生物一轮作业：第34讲　克隆技术

学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精第34讲克隆技术A组基础题组考点一植物细胞工程1。（2017北京石景山期末)用组织培养技术繁殖一种名贵花卉的过程中，下列叙述不正确的是（)A.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害B。在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂,可获得染色体加倍的细胞C。用花粉离体培养可获得单倍体植株，说明花粉细胞仍具有全能性D。诱导愈伤组织生根时,培养基内通常应含生长素类调节剂2.(2017北京通州期末)设计植物体细胞杂交实验时,如果期望获得性状优良的作物新品种，不需要考虑的是(）A.亲本体细胞去除细胞壁B。选择具有优良性状的亲本C.亲本间的生殖隔离问题D.杂种细胞愈伤组织的诱导和再分化3.下图是两种二倍体植物细胞(甲、乙)融合并培育新植株过程的示意图。有关分析正确的是（)A。过程①需用纤维素酶和果胶酶溶液处理,且溶液的渗透压略大于细胞液渗透压B。过程②可用聚乙二醇诱导原生质体融合,主要依据细胞膜具有选择透过性原理C。过程③表示细胞壁的再生，④⑤需要根据生长发育进程更换不同的液体培养基D.最终得到的植株相对于甲、乙而言发生了染色体数目变异，因此不具有可育性4。如图为人工种子，下列与其培育生产过程有关的叙述中不正确的是()A.人工种子一般用离体植物细胞通过组织培养技术获得B。胚状体是由未分化的、具有分裂能力的细胞构成的C.同一批次的人工种子可以保证具有相同的基因型D。胚状体是由愈伤组织分化而成的，离体细胞只有形成愈伤组织才能表现出全能性5。如图是“白菜—甘蓝”杂种植株的培育过程,下列说法正确的是（)A.图示“白菜—甘蓝”植株不能结籽B.愈伤组织的代谢类型是自养需氧型C.用胰蛋白酶去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体D。诱导原生质体融合可用聚乙二醇考点二动物细胞工程6.下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是(）A.乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养B。细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行C.灭活病毒可使细胞相互凝聚并让细胞膜上的分子重新排布D.培养早期胚胎的培养液中含维生素、激素等多种能源物质7.对某种动物的肝肿瘤细胞进行动物细胞培养,下列说法错误的是（）A。在利用肝肿瘤组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸C.为了防止细胞培养过程中细菌的污染,可向培养液中加入适量的抗生素D。在合成培养基中，通常需加入血清等天然成分8。下图是单克隆抗体制备过程示意图。有关叙述不正确的是(）A。①中B淋巴细胞是小鼠脾脏中已免疫的B淋巴细胞B.②可利用胰蛋白酶促进细胞的融合C.④筛选可通过抗原—抗体反应进行D.⑥可获得单克隆抗体，但培养过程可能发生变异9.某小鼠生活过程中被多种病原体感染过，科学家以该小鼠为实验材料，利用单克隆抗体技术,获得了抗某种病原体的高纯度单克隆抗体。下列叙述不正确的是（)A.被多种病原体感染过的小鼠体内会产生多种效应B细胞B。经细胞融合后形成的单个杂交瘤细胞只能分泌一种特异性抗体C.用“抗原—抗体检测法”可筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞D。利用生物导弹治疗癌症就是利用了单克隆抗体清除癌细胞10.抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究.下列是利用生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。下列说法错误的是(）A.过程①至②所获取的抗体称为单克隆抗体B.过程③至⑥获取抗体的技术称为转基因技术C.过程⑤需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶D。V1基因体外扩增的技术称为PCR技术B组提升题组一、选择题1.（2017北京东城期末）下图为培育甘蔗脱毒苗的两条途径，研究发现经②过程获得的幼苗脱毒效果更好。下列叙述不正确的是（)A.带叶原基的芽与植物体其他组织中的病毒含量相同B.②过程的作用是使组织中的病毒在图中处理温度下部分或全部失活C.过程③、④所用培养基中生长素和细胞分裂素的含量和比例不同D。图中脱毒苗的培育过程体现了植物细胞的全能性2.（2017北京师大附中期中)下列关于细胞工程的叙述,错误的是（）A。电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合B.去除植物细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C。小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体D.甲、乙两种二倍体植物体细胞杂交，获得的杂种植株后代依然为二倍体3.(2017北京大兴期末）下列关于单克隆抗体制备和应用的叙述，正确的是(）A.用特定的抗原饲喂小鼠,再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞B。获得的融合细胞都含有浆细胞与癌细胞的所有遗传物质C.经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞即可生产单克隆抗体D.最广泛的用途是用作体外诊断试剂,具有准确、快速等优点4。下列采用的生物技术中不涉及细胞全能性或细胞核全能性的是()A。通过植物组织培养获得人工种子并发育成植株B。转入贮存蛋白基因的向日葵细胞培养出植株C。核移植获得的组装细胞培育出鲤鲫移核鱼D。烧伤病人的健康皮肤细胞培养出皮肤5.现有两个烟草品种A(Hhrr）、B（hhRr)的花粉若干(两对基因分别位于两对同源染色体上),利用诱导因素促使原生质体融合(只考虑两两融合)。只要有一对隐性基因纯合(rr或hh）时，在光照强度大于800lx条件下，就不能生长。下列叙述正确的是（)①实验开始时必须除去不利于原生质体融合的物质②实验中得到AB花粉之间融合细胞的基因型有6种③要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞，可在大于800lx光照下培养，收集增殖分化的细胞团④从理论上分析,将融合细胞的培养液放在大于800lx光照下培养,有5种基因型的融合细胞不能增殖分化A。①②④ B.①②③C。②③④ D。①③④6。(2017北京西城期末）下图是一种“生物导弹”的作用原理示意图，没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹"一段时间后被机体清除.阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制DNA和RNA的合成,对正常细胞也有一定毒性.下列说法不正确的是（)A.单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的B。活化阿霉素能抑制细胞中的DNA复制和转录过程C。在治疗中，应先注射非活化磷酸阿霉素再注射生物导弹D。单克隆抗体特异性强,能减轻阿霉素对正常细胞的伤害7.某同学学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的()植物细胞工程动物细胞工程技术手段植物组织培养，植物体细胞杂交动物细胞培养和融合,动物细胞核移植特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理，制细胞悬浮液融合方法物理方法，化学方法物理方法，化学方法，生物方法典型应用制备人工种子,培育杂种植株单克隆抗体的制备培养液区别蔗糖是离体组织赖以生长的成分动物血清不可缺少A.3处 B。2处 C。1处 D.0处二、非选择题8。2012年诺贝尔生理学或医学奖授予约翰·伯特兰·戈登和山中伸弥,以表彰他们在“体细胞重编程技术”领域做出的革命性贡献。请回答下列问题：（1）1962年约翰·伯特兰·戈登通过实验把蝌蚪成熟肠道细胞的细胞核植入去核的卵细胞中,成功培育出“克隆青蛙”。此实验说明已分化的动物体细胞的具有全能性。更多的实验证明，到目前还不能用类似技术（克隆植物的方法)获得克隆动物.

