细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别

一、目标要求掌握细菌判定中惯用生理生化反应原理、方法、结果判定以及在诊疗中利用熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特征和常规微生物学诊疗方法经过本试验加深理化原因及生物原因对微生物影响概念细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第1页二、试验材料

菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巴氏杆菌培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、水琼脂斜面、氧化-发酵培养基（小生化管）、普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜面、各类生化反应管等器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第2页三、试验内容1、细菌对空气（氧气）需要菌种：大肠杆菌、枯草杆菌方法：用吸管将两种菌各加入两支己溶化葡萄糖深层琼脂管中，培养基：葡萄糖深层琼脂（己溶化）2、细菌对营养要求菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌培养基：斜面（水琼脂、普通琼脂）方法：划线方法（一）细菌生理生化试验细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第3页3、细菌氧化型与发酵型（O/F）测定菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：加有葡萄糖和指示剂（1%溴麝香草酚蓝）微型发酵管方法：用接种针将两种菌各加入两支发酵管中，从不一样菌里各取一管加入灭菌液体石蜡，37℃正置培养。产酸（浅绿色黄色

）细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第4页4、淀粉水解试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：普通营养琼脂平板方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。5、触酶（过氧化氢酶）试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：普通营养琼脂平板方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加H2O2细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第5页（二）肠杆菌科判别（大肠杆菌&沙门菌）细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第6页细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第7页肠杆菌科生化试验1、麦康凯琼脂平板（乳糖、胆盐、指示剂：1%中性红）方法：划线，分解乳糖菌落变红2、三糖铁琼脂斜面（葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、指示剂：0.5%酚红）方法：先划斜面再穿刺细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第8页3、糖分解试验微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由紫色

黄色4、吲哚（靛基质）试验培养基：蛋白胨水微量管原理：细菌分解蛋白质中色氨酸产生吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成红色。方法：接种针接种，培养12-24h后，加入试剂显色细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第9页5、甲基红（MR）试验培养基：葡萄糖蛋白胨水原理：甲基红试验：分解葡萄糖产生丙酮酸，深入分解为甲酸、乙酸、乳酸等使pH下降，含甲基红指示剂培养基变红

6、VP试验：葡萄糖蛋白胨水原理：一些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨中精氨酸胍基作用产生粉红色化合物细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第10页7、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验培养基：Simmon氏枸橼酸钠微量发酵管原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生NH3反应，形成NH4OH，使培养基变碱，pH升高，指示剂溴麝香草芬蓝由草绿色变为深蓝色。8、脲酶培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红）原理：细菌分解尿素产生2分子NH4，使pH升高，指示剂变红。细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第11页9、硫化氢试验培养基：营养琼脂中含FeSO4微量反应管原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S者，其所产生H2S会使培养基中醋酸铅或FeCl3形成黑色硫化铅或硫化铁。10、运动力试验培养基：半固体琼脂微量反应管方法：穿刺接种细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第12页（三）理化原因及生物原因对微生物影响1.紫外线与杀菌试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌方法：取营养琼脂平板2个，一个涂大肠杆菌，另一个涂枯草杆菌。在其涂有细菌表面贴上以剪出不一样图案硬纸片，然后在紫外灯下距离30厘米照射20分钟，照射完成将硬纸片取走盖回原来平皿盖，于37℃培养24小时观察结果。细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第13页2.药敏试验：圆纸片扩散法菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌培养基：营养琼脂平板方法：细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第14页3.消毒剂抑菌和杀菌试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌方法：与药敏试验方法是一样（纸片扩散法）细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别第15页将以上接好细菌培养基置37℃