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文档简介

《遗传学》植物DNA的提取主要内容一二实验目的实验原理实验材料实验步骤实验注意事项三四五一、实验目的一掌握CTAB提取植物DNA的方法。二、实验原理一CTAB是一种快速简便提取植物总DNA的方法：先将新鲜叶片在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB缓冲液，将DNA溶解出来，再将氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。三、实验材料一（一）实验仪器（二）实验试剂1、CTAB核酸裂解缓冲液（PH8.0用1MHcl或1MNaOH）

用重蒸水定容至1000ml2、2.114gTris,81.816gNacl,7.4448gNa2EDTA,20.0gCTAB,20gPVP40,β-巰基乙醇用前加入（体积比：1%）

3、氯仿/异戊醇（体积比24：1）960ml氯仿，40ml异戊醇4、3mol/L醋酸钠（PH5.2）用冰乙酸调PH值（约150ml）

用重蒸水定容至1000ml灭菌408.24gNaAc.3H2O(或246gNaAc)（二）实验试剂5、1×TE（PH8.0）Hcl调PH值约10ml用重蒸水定容至500ml灭菌20min0.6055gTris,0.186gNa2EDTA6、0.1mol/LTris-Hcl(PH8.0)用重蒸水定容至100ml灭菌20min1.21gTrisHcl调PH值

7、Tris-Hcl-Nacl(PH8.0)Hcl调PH值0.0605gTris,0.0438gNacl用重蒸水定容至50ml灭菌30min8、10mgRnaseA溶于上述1mlTris-Hcl-Nacl沸水煮15min四、实验步骤一1、称取1.3克新鲜叶片于研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末。将粉末迅速转至一个10mL的离心管中，加入3.5mL已预热的CTAB裂解缓冲液（65℃），混匀后置于65℃水浴30~45min，期间轻摇几次。2、水浴完成后，取出离心管，每管加入等体积氯仿/异戊醇（24:1V/V），反复颠倒30~50次，并不断释放出反应产生的气体。轻轻混匀至不分层为止。3、16℃、7000rpm、离心10min。4、将上清液用剪尖枪头吸出转至另一10mL离心管中，加入等体积氯仿/异戊醇（24:1V/V），轻轻混匀并配平。一5、4℃、7000rpm、离心10min。6、吸取上清液于另一10mL离心管中。7、加入1/10体积的醋酸钠（3.0mol/L，pH5.2），混匀。再加入2倍体积的冰冻无水乙醇。轻轻摇动至成团DNA出现。8、钩出DNA，加入70%乙醇，浸2~3小时，中间换2~3次。9、室温风干，加入700μLTE(pH8.0),于65℃温育2~3小时或室温下过夜，至DNA完全溶解。（可以--20℃）。五、注意事项一1、氯仿易燃、易爆、易挥发，具有神经毒作用，操作时应注意防护。

2、各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。

3、取各上清液时

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