第六章转录及转录后加工详解

第六章转录及转录后加工详解演示文稿目前一页\总数九十页\编于十点优选第六章转录及转录后加工目前二页\总数九十页\编于十点转录(transcription)

生物体以DNA为模板合成RNA的过程。

转录RNADNA

第一节转录的基本原理一、基本概念目前三页\总数九十页\编于十点

参与转录的物质原料:

NTP(ATP,UTP,GTP,CTP)模板:

DNA酶:

RNA聚合酶(RNApolymerase,RNA-pol)其他蛋白质因子目前四页\总数九十页\编于十点转录与复制的相似之处：⑴都是酶促的核苷酸聚合过程；⑵都以DNA为模板；⑶都需依赖DNA的聚合酶；⑷聚合过程都是核苷酸之间生成磷酸二酯键；⑸都从5′至3′方向延伸成新链多聚核苷酸；⑹都遵从碱基配对规律——

但转录忠实性要低于DNA复制。⑺转录与复制都受到严格的调控

二、转录与复制的异同目前五页\总数九十页\编于十点转录和复制的区别引物有无高度进行性中途不停止可一段一段复制目前六页\总数九十页\编于十点一、原核生物的RNA聚合酶

大肠杆菌(E.coli)的RNA聚合酶是由5种亚基α、β、β´、ω和σ(sigma)组成，分子量为480kD。α2ββ´ω称为核心酶(coreenzyme)；在试管内能催化NTP聚合生成RNA。σ亚基加上核心酶称为全酶（holoenzyme)。第二节DNA指导下的RNA聚合酶目前七页\总数九十页\编于十点大肠杆菌RNA聚合酶组分RNA聚合酶——目前八页\总数九十页\编于十点核心酶(coreenzyme)全酶(holoenzyme)ωωRNA聚合酶——目前九页\总数九十页\编于十点RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合RNA聚合酶——目前十页\总数九十页\编于十点真核生物的RNA聚合酶种类ⅠⅡⅢ定位核仁核质核质转录产物45s-rRNAhnRNA5s-rRNA,tRNA,U1-13snRNAU6snRNA，（U6除外）非UsnRNA对鹅膏蕈碱反应耐受极敏感中度敏感二、真核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶——目前十一页\总数九十页\编于十点转录模板DNA分子上转录出RNA的区段，称为结构基因(structuralgene)。DNA双链按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，称为模板链(templatestrand)，也称作反意义链或Watson链。相对的另一股单链是编码链(codingstrand)，也称为有意义链或Crick链。目前十二页\总数九十页\编于十点5´……GCAGTACAT

GTC……3´3´……cgtcatgtacag……5´5´……GCAGU

ACAU

GU

C……3´N……Ala·Val·His·Val……CDNA转录mRNA翻译肽DNA模板、转录产物mRNA

和氨基酸序列之间的关系编码链模板链｝目前十三页\总数九十页\编于十点5335模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向目前十四页\总数九十页\编于十点不对称转录(asymmetrictranscription)

在DNA分子双链上某一区段，一股链用作模板指引转录，另一股链不转录；模板链并非永远在同一条单链上。目前十五页\总数九十页\编于十点第三节

与转录起始和终止有关的DNA结构一、原核生物的启动子和终止子（一）启动子结构原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)，包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。

目前十六页\总数九十页\编于十点5335结构基因调控序列RNA-polRNA聚合酶结合模板DNA的部位，称为启动子(promoter)。目前十七页\总数九十页\编于十点RNA聚合酶保护法目前十八页\总数九十页\编于十点开始转录TTGACAAACTGT-35区(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10区1-30-5010-10-40-205335原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点(recognitionsite)55RNA聚合酶保护区结构基因33目前十九页\总数九十页\编于十点

-35区-10区+1trpTTGACA…N17…TTAACT·N7·A…tRNAtrpTTTACA…N16…TATGAT·N7·A…LacTTTACA…N17…TATGTT·N6·A…recATTGATA…N16…TATAAT·N7·A…araCTGACG…N18…TACTGT·N6·A…最大一致性

