食管癌放疗前后外周血癌胚抗原mRNA与蛋白检测的对比研究-0

食管癌放疗前后外周血癌胚抗原mRNA与蛋白检测的对比探讨食管癌放疗前后外周血癌胚抗原mRNA与蛋白检测的对比探讨食管癌放疗前后外周血癌胚抗原mRNA与蛋白检测的对比探讨[摘要]目的：

探讨食管癌放疗前后外周血癌胚抗原（carcinogenicembryonicantigen，CEA）mRNA与蛋白的表达及其临床意义。

方法：

收集72例食管鳞状细胞癌（ESCC）患者根治性放疗前后外周血，应用巢式RT-PCR检测CEAmRNA的表达，放免法检测血清CEA蛋白的表达，分析其与临床病理特征及放疗疗效的关系。

结果：

放疗前CEAmRNA阳性者与CEA蛋白上升者分别占47.2%（34/72）与22.2%（16/72），CEAmRNA的诊断效能显著优于CEA蛋白。

并且，放疗前CEAmRNA阳性与淋巴结转移相关（P=0.046），而CEA蛋白上升与食管癌临床病理特征无关。

放疗后CEAmRNA与蛋白表达改变均与放疗疗效有关（P=0.034、0.037）。

结论：

如检测方法得以改进，食管癌外周血CEAmRNA有望成为替代血清CEA蛋白的有效分子标记[关键词]食管癌；放疗；癌胚抗原；分子标记[中图分类号]R735.1[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（XX年3月~XX年3月在我院行根治性放疗食管鳞状细胞癌（ESCC）患者72例，其中，男54例，女18例；年龄46~83岁，中位年龄63岁；原发肿瘤部位：

胸上段15例，胸中段46例，胸下段11例。

依据放疗前影像学检查结果，依照我国《非手术治疗食管癌的临床分期标准（草案）》[4]分期：

其中，Ⅰ期8例，Ⅱ期37例，Ⅲ期27例。

入组条件符合以下标准：

经胃镜病理检查确诊；均为初治患者；无放疗禁忌证；无远处转移；KPS评分70分；预料生存期3个月；试验室检查主要指标无异样。

全部患者采纳6MV-X射线，2.0Gy/次，5次/周，总剂量60~70Gy，分30~35次完成放疗安排。

放疗结束后采纳RECIST实体瘤疗效标准进行评价[5]，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）、进展（PD），有效率=[（CR+PR）/总例数]100%1.2试剂与仪器淋巴细胞分别液购自上海华精生物科技公司；Trizol细胞裂解液购自Invitrogen公司；RT-PCR试剂盒和DNAMarker购自Takara公司；基因引物由上海英骏生物技术公司合成；梯度PCR仪和分光光度计为Eppendorf公司产品；凝胶电泳成像系统为上海培清科技有限公司产品。

CEA蛋白水平来自我院核医学科检查报告（3.5g/L为阳性结果），测定仪器为RocheDiagnostics全自动免疫分析仪。

1.3标本处理及RNA提取放疗前及放疗结束两周内留取外周血10ml（EDTA抗凝），采纳淋巴细胞分别液分别单核细胞，生理盐水洗涤后置于-80℃冰箱备用。

同期收集XX年龄、性别、肿瘤位置、病变长度、分期等因素无关；而血清CEA蛋白水平上升与食管癌临床病理特征均无关。

见表12.3CEAmRNA、蛋白改变与放疗疗效的关系放疗结束后评价，CR8例，PR39例，SDXX年来食管癌的放射治疗效果尚不志向，5年生存率不足10%，失败缘由主要是局部未控或复发[7]，而肿瘤微转移可能在其中起到关键作用。

因此，若能刚好监测循环肿瘤细胞（CTC），将对食管癌早期诊断及指导临床治疗具有重要价值[2]。

由于受到人体免疫系统的清除，存活的CTC数量极少，对检测方法要求较高。

RT-PCR技术具有高度灵敏性，可鉴别106~107个正常细胞中的一个肿瘤细胞，是目前最常用的方法[8]血清CEA是食管癌常用的肿瘤标记物之一，但始终存在敏感性低、特异性差的问题。

近年来，以CEAmRNA为标记的CTC检测则展示出较好的前景，在乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌和宫颈癌等多种恶性肿瘤中得到广泛应用[3]。

如Qiu等[9]报道，103例胃癌外周血CEAmRNA阳性占36.6%，CEAmRNA表达与肿瘤浸润深度和术后复发有关，并且，CEAmRNA比血清CEA蛋白在预料复发方面具有更好的敏感性。

