2023学年完整公开课版ABO血型鉴定

临床输血检验技术ABO血型鉴定学习目标1、掌握常用红细胞悬液的制备方法，血型鉴定卡式法、试管法原理、结果判断及质量控制。2、掌握RhD血型鉴定临床常用方法的基本原理、操作方法、结果判断及临床应用。卡式法1现推荐方法，灵敏度高、重复性好、可自动化操作，但成本较高试管法2传统方法，操作简便、设备简单、成本低廉，但影响因素多、灵敏度低ABO血型鉴定试管法包括盐水凝集试验、低离子强度盐水试验、酶试验、凝聚胺试验、抗人球蛋白试验等，本课以盐水凝集试验为例。现目前两种方法均在临床使用中，故均需掌握。一、红细胞悬液制备常用浓度：1%、2%、5%、10%。方法：①抗凝血移去上层血浆待测

②洗涤：剩余的红细胞中加5MLNS，混匀，洗涤，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。

③配制悬液。（根据要求浓度）如5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴NS，混匀3000r/min5min3000r/min5min二、试管法血型鉴定正定型原理：

用特异性血型抗体检测被检RBC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。正定型方法：加标准血清1滴（-A-B

）加红细胞悬液1滴（5%）混匀，离心观察结果-A-B1000r/min1min二、试管法血型鉴定正定型结果判定：试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（＋）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血二、试管法血型鉴定抗A抗B结果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型结果判定：二、试管法血型鉴定二、试管法血型鉴定反定型原理：

原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。二、试管法血型鉴定反定型方法：加待测血清2滴（-A-B

）加标准红细胞悬液2滴（5%）混匀，离心观察结果-A-B1000r/min1min（方法同正定型）二、试管法血型鉴定抗A抗B结果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型结果判定：结果判定：A(RBC)B(RBC)结果＋—B—＋A＋＋O——AB反定型结果判定：二、试管法血型鉴定注意：1、正反定型一致才能确定结果；

2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用；

3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性；

4、抗原抗体比例要适当；

5、溶血时，注意结果的判定；

6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。二、试管法血型鉴定检测原理：

正定型原理：在事先包被好抗A与抗B的凝胶介质中，加入待测的红细胞悬液，抗原与抗体结合，经低速离心，未与抗体结合的红细胞沉于凝胶底部，而已经结合的凝集的红细胞，位于凝胶上部或悬浮与凝胶中。反定型原理：采用中性微柱凝胶，加入待测的血清与标准红细胞悬液，其余同正定型。三、卡式法血型鉴定卡的结构：凝胶微柱：试管上端（反应池）、柱体（分离池）过滤介质：颗粒直径26-103nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缓冲液：LISS（加或不加抗血清）三、卡式法血型鉴定卡式法方法：正定：将待测红细胞悬液加在凝胶上部反应，离心后观察反定：将待测血清和标准红细胞加在凝胶上部反应，离心后观察阳性：凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央阴性：游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部

三、卡式法血型鉴定结果判读模式：三、卡式法血型鉴定结果判读模式：三、卡式法血型鉴定卡式微柱凝胶试验就是利用实验中红细胞在凝胶微柱中的移动，来指示肉眼所不能见的红细胞与相应抗体发生的血清学反应，因此只需要更换不同的试剂卡，就能广泛地应用在：红细胞血型鉴定、交叉配血、抗体筛查、新生儿溶血病的检测等。三、卡式法血型鉴定Rh血型鉴定原则Rh血型系统中主要有五种抗原，除特殊要求外，一般只用抗D血清检查有无D抗原。

盐水介质法一、试剂

1、IgM抗-D试剂血清

2、Rh（D）阴性、Rh（D）阳性红细胞悬液

3、待检红细胞悬液盐水介质法二、操作

1、取12×75mm干净小试管3支，分别标记检测、阳性对照、阴性对照

2、3支试管中各滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴

3、按标记分别滴入红细胞悬液

4、混匀后3400转/分离心15秒

5、轻轻摇动试管，观察结果。盐水介质法检测管阴性对照阳性对照IgM抗D1~2滴1~2滴1~2滴待检红细胞悬液1滴Rh（D）阴性红细胞悬液1滴Rh（D）阳性红细胞悬液1滴试验结果阳性（阴性）

阴性

阳性

被检测血样标本为Rh（D）阳性（阴性）？抗人球蛋白试验法一、试剂1、三种批号IgG抗-D试剂血清，标记1、2、3。2、Rh（D）阴性、Rh（D）阳性红细胞悬液3、三洗的待检红细胞悬液抗人球蛋白试验法二、操作

1、取12×75mm干净小试管五支，分别标记：检测1、检测2、检测3、阳性对照、阴性对照

2、三支检测试管分别按标记滴入IgG抗-D试剂血清1~2滴，对照管滴入任选其中一种IgG抗-D试剂血清

3、三支检测管各滴入被检红细胞悬液1滴，对照管分别按标记滴入Rh（D）阴性、Rh（D）阳性红细胞悬液。抗人球蛋白试验法二、操作4、混匀后置37℃水浴箱30分钟5、取出，洗涤三次，最后一次吸干净试管口的生理盐水6、各管分别滴加1滴抗人球蛋白试剂抗血清，混匀后3400转/分离心15秒7、轻轻摇动试管，观察结果。抗人球蛋白试验法检测管1检测管2检测管3阴性对照阳性对照IgG抗D11~2滴IgG抗D2

1~2滴

1~2滴1~2滴IgG抗D31~2滴待检红细胞悬液1滴1滴1滴Rh（D）阴性红细胞悬液1滴Rh（D）阳性红细胞悬液1滴试验结果

阳性（阴性）

阳性（阴性）

阳性（阴性）

阴性

阳性

检测管有1管阳性则被检者Rh阳性，3管都阴性则被检者Rh阴性Rh血型鉴定的其他方法

Rh抗体属IgG抗体，不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此必须采用如下技术；1）酶介质法①酶介质一期法或称直接酶介质法此法简便、迅速，适用于Rh血型鉴定及交叉配血试验。但在孵育过程中蛋白水解酶可降低试验的敏感性。②酶介质二期法或称间接酶介质法此比一期法敏感，但操作复杂。本法可用于鉴定抗原。Rh血型鉴定的其他方法

2）抗人球蛋白法（DAT、IAT）直接抗球蛋白法（DAT）是直接检测红细胞上有无不完全抗体吸附的试验。（或检测被检者红细胞是否被致敏）常用于检查新生儿溶血症、溶血性输血反应、自身免疫性溶血等。间接抗球蛋白法（IAT）常用于血清中不完全抗体的检测，输血前的交叉配血试