盐析的影响因素

药物分离与纯化技术课程预处理及固液分离技术—盐析的影响因素盐析的影响因素-预处理及固液分离技术大纲1.盐析用盐的选择2.盐浓度3.pH值4.温度的影响5.蛋白质浓度盐析的影响因素-预处理及固液分离技术盐析作用要强，盐析用盐需有较大的溶解度，盐析用盐必须是惰性的，来源丰富、经济。在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异，一般的规律为：半径小的高价离子的盐析作用较强，半径大的低价离子作用较弱。阴离子盐析效果：柠檬酸＞PO43-

＞SO42-

＞CH3COO-＞Cl-＞NO3-＞SCN-（硫氰酸根离子）阳离子盐析效果：NH4+

＞K+＞Na+

＞高价阳离子；阴离子的影响大于阳离子1、盐析用盐的选择盐析的影响因素-预处理及固液分离技术盐析中常用的盐：硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠。其中，由于硫酸铵价廉，溶解度大，温度系数小，许多蛋白质可以盐析出来，分段盐析效果好，不易引起蛋白质变性，是最常用的蛋白质盐析沉淀剂。1、盐析用盐的选择盐析的影响因素-预处理及固液分离技术硫酸铵的加入有以下几种方法：（a）加入固体盐法用于要求饱和度较高而不增大溶液体积的情况；工业上常采用这种方法，加入速度不能太快，应分批加入，并充分搅拌，使其完全溶解和防止局部浓度过高；（b）加入饱和溶液法

用于要求饱和度不高而原来溶液体积不大的情况；它可防止局部过浓，但加量较多时，料液会被稀释。1、盐析用盐的选择盐析的影响因素-预处理及固液分离技术硫酸铵的加入有以下几种方法：(c)透析平衡法

先将盐析的样品装于透析袋中，然后浸入饱和硫酸铵中进行透析，袋内饱和度逐渐提高，达到设定浓度后，目的蛋白析出。该法优点在于硫酸铵浓度变化有连续性，盐析效果好，但程序烦琐，故多用于结晶。1、盐析用盐的选择盐析的影响因素-预处理及固液分离技术一般说来，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。在进行分离的时候，一般从低离子强度到高离子强度顺次进行。

盐析用盐量可通过饱和度来确定。由于不同的蛋白质溶解度不同，沉淀时所需的离子强度也不相同，如果需要先除去些杂蛋白，然后在较高的饱和度下，沉淀目标蛋白质，则可采用分段盐析。2、盐浓度盐析的影响因素-预处理及固液分离技术改变盐的浓度，可将混合液中的蛋白质分批盐析分开。如：半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白；饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白。图为硫酸铵盐析过程，其最适饱和度是30%，55%。2、盐浓度硫酸铵盐析过程盐析的影响因素-预处理及固液分离技术一般来说，蛋白质所带净电荷越多溶解度越大，净电荷越少溶解度越小，在等电点时蛋白质溶解度最小。为提高盐析效率，多将溶液PH值调到目的蛋白的等电点处。3、pH值盐析的影响因素-预处理及固液分离技术

在低离子强度或纯水中，蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。但在高浓度下，蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降。在一般情况下，蛋白质对盐析温度无特殊要求，可在室温下进行，只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行。4、温度的影响盐析的影响因素-预处理及固液分离技术

沉淀蛋白质盐的浓度范围并不是固定的，而是和起始浓度有关。高浓度蛋白溶液可以节约盐的用量，若蛋白浓度过高，会发生严重共沉淀作用，除杂蛋白的效果会明显下降。在低浓度蛋白质溶液中