骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT

结核感染T细胞斑点检测技术

（T-SPOT.TB）及其临床应用检验科细菌室骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第1页肺外结核病占全部结核病15%-20%死亡人数占全部结核病死亡数14.1%-17.6%上升趋势结核病……你真正了解吗？骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第2页新疆结核病疫情我区依然是全国结核病高发省区之一，每年汇报肺结核发病人数近5万例。依据年结核病流行病学调查结果，我区活动性肺结核患病率、涂阳肺结核患病率、菌阳肺结核患病率分别为全国平均水平3.3倍、3倍和3.6倍。关于印发新疆维吾尔自治区结核病防治规划（-年）通知骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第3页WHO潜伏结核感染管理指南()定义(LTBI)机体对结核分枝杆菌抗原刺激产生持久性免疫反应，临床上没有任何活动性结核征象.高风险人群HIV感染者、实体器官移植者、接收TNF-a抑制剂指治疗患者和免疫介导炎症性疾病（RA/SLE和其它本身免疫病）、透析患者、血液系统恶性肿瘤患者，包含HSCT者CDC指南高危患者考虑TST和IGRA任何阳性结果应该被认为LTBI证据骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第4页使用抗TNF-a治疗前抗结核治疗(北京胸科医院）仅仅T-SPOT结果阳性，无其它结核表现，可预防性抗结核治疗3-6个月。化疗方案：

三联方案：异烟肼：0.3/日

利福平0.45/日

乙胺丁醇0.75/日两联方案：异烟肼：0.3/日利福平0.45/日用药前查肝、肾功效、血、尿常规，用药后2W、4W，以后每4W复查一次。疗程3-6个月。抗结核治疗4W后开始抗TNF-a治疗。骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第5页结核病诊疗技术分子生物学介入诊疗影像学结核病诊疗细菌学病理学免疫学骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第6页1.结核抗原、抗体诊疗—简便、快速，能够作为结核病辅助诊疗方法之一，但诊疗价值有限。年WHO正式公告禁止2.PPD（TST）试验—传统结核感染检测方法易受BCG接种史和非结核分枝杆菌干扰，特异性低免疫低下患者中，诊疗敏感性低

需要2-3天等候时间免疫学检测伎俩骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第7页列入美国、英国等欧美20多个国家结核诊疗指南；美国CDC推荐：BCG接种人群结核感染检测首选；国内教授指南CFDA同意使用范围：检测血液样本中效应T细胞产生IFN-γ能力，用于诊疗结核杆菌感染。适应症：结核感染诊疗和活动性结核病辅助诊疗T-SPOT.TB(酶联免疫斑点法ELISPOT)骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第8页1.特异性好，不受卡介苗（BCG）接种与环境分枝杆菌影响；2.灵敏度高，几乎不受个体免疫功效低下影响；3.快速，24h汇报结果；4.对肺外结核诊疗尤其有帮助；5.降低医疗事故风险，降低带药诊疗医患纠纷风险。方法学优点T-SPOT®.TB诊疗性能骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第9页

T-SPOT®.TB临床性能指标特异性只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应。

美国FDA数据：特异性97.1%(297/306)国内临床数据：特异性94.1%(478/508)灵敏度基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺结核与肺外结核患者中都有很高检出率。

美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655)骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第10页试验效果图阴性结果阳性结果空白对照抗原AESAT-6抗原BCFP10阳性对照（PHA）24小时报告结果阴性结果：A抗原或B抗原斑点数均小于6阳性结果：A抗原或B抗原斑点数任意一个大于等于6，骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第11页试验结果解释阴性结果意义提醒患者体内不存在针对结核杆菌特异效应T细胞。排除结核感染——排除结核病——帮助临床鉴别诊疗阳性结果意义提醒患者体内存在针对结核杆菌特异效应T细胞，患者存在结核感染。不过否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。结核感染——结合临床综合判断——怀疑骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第12页检测结果判读骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第13页182名ATB疑似患者中，71名分作肺部疾病组，111名分作肺外疾病组（包含中枢神经系统、外周淋巴结、胸膜、骨骼、生殖泌尿系统等）T-SPOT.TB在肺疾病组和肺外疾病组中灵敏度分别为95.6%和93.3%，特异性分别为69.2%和88.9%。冯云,张文宏等.PLOSONE,（IF=3.53）T-SPOT.TB临床数据骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第14页Cho

等在

368

例疑诊肺外结核患者中研究显示，T-SPOT.TB在诊疗淋巴结核和骨结核敏感性为

93%

，在诊疗急性肺外结核(结核性脑膜炎和粟粒性肺结核)敏感性为

79%

。ChoOH,KimSH,etal.JInfect,（IF=4.073）T-SPOT.TB临床数据骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第15页骨结核辅助诊疗和判别诊疗

