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文档简介
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酶类概述与分类
酶类
酶具有胶体性质,不耐热,容易被强酸或强碱灭活。根据构成酶的蛋白质不同,酶分为两类,一类是单纯蛋白的酶,如各种水解酶;另一类是复合蛋白的酶,如线粒体内的氧化还原酶,复合蛋白的酶是由酶蛋白和辅酶结合而成,酶蛋白与辅酶两者同时存在时才能起到酶的作用。酶类
概述
酶(enzyme)是生物体内具有催化作用的特殊蛋白质,在细胞各个部位都有酶的存在。人体内不断地新陈代谢反应,都要靠酶的作用。动物体内无数的化学反应,包括合成和分解反应都是由酶来催化的,如果没有酶的存在,体内生物化学反应就不能进行。类
酶和底物形成复合物
酶类
酶对孵育液的作用有较严格的选择性,即一种酶只能对一种底物起催化作用,如琥珀酸脱氢酶只能催化琥珀酸钠的脱氢过程。有些酶特异性较低,可以催化同一种化合物,如水解酶中的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶都可催化β-甘油磷酸钠,分解出磷酸,但在催化时各有不同的最适pH。
酶类
影响酶活性的因素,如:①温度:酶活性有它的最适温度。所谓最适温度,就是在此温度范围内可以达到最大的酶反应。酶反应最适温度约为37℃,若温度增高,反应速度加快;温度降低,反应则减慢。但若温度高达60℃时,大部分的酶会变性而失活。②底物浓度:酶所催化的化学反应速度与参加反应的物质浓度成正比,即所作用的底物浓度越高,反应越快,但达到一定浓度后,如再增加其浓度,反应速度也趋于恒定。
酶类
③pH:大部分酶的活性受孵育液pH所影响,在适宜的pH范围内,酶反应具有最大速度。高于或低于此值,反应速度都会下降,通常称此pH为酶反应的最适pH每一种酶只有在最适pH范围内活性最大。例如:碱性磷酸酶的最适pH为9.2~9,4,酸性磷酸酶的最适pH为4.8~5.2,其他各种酶的最适pH为7.2~7.6。
酶类
能使酶的活性增高的物质称为激活剂(activator),某些金属离子或其他基团可作为酶的激活剂,例如镁离子可激活碱性磷酸酶,钙离子可激活酯酶。能使酶活性降低的物质称为抑制剂(inhibitor),某些金属离子或氧化还原试剂都是酶的抑制剂,如显示酸性磷酸酶时在孵育液内加入0.01mol/L的氟化钠即可抑制该酶活性。又如显示乙酰胆碱酯酶,在孵育液内加入10-5mol/L的四异丙基焦磷酰胺(tetra-isopropylpyrophosphoramide)即可抑制假性胆碱酯酶而显示乙酰胆碱酯酶。
酶类
酶的分类
国际酶学会议根据酶所催化反应的性质把酶分为六类,其分类如下:1.氧化还原酶(oxido-reductases)这是一类转移电子,催化作用物的氧化还原反应的酶,属这类的有脱氢酶,如琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等。氧化酶如DOPA氧化酶和细胞色素氧化酶等。2.转移酶(transferases)是一类催化不同物质分子间某种基团的交换或转移的酶,如γ-谷胺酰转肽酶和磷酸化酶。3.水解酶(hydrolases)是一类增加或除去水,催化水解反应的酶,属这类酶的有碱性磷酸酶和酸性磷酸酶等。4.裂合酶(cases)是催化一种化合物分裂为两种化合物,或由两种化合物合成一种化合物的酶,如亮氨酸氨基肽酶和碳酸酐酶。5.异构酶是催化同分异构体相互转化的酶。如6-磷酸葡萄糖异构酶。6.合成酶是催化两分子化合物相互结合,同时使三磷酸腺苷分子(或其他三磷酸核苷)中的高能磷酸键断裂的酶。如三磷酸胞苷合成酶等。酶类
二、酶的显示方法显示酶的组织化学方法常用以下几种:1.金属沉淀法此法一般应用于磷酸酶的显示,其原理是切片上的酶水解底物β-甘油磷酸钠,释放出磷酸,磷酸与相应的金属阳离子如钙或铅结合而产生不溶性的金属磷酸盐沉淀,此磷酸盐沉淀通常是无色的,但用硫化铵处理后使它转变为棕黑色的硫化物而显色如显示碱性磷酸的Gomori钙钻法。酶类
2.同时偶联法此法是显示各种酶类最重要的方法,其原理是同时使用一种适宣的底物和一种重氮盐(或六偶氮对品红),由于切片上的酶在水解底物时,生成无色的初级反应产物,后者立即与重氮盐(或六偶氮对品红)偶联,生成最终反应产物,这最终产物是有颜色的不溶性沉淀。例如显示酸性磷酸酶的萘酚AS-TR磷酸酯法,偶联后所形成的沉淀牢固,颜色鲜艳。酶类
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