TTGACATATAAT383629402530373728412944X/45被RNA聚合酶保护的DNA区段碱基序列分析目前二十页\总数九十页\编于十点1、Pribnow框：－10区，保守序列为TATAAT。Pribnow框是RNA聚合酶的牢固结合位点，简称结合位点。细菌中常见两种启动子突变：启动子上升突变，提高转录活性；启动子下降突变，降低转录水平。

σ的存在保证原核生物RNA聚合酶只能与启动子区而不是其它区域形成稳定的二元复合物。目前二十一页\总数九十页\编于十点2、Sextama框：－35区，保守序列为TTGACA。Sextama框是RNA聚合酶中σ的识别位点，也是RNA聚合酶的初始结合位点。

Pribnow框与Sextama框之间的碱基序列并不重要，但两个序列之间的距离十分重要；天然启动子这段距离多为15～20bp，距离的大小可能是决定启动子强度的因素之一。实验表明：两个序列之间的距离为17bp时，转录效率最高。目前二十二页\总数九十页\编于十点3、CAP位点：（乳糖操纵子的启动子序列）

CAP即分解代谢物基因激活蛋白

(catabolitegeneactivationProtein)

也称环腺苷酸受体蛋白（CRP）。

CAP分子内有两个结构域：

羧基末端结构域是DNA结合区；氨基末端结构域是cAMP结合位点。

CAP与cAMP的结合能提高CAP对双链DNA

的亲和力；

CAP与启动子（CAP位点）的结合是激活乳糖操纵子转录的必要条件。目前二十三页\总数九十页\编于十点乳糖启动子中有两个CAP结合位点：一个在－70～－50位点，称位点Ⅰ；一个在－50～－40位点，称位点Ⅱ。位点Ⅰ包含一个反向重复序列，是强结合位点；位点Ⅱ是弱结合位点。AATGTGAGTT

AGCTCACTCATTACACTCAA

TCGAGTGAGT位点Ⅰ的反向重复序列目前二十四页\总数九十页\编于十点（二）终止子结构提供转录终止信号的序列称为终止子（terminator）。终止信号存在于RNA聚合酶已经转录过的序列之中。原核生物终止子分为两类：一类是不依赖于ρ因子的转录终止；一类是依赖ρ因子的转录终止；两类终止子有共同的序列特征：在转录终止点之前有一段间断的回文结构。两类终止子碱基组成的不同点：不依赖ρ因子回文结构富含G-C下游富含A-T依赖ρ因子G-C含量较少下游无特征目前二十五页\总数九十页\编于十点转录方向3´3´5´TCGGGCGAGCCCGCCGCCCGAGCGGGCTAAAAAATTTTTT3´3´5´5´DNA模板链编码链AAAAAAUUUUUU5´CGCCCGAGCGGGCU5´TTTTTTDNA模板链编码链转录产物3´不依赖ρ因子的终止子目前二十六页\总数九十页\编于十点转录方向3´3´5´TAAGTAGATTCATCCTACTTAGATGAATAGCTACTCGATG3´3´5´5´DNA模板链编码链AGCTACUCGAUG5´CUACUUAGAUGAAU5´TCGATGDNA模板链编码链转录产物3´依赖ρ因子的终止子目前二十七页\总数九十页\编于十点二、真核生物的启动子

Ⅰ类启动子分两部分：－40～＋5称为近启动子，决定转录起始的位点；－165～－40称为远启动子，影响转录的频率。真核生物的三种RNA聚合酶，每一种都有自己的启动子类型。（一）RNA聚合酶Ⅰ的启动子即rRNA基因的启动子，称Ⅰ类启动子。目前二十八页\总数九十页\编于十点（二）RNA聚合酶Ⅱ的启动子1、帽子位点（capsite）：