如脊柱结核与强直性脊柱炎、化脓性脊柱炎、腰椎间盘突出、脊柱肿瘤、退行性脊柱骨关节病等判别诊疗结核感染筛查大剂量激素使用抗TNF-a、生物制剂使用前后不明原因发烧患者结核排筛骨科——适应范围T-SPOT.TB在骨科应用骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第16页贾红彦,张宗德等，北京胸科医院，DiagnMicrobiolInfectDis,γ干扰素释放试验在骨关节结核病诊疗中

应用价值研究骨科临床应用（一）骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第17页特点结核n(%)非结核n(%)n=86n=24合并其它部位结核肺结核11（12.8）0肾脏结核4（4.7）0病灶位置脊柱59(68.6)14(58.3)髋关节8(9.3)2(8.3)膝关节6(7.0)2(8.3)肘关节3(3.5)3(12.5)手关节1（1.2）1（4.2）踝关节3(3.5)0骶髂关节2（2.3）0肩关节2（2.3）0肋骨1（1.2）0股骨1（1.2）2（8.3）确诊骨关节结核病非活动性结核病例数8624分类细菌培养确诊疑似结核病2660确诊病例（培养阳性者）、疑似结核病（组织活检或发觉干酪性肉芽肿而且抗结核治疗有效）和非活动性结核病患者（确诊为其它疾病、未抗结核治疗而病情好转）H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第18页H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,将86名骨关节结核病患者依据其病程，即住院前出现症状时间，将研究对象分为四组：﹤6月、6-12月、12-24月、﹥24月，T-SPOT.TB试验在上述四组中敏感度无统计学差异。T-SPOT.TB试验在确诊110名怀疑骨关节结核病患者中诊疗准确性类型（n)细菌培养确诊（26）疑似结核病（60）脊柱结核（59）四肢关节结核（27）敏感度%100%91.7%98.3%85.2%P﹤0.05P﹤0.05骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第19页H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,T-SPOT试验敏感度远高于痰涂片抗酸染色、结核分枝杆菌培养和实时荧光定量PCR（P﹤0.05）。

T-SPOT.TB可作为骨关节结核病诊疗主要辅助工具。T-SPOT.TB试验和其它诊疗方法在110名怀疑骨关节结核病患者诊疗中准确性比较方法敏感度,%(n)特异度,%(n)痰涂片抗酸染色19.7(15/76)100(16/16)结核分枝杆菌培养34.2(26/76)100(16/16)实时荧光定量PCR36.8(28/76)93.8(15/16)T-SPOT.TB试验94.2(81/86)*70.8(17/24)骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第20页讨论骨关节结核病诊疗依然是一个难以处理问题在炎症部位进行组织和滑膜活检是最快捷诊疗方法，但该方法有创伤性痰涂片抗酸染色敏感度为19.7%，原因在于骨关节结核病患者所检测样本中细菌载量低结核分枝杆菌培养敏感度仅为34.2%，且该试验耗时较长，大约需要4-8周时间才能得到结果实时荧光定量PCR检测敏感度为36.8%，在病原学确诊患者中可达61.5%，造成该试验敏感度低原因除标本细菌载量低外，还有可能因为病灶部位细菌分布不均造成检测标本中无结核分枝杆菌存在T-SPOT.TB试验敏感度（94.2%）显著高于痰涂片抗酸染色（19.7%）、结核分枝杆菌培养（34.2%）和实时荧光定量PCR（36.8%）H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第21页酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测在骨结核中诊疗价值骨科临床应用（二）LaiCC,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第22页C.-C.Lai,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,结核性骨关节炎患者ELISPOT检测结果ELISPOT检测诊疗骨结核(包含确诊与临床诊疗)敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为86.7%（13/15），61.9%（13/21），61.9%（13/21），和86.7%（13/15）。患者例数(%)确诊结核(n=12)临床诊疗结核(n=3)确诊＋临床诊疗结核(n=15)ELISPOT检测阳性例数(%)11(91.6)2(66.7)13(86.7)ELISPOT检测阴性例数(%)1(8.4)1(33.3)2(13.3)3月至6月，本研究共纳入台湾一所三级保健医院36例疑诊骨结核患者（21例排除结核）骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第23页C.-C.Lai,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,敏感性差异可能因为不一样部位结核所致免疫反应程度不一样。ELISPOT检测可辅助诊疗骨结核，阴性结果可排除脊柱结核变量脊柱结核关节结核确诊结核(n=7)临床诊疗结核(n=2)确诊+临床诊疗结核(n=9)确诊结核(n=5)临床诊疗结核(n=1)确诊+临床诊疗结核(n=6)ELISPOT检测阳性例数(%)7(100.0)2(100.0)9(100.0)4(80.0)0(0.0)4(66.7)ELISPOT检测阴性例数(%)0(0.0)0(0.0)0(0.0)1(20.0)1(100.0)2(33.3)ELISPOT检测对不一样部位结核性骨关节炎诊疗效能骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第24页对疑似肺外结核患者进行T-SPOT.TB检测。针对不一样感染部位T-SPOT.TB检测灵敏性以下表所表示：骨科临床应用（三）Choetal.JournalofInfection()63,362-369作者认为：“这些结果表明，不论免疫状态怎样和培养阳性是否，T-SPOT.TB检测有利于排除像淋巴结结核和骨关节结核一类慢性结核病。其中15例为脊柱结核骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第25页酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在非经典脊柱结核感染诊疗中应用评价骨科临床应用（四）广州中医药大学第一从属医院

