肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座

常见肝病病理形态特点及免疫组化染色几点体会

复旦大学病理学系张锦生肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第1页肝穿刺标本检验和处理标准1.肉眼观察肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3cm经典慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观肝硬化穿刺标本，呈不规则碎块肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第2页2.石蜡切片每张玻片上应放置超出6个连续组织切片，有利于肝纤维化病理诊疗。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第3页3.染色除常规ＨＥ染色供病理诊疗用之外，依据条件和需要作以下特殊染色：

①网状纤维染色，

②Masson三色染色，

③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第4页④Dm-HSC⑤α-SMA-MFb

Dmα-SMA肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第5页S1S2S3S4各种病因引发肝纤维病理学特点及分期1.慢性肝炎肝纤维化(Dr.Scheuer方案）肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第6页活动性纤维间隔静止性纤维间隔肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第7页脂肪性肝病肝纤维化穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液

小叶中央区纤维化窦周纤维化肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第8页3.肝糖原累积病肝纤维

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第9页4.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)染色,铜被染成深绿色肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第10页5.血色病

穿刺肝组织因含有大量含铁血黄素从容呈火焰红色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第11页6.本身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）

门管区肝细胞呈花环状排列HepaticRosette，表现为数个水样变性肝细胞被炎症细胞和塌陷网状支架包绕成花环状结构。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第12页7.原发性胆汁性肝硬化（PBC）

3期（间隔期）90%出现本身抗体(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，

纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症活动–FibrousPN.肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第13页8.血吸虫性肝纤维化

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第14页肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第15页肝癌病理诊疗惯用免疫组化和特染HepPar1线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异(HCC:阳性率82-97%）

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第16页AFPHCC阳性率：15-82%肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第17页CD34:HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第18页CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+上皮性肿瘤标志物肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第19页CK19:胆管型CK:CK19,CK7肝细胞－胆管上皮，ICC：77-100%ICC最好标志物肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第20页CEA：monoclonalCEA:毛细胆管－ICC，转移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonalCEA:毛细胆管＋HCC特异标志物之一

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第21页CK20:胃肠道腺癌主要标志物转移性腺癌：74-100%+ICC:10%+HCC:0%+肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第22页MOC31:抗人上皮相关抗原

转移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第23页HBsAg:HCC:70-80%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第24页黏液染色：AB/PAS

酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第25页免疫组织化学染色几点体会一、组织和细胞标本制备目标：(1)最大程度地保留组织结构。(2)最大程度地保留抗原性。注意事项：在选择组织处理方法前，先依据试验目标，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第26页1.取材（1）标准：尽可能新鲜，动物标本可选用动脉灌注固定。（2）取材部位：尽可能包含病灶和正常组织交界处，防止选择坏死组织。（3）防止挤压：受挤压组织不但影响HE切片观察，还造成非特异性免疫组化组织着色。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第27页2.固定依据不一样染色目标，选择不一样固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要适当。容器要大,固定液要宽余.固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.选择最适当固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第28页3.制备蜡块冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采取低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保留组织内抗原稳定。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第29页4.制备冰冻切片冷冻包埋能很好保留抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。★预防冰结晶!!!预处理:目标是降低组织中水分以降低冰结晶产生,方法是将已固定、冲洗组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂速冻:目标是使温度很快下降快速经过冰点,预防冰结晶产生。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第30页速冻方法液氮法:将OCT包埋组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,马上移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐步加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70℃;将装有50ml异戊烷小烧杯迟缓置入干冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第31页免疫组化染色后衬染惯用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但假如阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FASTBLUE)染,则保留时间较长肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第32页封固和保留绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。酶免疫染色切片可保留数周甚至数月。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第33页一.惯用免疫组织化学方法免疫荧光:

用于培养细胞效果很好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意

FITC(异硫氰酸荧光素)用450～490nm光激发,515nm滤片观察,呈翠绿色

RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色

TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色

Texasred用595nm光激发,615nm滤片观察,呈红色直接免疫荧光法:间接免疫荧光法双重荧光染色肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第34页2.免疫组织化学惯用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第35页20世纪70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第36页20世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组化）Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第37页90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)简称二步法1mol含70molHRP+10molAB肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第38页怎样做好免疫组化染色?什么才是高质量免疫组化染色?阳性信号突出无背景染色切片平整无破裂/碎,无污秽肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第39页做好免疫组化染色几点体会1.组织细胞处理:

固定剂固定时间速冻防冰结晶白片质量好:平整,无破裂/碎,无污秽防脱片:玻片绝对洁净涂粘合剂:

白胶多聚赖氨酸铬明矾明胶液甲醛明胶液

贴片后冷风吹干或37℃/60℃烘干

肝病的病理形态特点和免疫组化染色体会专家讲座第40页2.抗体:特异性,高效价,亲协力,适度稀释度3.石蜡切片-抗原修复

(1)蛋白酶消化:胰蛋白酶胰糜蛋白酶链霉蛋白酶蛋白酶K胃蛋白酶

消化不足-修复失败,假阴性或信号弱消化过分-结构破环,脱片(2)热修复:微波照射高压加热水浴加热

(3)微波+蛋白酶消化注意点:★固定时间长,消化时间或热修复时间适当延长★酶生产厂家不一,或批号不一,消化时间可能