即转录起始位点，其碱基大多为A。2、TATA框：又称Hogness框，由含有TATA的6～7个核苷酸组成，保守序列为TATA（A/T）A（A/T）。但TATA框的两侧富含G-C碱基对。

TATA框位于－25附近，精确决定转录起始位点。其序列的完整与准确对维持启动子的功能是必需的。即mRNA基因的启动子，称Ⅱ类启动子

目前二十九页\总数九十页\编于十点3、CAAT框：位于－75附近，保守序列为GGNCAATCT。头两个G非常重要，一但突变，转录效率大大下降。

CAAT框控制着转录起始的频率。4、GC框：位于－110附近，以5′CCGCC3′序列为特征。目前三十页\总数九十页\编于十点5、增强子（enhancer）：能结合反式作用因子，决定基因的时间和空间特异性表达，增强启动子转录活性的DNA序列。增强子作用特点：⑴增强效应十分明显：使转录频率增加百倍或千倍。⑵增强效应与其所处的位置和取向无关：增强子以5´→3´或3´→5´排列对启动子都有作用。⑶大多为重复序列：长约50bp，适合与反式因子结合，内部常有一个核心序列，为增强效应所必需。⑷增强效应具有严密的组织和细胞特异性。⑸没有基因专一性。⑹许多增强子受外部信号的调控。目前三十一页\总数九十页\编于十点GCGC-CAAT-TATA-ATGAATAAA切离加尾真正终止点修饰点外显子内含子翻译起始转录起始TATA盒CAAT盒GC盒增强子真核生物RNApolⅡ的启动子目前三十二页\总数九十页\编于十点（三）RNA聚合酶Ⅲ

的启动子即tRNA基因的启动子，称Ⅲ类启动子。Ⅲ类启动子位于转录起始点下游，称下游启动子或内部启动子。Ⅲ类启动子包括：A盒、B盒

A盒靠近5′方向；B盒靠近3′方向。Ⅲ类启动子需要的转录因子包括：

TFⅢC、TFⅢB、TFⅢA，前两者是共同的，后者为5SrRNA基因转录所需。目前三十三页\总数九十页\编于十点目前三十四页\总数九十页\编于十点三、原核生物和真核生物转录起始位点的结构差异

原核生物真核生物帽子结构没有有起始核苷酸嘌呤或嘧啶嘌呤（A为主）启动区范围较小(＋1～－70)较大(＋1～－110)上游序列TTGACACAAT、GC、增强子目前三十五页\总数九十页\编于十点图5-4P155页原核生物与真核生物启动子比较目前三十六页\总数九十页\编于十点原核生物和真核生物转录及抑制剂第四节原核生物转录的起始原核生物转录的延长原核生物转录的终止与新合成RNA链的释放真核生物的转录

RNA生物合成抑制剂目前三十七页\总数九十页\编于十点转录起始需解决两个问题：RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。一、原核生物转录的起始目前三十八页\总数九十页\编于十点4.－10区DNA双链解开12～17bp，形成开放的二元启动子复合物（模板－酶）。

2.RNA聚合酶全酶(2ω)与模板－35序列结合，形成闭合的二元闭合启动子复合物。转录起始过程1.因子辨认转录起始点（-35区的TTGACA序列）3.RNA聚合酶向－10区转移，并与之牢固结合。目前三十九页\总数九十页\编于十点RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH3转录起始复合物:5-pppG-OH+

NTP5-pppGpN

-OH3+ppi5.在RNA聚合酶β亚基催化下形成第一个磷酸二酯键，形成三元复合物（模板－酶－RNA）。6.当三元复合物中RNA长6～9个核苷酸时，因子从全酶解离下来，进入延长阶段。

RNA聚合酶有两个核苷酸结合位点：一个是起始核苷酸位点；一个是延长核苷酸位点。一般只有嘌呤核苷酸填充了起始位点，才能形成第一个磷酸二酯键。目前四十页\总数九十页\编于十点二、原核生物转录的延长1.亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移；

