粪大肠菌群的测定2

项目四：城镇污水监测

任务7粪大肠菌群的测定

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定1.1方法名称与适用范围水质粪大肠菌群的测定——多管发酵法HJ/T347-2007方法名称适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定适用范围1.2方法原理粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。多管发酵法是以最可能数（mostprobable

number），简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定

2.1培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基成分：蛋白胨10g

牛肉膏3g乳糖5g

氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL

蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。

(2)三倍乳糖蛋白胨培养基按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。注：本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。

(3)EC培养液成分：胰胨20g乳糖5g胆盐三号1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。高压灭菌锅生化培养箱2.2仪器和设备

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定3.1培养基制备及灭菌（1）水样接种量的确定将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水样量可参考下表1。表1接种水量参考表由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的浓度梯度为10-3、10-4、10-5。（2）乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10mL3倍10mL1倍10mL1倍10mL1倍如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1mL或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。（3）准备其他要灭菌的物品（4）灭菌:115OC，20min水源水90ml无菌水9ml无菌水移液管3.2水样制备及稀释（1）采样瓶（2）采集污水处理厂出水口的水样（3）水样的稀释1mL10mL90mL无菌水9mL无菌水原液10-110-21mL1mL9mL无菌水10-39mL无菌水10-49mL无菌水10-51mL10-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml1倍10ml1倍1ml1ml培养条件：37℃、24h3.3粪大肠菌群的初发酵10-41ml10-3生化培养箱1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）3.4观察粪大肠菌群的初发酵结果表2.1记录—初发酵阳性管数由接种量为10-3mL管转接由接种量为10-4mL管转接由接种量为10-5mL管转接阳性管数轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h。培养后立即观察，发酵管产气则证实为菌群阳性。3.5粪大肠菌群的复发酵试验表2.2

记录—复发酵阳性管数由接种量为10-3mL管转接由接种量为10-4mL管转接由接种量为10-5mL管转接阳性管数

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，查表3求得MPN指数，MPN值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。如果接种的水样不是10mL、1mL和0.1mL，而