肿瘤标志物专业知识讲座

肿瘤标志物专业知识讲座肿瘤标志物专业知识讲座第1页肿瘤标志物专业知识讲座第2页肿瘤标志物TumorMarker是指由肿瘤细胞产生、反应肿瘤存在和生长一类物质。

在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞基因表示而合成份泌或是由机体对肿瘤反应而异常产生和/或升高物质，包含蛋白质、激素、酶（同工酶）及癌基因产物等。

一、基础概念肿瘤标志物专业知识讲座第3页肿瘤标识物特点1、存在于肿瘤细胞胞核、胞质和胞膜上或分泌在体液中；2、有些不存在于正常成人组织而见于胚胎组织；3、有些在肿瘤组织中含量超出正常组织含量。肿瘤标志物存在或含量改变能够提醒肿瘤性质并有利于了解肿瘤组织起源和细胞分化，从而能够帮助肿瘤病理诊疗、组织学分类、判断预后及指导临床治疗。肿瘤标志物专业知识讲座第4页早在1845年，英国Maclntire首先发觉了肿瘤标志物，并于1847年由BenceJones称之为“白蛋白样物质”（Albumin-likesubstance）。1889年，Kahler将其分类为“复合骨髓瘤”一个分解产物。1929年，Hirszfeld报道在肿瘤组织中发觉了胚胎性特殊物质。1943年，Gross论证了关于肿瘤组织抗原性。1952年，Bjorklund将56种肿瘤组织提取液混合后注入马体内，产生了抗血清，从而深入发觉了肿瘤组织比正常组织含有更强抗原性。1957年，他将这些最初广泛应用肿瘤标志物定义为组织多肽抗原。二、肿瘤标志物发展简史肿瘤标志物专业知识讲座第5页Ziler（1958年）在胎儿组织中发觉了甲胎蛋白（AFP）。Goldt和Freedman（1965年）从结肠癌提取液中发觉了癌胚抗原（CEA）。1975年，Kohler和Milstein用细胞融正当成功地制备了单克隆抗体，这就为研究肿瘤标志物提供了更有意义伎俩。80年代以后，用于肿瘤细胞抗原分析单克隆抗体（Mab）大量涌现，高敏感免疫组化技术（IH）应运而生。生物化学、免疫学及分子生物学等方法建立加速了肿瘤标志物研究发展。肿瘤标志物专业知识讲座第6页三、肿瘤标志物检测意义1、确定肿瘤组织发生2、异位肿瘤和转移性肿瘤判别3、辅助识别肿瘤良恶性，癌前病变与癌4、对肿瘤细胞增生程度评价5、辅助肿瘤分期：在判断肿瘤是原位还是有浸润发生以及有没有血管、淋巴管侵袭是与肿瘤分期亲密相关。比如用层粘连蛋白（laminin）和Ⅳ型胶原单克隆抗体可清楚显示基底膜主要成份。一旦证实癌细胞突破了基底膜，就不是原位癌，而是浸润癌了，其预后意义是不一样。肿瘤标志物专业知识讲座第7页1、肿瘤免疫组织化学标识

阳性标识色度特征肿瘤免疫组织化学标识着色程度取决于抗原含量、分布密度和标识方法及其敏感性。淡黄色，提醒为弱抗原；棕黄色，提醒为中等度抗原；棕黑色，提醒为强抗原。

四、检测方法肿瘤标志物专业知识讲座第8页胞膜型胞核型胞质型微绒毛型抗原颗粒主要分布于腺癌细胞微绒毛。复合型在常规免疫组化标识中，同一个抗原能够同时表示于胞膜和胞质、胞核和胞质、微绒毛和胞质，但极少发觉胞膜和胞核同时表示。