2.在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。(NMP)n

+

NTP(NMP)n+1

+PPi3.碱基配对原则：A-U，T-A，G-C4.延长中的转录复合物也叫转录空泡。随着RNA

聚合酶前移，转录产物RNA不断移出转录空泡，已转录完毕的DNA双链又重新复合而不再打开。5.原核生物的转录和翻译偶联进行。目前四十一页\总数九十页\编于十点依赖ρ因子的转录终止非依赖ρ因子的转录终止三、原核生物转录的终止和新生RNA链的释放指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。分类目前四十二页\总数九十页\编于十点（一）依赖ρ因子的转录终止

1969年，Roberts发现了能控制转录终止的蛋白质，即ρ因子。它由相同的6个亚基组成六聚体，分子量200kD。

ρ因子具有NTP酶活性和解螺旋酶活性，是促使转录三元复合物解离的根本原因。ρ因子的

NTP酶活性依赖于单链RNA的结构。

ρ因子依赖性终止子含有一个反向重复序列，使

RNA末端形成一个发夹结构，导致转录延宕，

ρ因子得以发挥作用，终止转录。目前四十三页\总数九十页\编于十点目前四十四页\总数九十页\编于十点（二）非依赖ρ因子的转录终止

DNA模板接近转录终止的区域内，有较密集的A-T配对区或G-C配对区，且G-C配对为回文结构。

转录产物RNA的3´-末端有若干个连续的U。连续U区的5´-端前方碱基形成茎环结构或发夹结构。这种二级结构是阻止转录继续向下游推进的关键。目前四十五页\总数九十页\编于十点转录方向3´3´5´TCGGGCGAGCCCGCCGCCCGAGCGGGCTAAAAAATTTTTT3´3´5´5´DNA模板链编码链AAAAAAUUUUUU5´CGCCCGAGCGGGCU5´TTTTTTDNA模板链编码链转录产物3´目前四十六页\总数九十页\编于十点茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构，转录停顿；密集A-U配对使转录复合物趋于解离，释放RNA。5´pppG5335RNA-pol目前四十七页\总数九十页\编于十点四、真核生物的转录（一）转录起始真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化。转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，而需依靠众多的转录因子，与模板结合形成转录起始前复合物，其起始过程比原核生物复杂得多。目前四十八页\总数九十页\编于十点转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子转录起始前的上游区段AATAAA切离加尾转录终止点修饰点外显子翻译起始点内含子OCT-1OCT-1：ATTTGCAT八聚体目前四十九页\总数九十页\编于十点TATAbox：启动子核心序列，-25bp区段。CAAT盒GC盒增强子转录起始前的上游区段顺式作用元件(cis-actingelement)：目前五十页\总数九十页\编于十点参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ

目前五十一页\总数九十页\编于十点POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PICPOL-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC组装完成，TFⅡH使CTD磷酸化目前五十二页\总数九十页\编于十点（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。目前五十三页\总数九十页\编于十点RNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小体转录延长中的核小体移位转录方向目前五十四页\总数九十页\编于十点（三）转录终止1、RNA聚合酶Ⅰ转录出rRNA前体3′末端后，继续向下游转录超过1000个bp时，存在一个

18bp的终止序列。2、RNA聚合酶Ⅲ

转录模板的下游存在一个终止子，是位于GC丰富序列之中的TTTT。

RNA聚合酶Ⅲ有内原性的转录终止功能。3、RNA聚合酶Ⅱ的转录没有明确的终止信号。目前五十五页\总数九十页\编于十点原核生物与真核生物转录的区别

原核生物真核生物

RNApol一种高度分工起始转录因子没有需要（各不同）延长核小体影响没有有启动子以外序列没有有且复杂转录产物多顺反子单顺反子场所转录与翻译偶联不偶联转录终止两种终止子不明确目前五十六页\总数九十页\编于十点五、RNA生物合成抑制剂概念：能阻断、抑制或者干扰核酸的代谢过程，最终抑制转录的一类化合物，称RNA生物合成抑制剂。分三类：