（2)所谓“体细胞重编程技术”是将高度分化的体细胞重新诱导回早期干细胞状态,即获得诱导多能干（iPS）细胞。山中伸弥于2006年把4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞,使其转变成iPS细胞。在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因的,在其协助下4个基因进入成纤维细胞，并整合到染色体的上。

(3)培养iPS细胞时,培养液需要特别加入的天然成分是，同时iPS细胞需置于培养箱中培养。

（4）iPS细胞可诱导分化成各种细胞类型以应用于临床研究。现用胰高血糖素基因片段做探针，对iPS细胞分化成的甲、乙、丙细胞进行检测，结果如表:用探针检测细胞的DNA用探针检测细胞的RNAiPS细胞甲细胞乙细胞丙细胞iPS细胞甲细胞乙细胞丙细胞++++-—+—注：“+”表示能检测到,“-”表示不能检测到。得到此检测结果采用的是技术;结果表明iPS细胞通过定向分化为乙细胞.

9。（2017北京丰台二模)埃博拉出血热是一种由埃博拉病毒引起的急性传染病，建立良好特异性的检测方法非常重要.埃博拉病毒核蛋白NP具有很强的抗原性，是诊断研究的重要靶点。（1）鼠源抗NP蛋白的单克隆抗体,由鼠杂交瘤细胞分泌,抗体结构如图1所示,抗体通过可变区与抗原特异性结合.从鼠杂交瘤细胞中提取,逆转录合成cDNA,利用技术扩增鼠源抗体可变区对应的DNA片段。使用将源抗体可变区对应的DNA片段与能表达源抗体恒定区部分的载体重组，导入人胚肾上皮细胞，从细胞培养液中获取人—鼠嵌合抗体。临床使用人—鼠嵌合抗体的优点是。