肿瘤标志物专业知识讲座第9页肿瘤标志物专业知识讲座第10页肿瘤标志物专业知识讲座第11页肿瘤标志物专业知识讲座第12页免疫组化结果判断标准①必须设染色对照

②抗原表示必须在特定部位不在抗原所在部位阳性表示一概不能视为阳性

③阴性结果不能视为抗原不表示

④对免疫组化标识结果意义不能绝对化

肿瘤标志物专业知识讲座第13页假阴性结果原因主要是①抗体已失活或浓度不妥或抗体本身达不到应有敏感度；②因为组织自溶，抗原扩散而造成抗原消失，尤其在长久固定标本中因抗原漏出而致假阴性，所以多用新鲜固定之标本；③操作步骤不妥，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温度过高；④组织或细胞中抗原含量过低，所用方法难以检测到，如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。

肿瘤标志物专业知识讲座第14页假阳性结果主要原因是①所用抗体与其它无关抗原有交叉反应，特异性差，尤其在应用多克隆抗血清时更易出现；②所用抗体浓度过高或染色过程中切片干燥造成抗体与组织产生非特异性结合；③组织或细胞中有内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶及生物素等产生非特异性显色；④组织中含有残余正常组织，如软组织肿瘤浸润至骨骼肌或神经组织，当用抗myoglobin抗体或抗S-100蛋白抗体时，易误诊为横纹肌肉瘤或起源于神经肿瘤；⑤因为肿瘤侵犯正常组织与细胞，造成其胞质内可溶性蛋白质释放于组织间隙中，并为肿瘤细胞非特异性吸收或吞噬。肿瘤标志物专业知识讲座第15页2、PAP法和APAAP法过氧化物酶-抗过氧化物酶法（PAP）和碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法（APAAP）原理是：应用抗酶抗体与酶结合，形成可溶性、稳定酶-抗酶抗体复合物。肿瘤标志物专业知识讲座第16页3、ABC法将亲合素（A）与生物素（B）标识过氧化物酶结合，形成可溶性亲合素-生物素化酶复合物（avidin-biotin-peroxidasecomplex,ABC）。当其与生物素标识抗体（直接法）或抗抗体（间接法）作用时，ABC中亲合素还未饱和位点可与抗体分子上标识生物素结合，从而形成一个多级放大致系，有效提升了酶反应敏感性。肿瘤标志物专业知识讲座第17页4、分子生物学方法