1、嘌呤和嘧啶类似物，抑制核酸前体的合成；

2、通过与DNA结合而改变模板的功能；

3、与RNA聚合酶结合而影响其活力。目前五十七页\总数九十页\编于十点（一）利福霉素及利福平作用：抗结核药物，特异地抑制细菌RNA聚合酶的活性，因而抑制细菌RNA的合成。机制：利福霉素可与RNA聚合酶的β亚基结合，并阻止起始位点的填充，抑制二核苷酸RNA的形成；

利福平则阻止RNA聚合酶的移动，抑制头三个核苷酸的形成。因此，利福霉素和利福平都是RNA链合成起始过程的抑制剂。目前五十八页\总数九十页\编于十点（二）利迪链菌素作用：与细菌的RNA聚合酶β亚基结合，抑制转录过程中RNA链的延长反应。（三）α-鹅膏蕈碱作用：抑制真核生物的RNA聚合酶，且RNApolⅡ

极为敏感。对细菌RNA聚合酶作用极弱。目前五十九页\总数九十页\编于十点转录后加工过程及其机制第五节

mRNA的前体加工

rRNA的前体加工

tRNA的前体加工

RNA的剪接和RNA催化活性

RNA编辑目前六十页\总数九十页\编于十点⑴真核细胞每种转录产物都是各种RNA的前身，即无活性，亦无功能。⑵真核初级转录产物必须在胞核内经过适当加工，使之变成具有活性的成熟RNA后，由胞核运至胞质才能执行翻译功能。⑶真核细胞转录作用和翻译作用无论在空间上还是时间上都是彼此分开进行的。⑷原核细胞mRNA不需加工，tRNA和rRNA加工。真核细胞与原核细胞转录产物的区别：目前六十一页\总数九十页\编于十点一、mRNA的前体加工1、5端形成帽子结构(m7GpppNp—)2、3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)3、中部剪接除去内含子4、链内部核苷酸的甲基化hnRNA转变成mRNA的加工过程包括：目前六十二页\总数九十页\编于十点⑴修饰的化学反应：⑵5´-端的修饰在核内完成，且先于中段剪切。⑶5´帽子分Cap0、Cap1、Cap2。（一）5´-端加上帽子结构(mGpppNp—）5´pppN…磷酸酶ppi5´pN…pppGpi5´GpppN…甲基化酶+CH3m7GpppN…目前六十三页\总数九十页\编于十点

mRNA帽子的生理功能：⑶促进某些RNA的合成。⑴帽子结构参与翻译起始，帽0结构是核糖体识别

mRNA所必需的；核糖体上有帽结合蛋白。⑵帽子结构增加mRNA的稳定性，保护mRNA防止其受5′核酸外切酶的降解。目前六十四页\总数九十页\编于十点（二）3´-端加上多聚腺苷酸尾巴(polyA)。⑴polyA的出现不依赖DNA模板。⑵加尾信号：3´-末端出现AAUAAA及下游的

GU丰富区。在两序列之间由特异的核酸内切酶切除多余的核苷酸，然后加上polyA。尾部修饰和转录终止同时进行。⑶3´-端修饰也在核内完成，并先于mRNA中段的剪接。⑷polyA的有无及长短是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。目前六十五页\总数九十页\编于十点目前六十六页\总数九十页\编于十点

mRNA3´-端的多聚腺苷酸化可被冬虫夏草素

（3´-脱氧胸苷）所阻止；

即冬虫夏草素是多聚腺苷酸化的特异抑制剂。（三）mRNA的甲基化真核生物mRNA分子中有许多甲基化的碱基，主要是：N6-甲基腺嘌呤（m6A）。目前六十七页\总数九十页\编于十点二、rRNA前体的加工原核细胞与真核细胞的rRNA前体都需加工：1、原核细胞rRNA基因与某些tRNA基因构成