(2)提取埃博拉病毒的蛋白质进行电泳,并运用抗原—抗体杂交，检测人—鼠嵌合抗体的特异性。实验主要步骤如图2所示，其中一抗能与相应抗原特异性结合，二抗能与相应一抗特异性结合。注:1、2为电泳泳道,其中1为蛋白质分子量标准，2为提取的埃博拉病毒蛋白质；标记二抗的AP能在显色液中显色.A、B、C为不同一抗、二抗处理后的三组实验结果.组別一抗来源二抗来源结果①人-鼠嵌合抗体AP标记的抗人抗体Ⅰ②鼠杂交瘤细胞上清液AP标记的抗鼠抗体Ⅱ③普通人胚肾上皮细胞培养液AP标记的抗人抗体Ⅲ实验记录如上表，AP标记的抗人抗体能与嵌合抗体中的人源恒定区结合,AP标记的抗鼠抗体能与鼠源抗体结合.若表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次对应结果分析中的、、（一种方案即可），则表明该人—鼠嵌合抗体能用于埃博拉出血热的应急血清学检测。

答案全解全析A组基础题组考点一植物细胞工程1.B植物组织培养中要求无菌操作,以防止细菌感染,消毒时既要杀死材料表面的微生物，又要尽量减少消毒剂对细胞的伤害，A正确；植物细胞融合时必须先去除细胞壁,然后加入诱导剂才能促使细胞融合,所以在愈伤组织培养中直接加入细胞融合的诱导剂，不能导致细胞融合，B错误；用花粉离体培养可获得单倍体植株,说明花粉细胞仍具有全能性,C正确；诱导愈伤组织生根时,培养基内通常应含生长素类调节剂，D正确。2.C亲本体细胞去除细胞壁后才能实现植物体细胞杂交；如果利用植物体细胞杂交技术培育性状优良的作物新品种，则需选择具有期望的优良性状的亲本,只有这样,亲本的性状才有可能在后代身上表达出来;植物体细胞杂交能够打破生殖隔离的限制,克服远缘杂交不亲和的障碍，故不需要考虑亲本的生殖隔离问题，C符合题意；形成融合细胞后，需利用植物组织培养技术将融合细胞培育成新植株,此过程涉及脱分化和再分化。3.A过程①表示去除植物细胞的细胞壁获得有活力的原生质体,因植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此需用纤维素酶和果胶酶溶液处理，为使原生质体保持正常的形态，溶液的渗透压略大于细胞液渗透压，A正确；过程②是诱导原生质体融合，可用聚乙二醇作诱导剂，主要依据细胞膜具有一定的流动性原理,B错误；过程③表示杂种细胞再生出细胞壁,④⑤需要根据生长发育进程更换不同的固体培养基,C错误；最终得到的植株相对于甲、乙而言发生了染色体数目变异,但具有可育性,D错误.4.B胚状体已具有根、芽的分化,且具有细胞分裂能力。5.D图示采用植物细胞融合技术产生的“白菜—甘蓝"植株是可育的,能结籽,A错误。愈伤组织是不能自行合成有机物的,代谢类型是异养需氧型,B错误。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶,去壁所用的酶是纤维素酶和果胶酶，C错误.诱导原生质体融合的方法有物理法和化学法，物理法包括离心、振动、电激等,化学法一般是用聚乙二醇，D正确。考点二动物细胞工程6.C乳腺癌细胞的分裂能力比乳腺细胞强,所以乳腺癌细胞比乳腺细胞更容易进行离体培养,A错误。细胞核移植发生在同种或异种生物的细胞之间,B错误.灭活病毒诱导细胞融合的原理是:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开，细胞发生融合,C正确。培养早期胚胎的培养液中的维生素、激素起调节作用，不是能源物质，D错误。7。B在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,以催化组织细胞间的蛋白质分解，得到单个细胞，A正确;细胞培养应在含5％CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH，B错误;为了防止细胞培养过程中细菌的污染，需对培养液进行无菌处理,也可向培养液中加入适量的抗生素,C正确;合成培养基的成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,通常还需加入血清、血浆等天然成分,D正确。8.B①表示提取B淋巴细胞和骨髓瘤细胞,其中B淋巴细胞是小鼠脾脏中已免疫的B淋巴细胞,A正确；②可利用灭活的病毒或聚乙二醇促进细胞融合，B错误；④筛选是为了获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞,因此可通过抗原—抗体反应进行,C正确；⑥是借助动物细胞培养技术在体外大规模培养,可获得单克隆抗体，但在培养过程中可能发生变异，D正确。9。D由于抗体具有特异性，一种抗体只能和相应的抗原结合，该小鼠生活过程中被多种病原体感染过,所以体内抗体种类多,而每种抗体由相应的效应B细胞（浆细胞）产生，所以小鼠体内有多种效应B细胞（浆细胞),A正确;一系列效应B细胞(浆细胞)与骨髓瘤细胞融合后形成一系列的杂交瘤细胞,所以需筛选出产生单一抗体的杂交瘤细胞，B错误;用“抗原—抗体检测法"可筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞,再扩大培养生产出单克隆抗体,C正确；利用生物导弹治疗癌症就是利用了单克隆抗体的定向导向作用，其能将药物带到癌细胞所在的位置，D错误。