PCRPAGE肿瘤标志物专业知识讲座第18页五、相关肿瘤标志物角蛋白起源及分布角蛋白（keratin）属中间丝细胞骨架蛋白，是存在于上皮细胞内、分子量为40-70kD一组蛋白质。主要用途角蛋白是上皮细胞及其肿瘤最正确标识物之一，综合肿瘤组织形态学，可用于癌与其它恶性肿瘤如未分化癌与淋巴瘤、上皮性肿瘤与恶性黑色素瘤、胸腺瘤与胸腺淋巴瘤及转移肿瘤等判别。（一）上皮组织及其标识物肿瘤标志物专业知识讲座第19页上皮膜抗原起源及分布上皮膜抗原（epithelialmembraneantigen,EMA）是上皮细胞分泌一个人乳中脂肪球膜上提纯一个糖蛋白，它广泛存在于各种上皮细胞膜系结构，其分布与细胞角蛋白极为相同，但对内脏腺上皮优于细胞角蛋白。上皮膜抗原广泛存在于正常上皮细胞及其肿瘤组织中，也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞和T细胞淋巴瘤中，尤其是分化较差癌上皮膜抗原有时可呈强阳性表示。主要用途EMA可作为上皮源性肿瘤常见标识物。EMA阳性表示肿瘤有鳞状细胞癌、胃肠道腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、滑膜肉瘤、甲状腺乳头状腺癌、上皮样肉瘤等。肿瘤标志物专业知识讲座第20页甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）起源甲胎蛋白是由胚胎卵黄囊细胞、胚胎肝细胞和胎儿肠道细胞所合成一个糖蛋白，分子量为69kD。在妊娠5个月时达高峰，出生时下降。胎儿出生后1年，血清AFP应降至正常成人水平。正常成人血清中含量极低，为5.8μg/L以下，男性略高于女性。恶性肿瘤成人，妊娠第2-3个月或患有肝硬化、肝坏死患者血清中AFP水平可升高。AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不停增高者，更应高度警觉。肿瘤标志物专业知识讲座第21页主要用途AFP主要用于原发性肝细胞癌和性腺或性腺外一些生殖细胞肿瘤（如内胚窦瘤）诊疗和判别诊疗。值得注意是AFP在肝癌组织中阳性表示只占60%左右，个别病例则为阴性，而一些非肿瘤性肝病变（如肝硬化和肝炎）肝细胞以及肝转移性肿瘤癌旁肝细胞亦有AFP表示。后者AFP起源有三种可能性，一是癌旁肝细胞自己合成；二是癌旁肝细胞从癌灶内吸收AFP；三是上述两种情况都有。肿瘤标志物专业知识讲座第22页应用中注意事项AFP阴性不能排除肝细胞癌诊疗，应深入作丙氨酸转氨酶（alannineaminotransferase,ATT）免疫组化或结合血清学检验结果加以判断；发生在骶尾部、腹膜后、纵隔或松果体一些生殖细胞肿瘤，在常规HE染色中经常诊疗为未分化癌，所以有必要作AFP或人绒毛膜促性腺激素（humanchorionicgonatotropin,HCG）免疫组化染色，以排除其它类型肿瘤；一些非肝性肿瘤如肺癌、乳腺癌和胃肠癌，尤其是胃肝样腺癌，AFP可呈阳性反应。肿瘤标志物专业知识讲座第23页AFUα-L岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）：是一个溶酶体酸性水解酶，是原发性肝癌一个新诊疗标志物，广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中，参加体内糖蛋白、糖脂和寡糖代谢。原发性肝癌患者血清AFU活力显著高于其它各类疾患（包含良、恶性肿瘤）。肿瘤标志物专业知识讲座第24页癌胚蛋白（carcinoembryonicantigen,CEA）起源及分布癌胚蛋白是从结肠癌中分离出来一组酸性糖蛋白，由胆管上皮细胞合成。该蛋白在胚胎期含量较高，而成人则含量较低，小于2.5μg/L

。CEA在正常组织中表示包含有结肠、胃、小肠和胆囊上皮细胞。免疫组化染色阳性表示部位均位于表面上皮细胞刷状缘，呈线状分布。肿瘤标志物专业知识讲座第25页内外分泌腺腺泡细胞和导管上皮细胞及其分泌物均见有CEA表示，而皮脂腺、皮肤鳞状上皮细胞和宫颈、食管及鼻咽粘膜鳞状上皮细胞不含CEA。CEA偶见于良性上皮性肿瘤及癌前病变组织中，而在许多癌组织中则有大量表示，如胃肠道及胰腺癌、肺癌及甲状腺髓样癌。肿瘤标志物专业知识讲座第26页主要用途CEA与EMA一样均可作为上皮性肿瘤主要标识，尤其是它不受肿瘤分化程度影响，即使是低分化腺癌亦可呈阳性反应，这一点与CK不一样，所以在转移癌判别诊疗上可与EMA、CK联合使用，以提升诊疗正确率。因为CEA是一个分泌性抗原，该抗原可由肿瘤细胞分泌于血液中，能够在血清中测得其抗原水平，故临床可用于：胃肠道癌粗筛普查；术前术后CEA水平动态观察；及时发觉癌肿复发与转移。肿瘤标志物专业知识讲座第27页应用时注意事项：CEA阳性不能作为确认肿瘤组织起源标识；CEA不能用作良、恶性上皮性肿瘤判别诊疗；不论是单克隆还是多克隆抗CEA抗体，在一些肿瘤组织中可表现有非特异性染色，应注意判别。当CEA高于20μg/L时，则意味着可能有消化道肿瘤。肿瘤标志物专业知识讲座第28页肿瘤抗原（carcinomicantigen，CA，也能够写作cancerantigen）是肿瘤细胞膜结组成份，各不相同，为糖蛋白或糖脂，也叫糖类抗原（carbohydrateantigen，CA）。这类抗原是用单克隆抗体技术从肿瘤细胞系（株）中判定出来，所以在特定肿瘤诊疗方面含有较高准确性。肿瘤标志物专业知识讲座第29页CA242CA242是一个唾液酸化黏蛋白类型糖抗原，其单克隆抗体是Lindholm等于1985年经过杂交瘤技术用人结肠癌细胞株COLO205免疫鼠而得，免疫组化研究发觉CA242在恶性组织如胰腺癌和结肠癌中有显著表示，而在其它器官腺癌中亦有轻度表示。