Ishigami等[10]则发觉，胃癌外周血CEAmRNA拷贝数而非阳性率与术后复发有关。

在食管癌中，Nakashima等[11]报道，外周血CEAmRNA阳性占57.4%（31/54），且CEAmRNA阳性与淋巴结转移、肿瘤分期和术后复发有关，而血清CEA水平与之无关。

Liu等[12]应用real-timePCR检测食管癌术前1d（B-1）、手术当天（B0）和术后3d（B+3）外周血中以CEAmRNA为标记的CTC数目，发觉B-1与B0，B-1与B+3间均有统计学差异，且B+3/B00.4预示较高的转移风险；Tanaka等[13]也发觉以CEAmRNA和鳞状细胞相关抗原（SCC）mRNA为标记的鳞状细胞癌相关抗原（CTC）是食管癌术后无进展生存的独立预后指标。

上述结果都证明外周血CEAmRNA检测在食管癌中的应用价值本探讨结果表明，食管癌根治性放疗前外周血CEAmRNA阳性与CEA蛋白上升者分别占47.2%（34/72）与22.2%（16/72），而食管良性疾病患者外周血CEAmRNA阳性与CEA蛋白上升者分别为0与10.0%（2/20），CEAmRNA的诊断效能显著优于CEA蛋白。

且CEAmRNA阳性与淋巴结转移相关（P=0.046），CEA蛋白上升与食管癌临床病理特征无关，提示以CEAmRNA为标记的CTC在食管癌预后中的潜在价值。

同时，笔者发觉放疗前后CEAmRNA、蛋白改变与放疗疗效有关，CEAmRNA由阳性转阴或CEA蛋白水平下调提示放疗缓解率较好，推想是由于放疗有效地削减肿瘤负荷，从而停止释放癌细胞及癌相关抗原入血总之，外周血CEAmRNA阳性对于食管癌早期诊断及放疗疗效评估具有重要意义，如检测方法进一步得以改进，使之更加便利并满意定量需求，则可望成为替代血清CEA蛋白的有效分子标记[参考文献][1]RiethdorfS,WikmanH,PantelK.Review:Biologicalrelevanceofdisseminatedtumorcellsincancerpatients[J].IntJCancer,2008,123(9):1991-2006.[2]ArmakolasA,PanteleakouZ,NezosA,etal.Detectionofthecirculatingtumorcellsincancerpatients[J].FutureOncol,2010,6(12):1849-1856.[3]郑弘宇,陈强,叶韵斌,等.乳腺癌患者外周血癌胚抗原及细胞角蛋白19mRNA表达的临床意义[J].中华医学杂志,2008,88(32):2267-2270.[4]中国非手术治疗食管癌临床分期专家小组.非手术治疗食管癌的临床分期标准(草案)[J].中华放射肿瘤学杂志,2010,19(3):179-180.[5]EisenhauerEA,TherasseP,BogaertsJ,etal.Newresponseevaluationcriteriainsolidtumors:revisedRECISTguideline(version1.1)[J].EurJCancer,2009,45(2):228-247.[6]HuangP,WangJ,GuoY,etal.Moleculardetectionofdisseminatedtumorcellsintheperipheralbloodinpatientswithgastrointestinalcancer[J].JCancerResClinOncol,2003,129(3):192-198.[7]任群,余建和,吴祥.FP方案同步放射治疗食管癌的临床分析[J].好用临床医药杂志,2010,14(13):119-120.[8]RingAE,ZabagloL,OrmerodMG,etal.Detectionofcirculatingepithelialcellsinthebloodofpatientswithbreastcancer:Comparisonofthreetechniques[J].BrJCancer,2005,92(5):906-912.[9]QiuMZ,LiZH,ZhouZW,etal.DetectionofcarcinoembryonicantigenmessengerRNAinbloodusingquantitativereal-timereversetranscriptase-polymerasechainreactiontopredictrecurrenceofgastricadenocarcinoma[J].JTranslMed,2010,8:107.[10]IshigamiS,SakamotoA,UenosonoY,etal.CarcinoembryonicantigenmessengerRNAexpressioninbloodcanpredictrelapseingastriccancer[J].JSurgRes,2008,148(2):205-209.[11]NakashimaS,NatsugoeS,MatsumotoM,etal.Clinicalsignificanceofcirculatingtumorcellsinbloodbymoleculardetectionandtumormarkersinesophagealcancer[J].Surgery,2003,133(2):162-169.[12]LiuZ,JiangM,ZhaoJ,etal.Circulatingtumorcellsinperioperativeesophagealcancerpatients:quantitativeassaysystemandpotentialclinicalutility[J].ClinCancerRes,2007,13(10):2992-2997