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文档简介

《生物产品的分析与检验》有机酸的分析与检验-----柠檬酸含量的测定生物技术及应用专业教学资源库测定方法二、褪色光度法测定柠檬酸含量（一）测定原理

在HAc-NH4Ac介质中，铁（III）-磺基水杨酸生成紫红色配合物，再向该溶液中加入一定量的柠檬酸溶液，该配合物颜色退至橙红色。在470nm波长处，其吸光度的减少与柠檬酸的含量在一定条件下成正比，从而可求得柠檬酸的含量。（二）仪器设备与试剂

主要仪器设备紫外-可见分光光度计、酸度计试剂10g/L的柠檬酸标准储备液1g/L的柠檬酸标准储备液0.01mol/L的铁（III）溶液0.01mol/L的磺基水杨酸溶液HAc-NH4Ac缓冲溶液0.025mol/L的HCIO4溶液（三）操作步骤1.磺基水杨酸铁配合物吸光度的测定往25mL比色管中依次加入1.0mL铁（III）溶液，4.0mL磺基水杨酸溶液，4.0mLHAc-NH4Ac缓冲溶液，加水定容至刻度。10min后，在470nm处用1.0cm比色皿以蒸馏水作参比测得吸光度A0（三）操作步骤2.标准曲线的绘制

另取6支25mL比色管，同（1）操作，仅在定容前分别加入0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL柠檬酸标准工作溶液，分别测得吸光值A，计算△A=A-A0，以柠檬酸的含量mg/(25mL)为横坐标，△A为纵坐标绘制标准曲线。（三）操作步骤3.样品的测定

精确称取0.1g样品，用水溶液定容至100mL，另取1支25mL比色管，同（1）操作，仅在定容前加入0.5mL样品溶液，测得吸光度Ax，计算：△Ax=Ax-A0。（四）结果记录与计算1.标准曲线的绘制记录表溶液中柠檬酸的含量/[mg/(25mL)]吸光度A参比吸光度A0△A=A0-A0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

（四）结果记录与计算（四）结果记录与计算式中：w---样品中柠檬酸的含量，%m1--从标准曲线上查得25mL样品溶液中柠檬酸的含量，mg；m--待测样品质量，mg；10-3---将mg换算为g的系数；100---配制的样品溶液

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