肿瘤标志物专业知识讲座第30页CEA与糖类抗原242（CA242）联合应用当前被认为是对结肠癌最正确标志搭配。肿瘤标志物专业知识讲座第31页CA15-3：CA15-3是1984年Hilkens等从人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成小鼠单克隆抗体（115-DB）；1984年Kufu等自肝转移乳腺癌细胞膜制成单克隆抗体（DF-3），故命名CA15-3。由分泌性上皮细胞（如乳腺、肺、胃肠道、子宫）分泌，正常人排泄物中也可检出。此抗原即使没有器官和肿瘤特异性，在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌和胃肠道癌中指标都有升高（大于30U/ml）。但可作为监测乳腺癌患者术后复发最正确指标。在其它乳腺疾病和个别孕妇（约8%）中CA15-3也有升高。肿瘤标志物专业知识讲座第32页CA19-9：CA19-9是1979年Koprowski等用结肠癌细胞免疫小鼠，并于骨髓瘤杂交所得116NS19-9单克隆抗体。CA19-9是一个糖脂，正常人血清中小于37U/ml，85％-95％胰腺癌患者该项指标较高。手术切除肿瘤后，CA19-9浓度会下降，如再上升，则可表示复发。结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、肝癌和胃癌阳性率也会很高，若同时检测CEA和AFP可深入提升阳性检测率。肿瘤标志物专业知识讲座第33页CA125：CA125是1983年Bast等从上皮性卵巢癌监测出可被单克隆抗体OC125结合一个糖蛋白。

CA125是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌标志物，正常人血清中小于35U/ml。胰腺癌、肝癌、乳腺癌和子宫内膜炎，急性胰腺炎、腹膜炎、肝炎、肝硬化腹水也可使CA-125升高，CA-125升高还与肿瘤复发相关。肿瘤标志物专业知识讲座第34页CA50：CA50是1983年Lindholm等从抗人结肠癌、直肠癌Colo-205细胞株一系列单克隆抗体中筛选出一株对结肠癌、直肠癌有强烈反应，但不与骨髓瘤细胞及血淋巴细胞反应单克隆抗体所能识别抗原。CA50存在于细胞膜内。

抗原决定簇为唾液酸Lea血型物质与唾液酸-N-四氧神经酰胺。正常人血清浓度小于20U/ml。肿瘤标志物专业知识讲座第35页普通认为，CA50是胰腺癌和结肠癌、直肠癌标志物。CA50广泛存在于胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫。当细胞恶变时因为糖基转化酶失活或胚胎期才活跃一些转化酶被激活，造成细胞表面糖类结构性质改变而形成CA50。所以，它是一个普遍肿瘤标志相关抗原，在各种恶性肿瘤可检出不一样阳性率。肿瘤标志物专业知识讲座第36页组织多肽抗原(tissuepolypeptideantigen,TPA)为人成熟角化上皮细胞所合成一个非纤维丝状蛋白质。该抗原于胚胎期产生，与CEA、AFP同属胚胎蛋白，但它们之间无交叉反应。成人常见于增生活跃上皮细胞，免疫组化研究表明，多数上皮及其肿瘤为阳性，而非上皮组织为阴性反应。TPA在基底细胞中无表示，但可见于棘细胞中，所以TPA成为鳞状上皮细胞标识物。肿瘤标志物专业知识讲座第37页前列腺特异性抗原（prostatespecificantigen,PSA）起源及分布前列腺特异性抗原是一个由前列腺组织中提出、分子量为33kD蛋白质，它存在于正常、增生和肿瘤性前列腺上皮细胞中。PSA免疫组化染色阳性分布在正常前列腺腺泡和导管上皮细胞胞质及腔内分泌物中，但不一样病例或同一切片上不一样区域在分布和表示强度上有所不一样，良性前列腺增生有较强PSA表示，但前列腺组织中鳞状上皮化生和尿道周围腺体、输精管、精囊、膀胱移行上皮细胞均不表示PSA。肿瘤标志物专业知识讲座第38页主要用途PSA是前列腺及其肿瘤特异性标识，尤其对转移性前列腺癌诊疗有主要意义。因为PSA有很好组织特异性，所以在男性病例恶性肿瘤判别诊疗中，尤其是骨髓和淋巴结转移癌判别诊疗中，在形态学上难以作出原发病诊疗时，作PSA免疫组化染色是十分必要，以证实或排除前列腺癌转移。应用中注意事项

