植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座

生物学综合试验模块二植物生理学大试验植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第1页试验一植物激素对植物形态建成作用目标与要求了解不一样百分比生长素和激动素对烟草髓愈伤组织形成和分化影响，并学习植物组织培养技术。原理植物各器官分化，首先是细胞极化过程。植物体每一个细胞都由受精卵分裂而来，即使高度分化细胞，也保留着遗传上全能性，即在每一个细胞中，包含着产生一个完整有机体全部基因。在烟草髓组织培养中，激动素和生长素在愈伤组织形成和分化中，有相互作用。产生大量愈伤组织，需要有生长素和激动素。在一定浓度范围内，生长素/激动素百分比高时，产生根；生长素/激动素百分比低时，产生芽；在二者百分比子居间时，愈伤组织占优势。植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第2页

材料与设备一、材料

40-60厘米高、生长健壮烟草植株二株。二、设备高压灭菌锅 培养室超净工作台 三角瓶（100毫升）培养皿 手术刀封口膜 长柄镊子手术剪 消毒棉植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第3页

试剂各种母液（1）1毫克/毫升生长素溶液（2）1毫克/毫升激动素溶液（3）1毫克/毫升维生素B1（盐酸硫胺素）水溶液（4）20毫克/毫升肌醇溶液（5）称取以下试剂，溶于水后定容到250毫升。

H3BO3 0.31克

KH2PO4 8.5克

KI 0.0415克

Na2MoO4·2H2O0.0125克

CoCl2·6H2O0.00125克（6）称取以下试剂，溶于水后定容到250毫升。

MgSO4·7H2O 18.5克

MnSO4·H2O 0.845克

ZnSO4·7H2O 0.43克

CuSO4·5H2O0.00125克（7）称取以下试剂，溶于水后定容到500毫升。

Na2EDTA 1.86克

FeSO4·7H2O 1.39克植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第4页愈伤组织诱导培养基（RM-1965培养基）

每一升培养基含有：

母液（5）5毫升盐酸硫胺素0.4毫升母液（6）5毫升生长素2毫升母液（7）10毫升激动素0.30毫升

NH4NO31.65克肌醇5毫升

KNO31.9克蔗糖30克

CaCl20.33克琼脂10克用1M氢氧化钠调pH至5.6—5.8。每瓶装50毫升，于高压灭菌锅中灭菌121℃,15-20分钟，冷却后备用。植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第5页愈伤组织分化培养基

除生长素和激动素按下面浓度加入外，培养基其它成份和浓度，同RM-1965培养基。培养基分成六个处理，每个处理有五个重复。生长素浓度（毫克/升）激动素浓度（毫克/升）（1）00

（2）00.2

（3）20

（4）20.2

（5）20.02

（6）0.022

调整pH、分装及灭菌步骤同诱导培养基。植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第6页操作程序一、愈伤组织诱导1．烟草茎段灭菌

取约2尺高烟草植株地上部分，去叶，去顶，刷洗洁净。切成7厘米长小段，分别用70%乙醇和5%次氯酸钠溶液浸泡消毒，置于无菌培养皿中备用。2．烟草髓制备

在无菌超净工作台中，用镊子夹住烟草茎切段顶端，另取无菌手术刀将切段四面皮层组织切掉，直至露出烟草髓组织，然后用手术刀将髓两端各切出0.5厘米去掉，再将中间一段切成2毫米左右厚小圆片，切割时要注意烟草形态学上下方向。3．接种

用长柄镊子向装有诱导培养基三角瓶中，接入三个髓片，使其形态学上端朝下紧贴在培养基上，封好封口膜。4．培养

将接种完成材料置于培养室中，28℃下培养。一周后，可显著地看到圆片周围和上表面渐渐地形成愈伤组织。植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第7页操作程序二、器官再分化

在无菌条件下，用长柄镊子将诱导出愈伤组织取出，用手术刀小心地切成约2×2×2毫米3小块，并分别转入RM分化培养基中，置于28℃培养室中自然光照下培养。每七天观察培养物，统计其生长及改变情况。五周后总结观察结果。植物生理学大实验实验一植物激素对植物形态建成的作用专家讲座第8页结果统计1．愈伤组织出现时间。2．根和芽出现时间。3．统计根、芽及全苗数。处理号 根数 芽数 全苗数（1）（2）（3）（4）