10.C过程①至②是通过细胞融合的方式生产单克隆抗体的过程,A正确；过程③至⑥获取抗体的技术称为转基因技术,B正确;过程⑤需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶,C错误;PCR技术可以实现基因的大量扩增,D正确。B组提升题组一、选择题1.A带叶原基的芽与植物体其他组织中的病毒含量不同，A错误；②过程的作用是使组织中的病毒在图中处理温度下部分或全部失活，B正确；过程③、④所用培养基中生长素和细胞分裂素的含量和比例不同,C正确；图中脱毒苗的培育过程采用了植物组织培养技术，其体现了植物细胞的全能性，D正确.2.D电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合，A正确；去除植物细胞壁需要纤维素酶和果胶酶处理,将动物组织分散成单个细胞需胰蛋白酶处理,B正确；小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体，C正确；甲、乙两种二倍体植物体细胞杂交，获得的杂种植株后代为四倍体，D错误。3.D先利用特定的抗原注射小鼠，再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞,抗原的主要成分是蛋白质,用蛋白质饲喂小鼠，蛋白质会被小鼠消化道内的蛋白酶水解而失去活性，A错误；杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有遗传物质，获得的融合细胞包括杂交瘤细胞、浆细胞自身融合型细胞、癌细胞自身融合型细胞，B错误;经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞还需通过抗体检测后才能通过体外或体内培养生产单克隆抗体，C错误；单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，具有准确、快速等优点，D正确。4.D通过植物组织培养获得人工种子并发育成植株，体现了植物细胞的全能性;在转基因作物的培育中，利用了基因工程和植物组织培养技术,体现了植物细胞的全能性；鲤鲫移核鱼是将核移植获得的组装细胞培育成个体,体现了动物细胞核的全能性;由皮肤细胞培养出皮肤，属于器官水平，还没有到达个体水平,不能体现细胞的全能性,D符合题意。5。D植物体细胞杂交的实质是植物原生质体的融合，故开始时需要使用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁,①正确；烟草品种A(Hhrr）的花粉类型有：Hr、hr，烟草品种B（hhRr）的花粉类型有：hR、hr,二者之间融合细胞的基因型有四种:HhRr、hhRr、Hhrr、hhrr,②错误；有一对隐性基因纯合（rr或hh)时,在光照强度大于800lx条件下,就不能生长，6种融合细胞(hhrr、HHrr、hhRr、Hhrr、HhRr、hhRR)中，只有基因型为HhRr的融合细胞能在大于800lx光照下生长，因此从理论上分析，将融合细胞的培养液放在大于800lx光照下培养,有5种基因型的融合细胞不能增殖分化，因此③④正确.6。C单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的,A正确;阿霉素可抑制DNA和RNA的合成，即抑制细胞中的DNA复制和转录过程，B正确；据图可知，要先注射生物导弹,生物导弹可使非活化磷酸阿霉素转化成活化的阿霉素，能更好地杀死肿瘤细胞，C错误;单克隆抗体能将阿霉素定向带到肿瘤细胞所在的位置，能减轻阿霉素对正常细胞的伤害,D正确。7.C植物细胞工程的技术手段有植物组织培养和植物体细胞杂交;动物细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等技术,技术手段正确.植物体细胞杂交时，采用酶解法（纤维素酶和果胶酶)去除细胞壁；动物细胞培养时，需要采用胰蛋白酶处理,制成细胞悬液，植物体细胞特殊处理错误。诱导植物细胞融合的方法有物理（离心、振动和电激等）和化学方法（聚乙二醇）；诱导动物细胞融合的方法有物理、化学和生物方法（灭活的病毒)，融合方法正确。植物细胞工程技术可用于制备人工种子、培育杂种植株；动物细胞工程中的动物细胞融合技术可以用于制备单克隆抗体，典型应用正确。植物细胞工程中的培养基中需要添加蔗糖;动物细胞工程的培养液中需要加入动物血清、血浆等天然成分,培养液区别正确。二、非选择题8。答案(1)细胞核植物组织培养（2）载体DNA（3）血清或血浆CO2(4)(核酸)分子杂交基因选择性表达解析（1)“克隆青蛙"的培育采用的是核移植技术,该实验说明已分化的动物体细胞的细胞核仍具有全能性.克隆植物的方法为植物组织培养技术，更多的实验证明，到目前还不能用类似植物组织培养技术获得克隆动物。(2)题干中的“4个关键基因"为基因工程中的目的