PSA不能作为良、恶性前列腺病变诊疗标识；少数前列腺癌PSA阴性，所以多与前列腺酸性磷酸酶（PAP）同时检测，可提升诊疗准确率。肿瘤标志物专业知识讲座第39页

前列腺酸性磷酸酶（prostateacidphosphatase,PAP）前列腺酸性磷酸酶为酸性磷酸酶中一个同工酶，是前列腺分泌正常成份，含有水解酶功效。在正常和增生前列腺组织中，只有前列腺上皮和导管上皮细胞及其腔内分泌物呈PAP阳性表示，而尿道周围腺上皮、输卵管和输精管上皮细胞均为阴性。肿瘤标志物专业知识讲座第40页原发性和转移性前列腺癌都有较强PAP阳性表示，但个别膀胱癌及有些部位类癌中也有表示。PAP与PSA一样不能作为良、恶性前列腺病变判别诊疗。即使PAP是一个前列腺特异性酶，但一些非前列腺组织亦可有阳性表示，所以最好与PSA同时应用，以提升诊疗准确率。正常和增生前列腺组织PAP阳性表示有时强于前列腺癌，甚最少数前列腺癌能够不表示PAP。肿瘤标志物专业知识讲座第41页BCA-225

全名为乳腺癌相关糖蛋白（breastcarcinomaassociatedglycoprotein,BCA-225），为乳腺癌组织中分离出分子量为225kD糖蛋白，该蛋白与小鼠乳腺肿瘤病毒外壳糖蛋白gp52有交叉反应，绝大多数人乳腺癌组织中BCA-225阳性。另外，肺癌及宫颈癌中也有表示。肿瘤标志物专业知识讲座第42页（二）间叶组织及其肿瘤标志物间叶组织系指中胚叶起源组织，包含纤维、脂肪、骨、软骨及肌肉组织等。

肿瘤标志物专业知识讲座第43页波形蛋白起源及分布波形蛋白（vimentin）为一个中间丝蛋白，最初从鸡胚纤维母细胞中发觉，是一个分子量52-58kD胞质蛋白，主要存在于间叶细胞，如血管内皮细胞、纤维母细胞、血管平滑肌细胞、软骨细胞、许旺细胞及胶质细胞之中。用免疫荧光法染色，vimentin结构似波纹状，故称之为波形蛋白。主要用途vimentin是正常间叶细胞及其肿瘤特异性标志，常作为间叶组织肿瘤标识物，广泛用于免疫病理诊疗和科研工作中。肿瘤标志物专业知识讲座第44页胶质纤维酸性蛋白起源及分布胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）是从人脑胶质细胞中分离取得，它是一个分子量40-52kD酸性蛋白，含有丰富天门冬氨酸和谷氨酸。主要用途GFAP可作为星形胶质细胞及其肿瘤标志物。