骨科

袁凯TheBrazilianJournalofInfectiousDiseases,;17(5):529-537非经典性脊柱结核病情隐蔽，病变迟缓，早期临床症状、影像学诊疗不显著，试验室检验成为诊疗非经典性脊柱结核必不可少方法骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第26页患者例数(%)灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值ELISPOT(%）82.8%、81.3%、80.0%和83.9%PPD(%)病灶抗酸杆菌涂片58.6%、59.4%、56.7%和61.3%37.5%纳入65例患者，确诊结核(n=18)

临床诊疗结核(n=11)

排除结核(n=32)骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第27页

在脊柱结核病感染发展早期，临床症状未能完全表现出来，除了有显著骨破坏和椎间隙变窄，平片诊疗作用非常有限。

在非经典脊柱结核感染椎体炎症期（未有显著骨破坏和椎旁脓肿形成），MRI诊疗价值受到很大限制。3名疑难病例T-SPOT能为非经典性脊柱结核感染患者提供有效辅助诊疗：结核病接触史合并肺结核结核中毒症状PPDMRI和PET-CTT-SPOT术前或术中病灶活检穿刺无无无阴性考虑脊柱肿瘤可能性大阳性结核改变病理学检验结果与ELISPOT试验结果有着很好一致性（к=0.506）。骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第28页结核感染筛查

抗TNFα治疗前筛查指南多个国家指南提议在抗TNF-ɑ治疗开始前，应采取T-SPOT.TB方法进行结核感染筛查卡介苗（BCG）接种人群结核感染检测首选——美国CDC推荐瑞士关于抗TNF-α治疗前筛查结核潜伏感染指南中提议要求全部接收抗TNF-α治疗患者在治疗前都应该进行结核病检测和潜伏感染筛查筛查应该基于既往史，X摄片和γ干扰素释放试验（T-SPOT.TB方法）骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第29页《依那西普治疗类风湿关节炎和强直性脊柱炎教授提议》生物制剂使用前，应排除活动性结核病(包含肺结核和肺外结核)及结核潜伏感染者。核)及结核潜伏感染者。《英夫利西单抗治疗类风湿关节炎和强直性脊柱炎参考意见》.12可用辅助诊疗方法可考虑用结核抗原特异性IFN-γ释放试验(IGRA)。其中以T-SPOT敏感性(88％)和特异性(82％)最高，而TST为65％和75％。对T-SPOT阳性者，高度怀疑结核感染可能，应予抗结核治疗。”三、结核感染筛查

用药前筛查相关指南骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第30页(FUO,feverunknownorigin):①发烧时间连续≥3周；②体温屡次＞38.3℃；③经≥1周完整病史问询、体格检验和常规试验室检验后仍不能确诊北京协和医院感染内科至收治997例不明原因发烧患者病因分析显示，感染性疾病一直是最主要病因，占479例(48.0%)，其中结核病占45.3%(217/479)侍效春,刘晓清等.ChinMedJ,（IF=0.901）三、结核感染筛查

不明原因发烧筛查骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第31页T-SPOT检测结果临床意义解读T-SPOT阴性结果：阴性检测结果代表当前机体没有

MTB特异抗原致敏

T淋巴细胞，即受检者当前未感染

MTB。临床诊疗上首选排除结核病诊疗，尤其是在结核病高发地域、免疫功效正常人群及无可靠依据诊疗结核病时，在可能诊疗排序上，结核病应列在其它疾病之后。中华结核和呼吸杂志年10月第37卷第10期高孟秋骨科结核感染T细胞斑点检测SPOT第32页

二．T-SPOT阳性结果：