份；（方法开发时应考虑供试液）色谱条件色谱柱初始温度；顶空瓶加热温度；载气流速；色谱柱批号；顶空瓶平衡时间。