（三）神经和神经内分泌细胞及其肿瘤标识物肿瘤标志物专业知识讲座第45页S-100蛋白起源及分布S-100蛋白是从牛脑中提取一个可溶性酸性蛋白,分子量20-25kD，因其能溶于100%硫酸铵溶液而得名。它存在于人体内各种细胞如胶质细胞（如星形细胞、少突胶质细胞、室管膜细胞，但不存在于小胶质细胞）、许旺细胞、脉络丛上皮细胞、脑膜上皮细胞、黑色素细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌上皮细胞以及眼视网膜细胞、腺垂体前叶与后叶细胞、肾上腺髓质嗜铬细胞、表皮郎格罕细胞、汗腺导管及腺泡上皮、淋巴结内指突状网织细胞、胎盘滋养叶细胞和上述细胞起源肿瘤细胞之中。肿瘤标志物专业知识讲座第46页主要用途尽管S-100蛋白分布十分广泛，但在病理诊疗上S-100蛋白还是被看作神经胚叶肿瘤一个很有用抗原。肿瘤标志物专业知识讲座第47页（四）淋巴造血组织及其肿瘤标志物免疫球蛋白免疫球蛋白（immunoglobulins,Ig）主要用来区分B淋巴细胞反应性增生和肿瘤，前者常为κ及λ链多克隆表示，后者则为单克隆表示。肿瘤标志物专业知识讲座第48页肿瘤标志物专业知识讲座第49页铜蓝蛋白（Cerulopasmin,CP）：CP是血清中一个含铜含有氧化酶活性2糖蛋白，分子量151000，当前认为肝脏是合成CP唯一器官。作为一个与急性期相关蛋白，在许多病理情况下可升高，但许多学者认为血中CP增高是恶性肿瘤共性，增高原因可能是癌肿病人体内多胺含量增多，而CP能够氧化多胺，血清CP增高可能是对多胺水平增加一个反应，或是与肝脏合成CP增加及分解代谢降低相关。正常值：392±72μg/L肿瘤标志物专业知识讲座第50页绒毛膜促性腺激素（humanchorionicgonadotropin,HCG）是一个糖蛋白激素，由胎盘及其肿瘤或含有滋养叶细胞成份生殖细胞肿瘤（如非妊娠性绒癌、胚胎性癌等）产生。由非滋养细胞肿瘤分泌HCG称为异位HCG。当前发觉几乎全部组织，尤其是肿瘤包含肺癌、乳腺癌、子宫颈癌和卵巢癌等均可产生异位HCG。（五）其它肿瘤标志物专业知识讲座第51页分泌异位HCG肿瘤患者对化疗敏感性降低，肿瘤轻易复发。多数学者认为，肿瘤细胞产生HCG起源于多潜能干细胞。非滋养细胞肿瘤分泌HCG，可看作是一个早期胚胎基因表示，是一个返祖现象。（HCG基因未被完全抑制）。肿瘤标志物专业知识讲座第52页乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）：LDH总活性在肿瘤患者血清中升高．但许多疾病如心肌梗塞、感染和恶性贫血均可见LDH升高。而在恶性淋巴瘤、白血病、卵巢癌患者血清中异常增高。经治疗病情好转时LDH下降，复发时又上升。LDH有5种同功酶。在恶性肿瘤时LDH4和LDH5增高，而LDH1和LDH2相对降低。原发性肝癌时LDH5>LDH4，而继发性肝癌时则LDH4>LDH5。肿瘤标志物专业知识讲座第53页六、肿瘤标志物改变解释

1、浓度下降到正常水平，提醒肿瘤全部除去或病情缓解2、浓度显著下降但仍连续在正常水平以上，或短期下降到正常水平后又重新提升，提醒有肿瘤残留和（或）肿瘤转移3、浓度下降到正常水平一段时间（数月）后，重新增加，提醒复发或转移4、如化疗、放疗或手术后马上测定肿瘤标志物浓度，可能会有短暂升高，这是因为肿瘤坏死所致5、化疗、放疗或