混合操纵子。大肠杆菌共有7个转录单位，每个转录单位由16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA及一个或几个tRNA基因组成。目前六十八页\总数九十页\编于十点图5-10p163大肠杆菌rRNA前体加工过程目前六十九页\总数九十页\编于十点2、真核细胞rRNA基因为串联重复序列：由18SrRNA、28SrRNA、5.8SrRNA基因组成一个转录单位，彼此被间隔区分开。每个重复单位之间的间隔DNA序列不转录，称为非转录间隔序列。真核生物5SrRNA基因也是成簇排列的，中间隔以不被转录的区域，它由RNApolⅢ

转录，加工成熟后构成核糖体大亚基。不同生物的rRNA前体大小不同：哺乳动物为45S；果蝇38S；酵母37S；四膜虫35S目前七十页\总数九十页\编于十点18S5.8S28S18S-rRNA5.8S和28S-rRNA内含子45S转录产物剪接终产物rDNA基因间隔哺乳动物细胞rRNA前体加工过程目前七十一页\总数九十页\编于十点tRNA前体RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNA三、tRNA前体的加工原核与真核tRNA基因大多成簇存在。目前七十二页\总数九十页\编于十点

tRNA前体的加工包括：⑴剪切内含子⑵核酸外切酶修剪3´末端，逐个切去附加序列；⑶加上CCA-OH的3´末端，完成柄部结构。⑷碱基修饰tRNA的加工酶系包括：tRNA核苷酸转移酶、RNaseP、RNaseD、RNaseⅢ等。目前七十三页\总数九十页\编于十点Ⅰ型：有－CCA序列基因，原核生物绝大部分；Ⅱ型：没有－CCA序列基因，为真核生物。

tRNA基因有两种：原核生物与真核生物都有tRNA核苷酸转移酶，负责给Ⅱ型tRNA加上－CCA3′-OH末端，或修复发生损伤的Ⅰ型tRNA3′-OH末端。目前七十四页\总数九十页\编于十点RNaseP、

RNaseDRNaseⅢ连接酶1、剪切内含子：

属于酶促反应，需要酶及ATP。ATPADP目前七十五页\总数九十页\编于十点tRNA核苷酸转移酶2、加上CCA-OH的3´末端，完成柄部结构。目前七十六页\总数九十页\编于十点3、碱基修饰（2）还原反应如：UDHU（3）核苷内的转位反应如：Uψ（4）脱氨反应如：AI如：AAm（1）甲基化（1）（1）（3）（2）（4）目前七十七页\总数九十页\编于十点四、RNA的剪接和RNA催化活性真核不连续基因的初级转录产物中，外显子与内含子交替出现；转录后把内含子切除而把外显子连接起来产生成熟RNA分子的过程，叫RNA剪接

（RNAsplicing）。内含子5′端与3′端都存在保守序列，分别称为5′剪接点（GU）和3′剪接点（AG）。目前七十八页\总数九十页\编于十点内含子的分类根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为四类。I类：线粒体、叶绿体及低等真核生物细胞核的rRNA基因；II类：线粒体、叶绿体的mRNA基因；

III类：大多数核mRNA的基因；

IV类：tRNA基因。目前七十九页\总数九十页\编于十点（一）第Ⅰ类和第Ⅱ类内含子的自我剪接特征5´剪接点UGU3´剪接点GAU近3´保守序列——PyPuPyPyTA﹡Py5´-P-Q-R-S序列有无能量输入————第一次亲核攻击鸟苷酸保守A﹡2´-OH

Ⅰ类内含子Ⅱ类内含子目前八十页\总数九十页\编于十点（二）rRNA的自我剪接四膜虫rRNA剪接由鸟苷酸发动第一次亲核攻击，经过两次连续的转酯反应，将两个外显子连接起来，释放出线形内含子序列。释放出的线形内含子序列再经过两次连续的转酯反应，释放出15核苷酸和4核苷酸的两个小片段，最终形成稳定的线形产物L-19。（linearminus19interveningsequence）

L-19是四膜虫35SrRNA