版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
石蜡切片技术操作第1页,共13页,2023年,2月20日,星期六实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。实验原理见石蜡切片理论部分实验材料小白鼠各种器官组织第2页,共13页,2023年,2月20日,星期六实验方法石蜡切片技术(一)取材与固定石蜡切片技术(二)渗透与包埋石蜡切片技术(三)切片石蜡切片技术(四)染色石蜡切片技术(五)观察总结第3页,共13页,2023年,2月20日,星期六1准备工作:工具、药品、计划等2动物的麻醉:氯仿麻醉3解剖取材4材料分割:保持样品的完整性与代表性,考虑切片方向,实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5固定:布温氏固定液固定24h。6漂洗:70%乙醇换洗3次,每次20~60min。7保存:70%乙醇0~4℃。一、取材与固定第4页,共13页,2023年,2月20日,星期六二、脱水、渗透与包埋1脱水:85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇,每步30min~60min2透明:1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯,每步30min~60min3渗透:1/2二甲苯+½石蜡→石蜡→石蜡,每步20min~60min,温度62℃4包埋:将材料放入盛有石蜡的纸盒中,摆好位置(要考虑下一步的修快与切片方向),在水中冷却5~10min.第5页,共13页,2023年,2月20日,星期六三、切片1修块用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求:(1)一个蜡块含一个材料,蜡块呈正方形或长方形,材料位于蜡块正中央。(2)材料边缘与蜡块边缘平行,各面要平直,材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。2固着将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。第6页,共13页,2023年,2月20日,星期六3切片按以下顺序进行(1)将样品台固定在切片机样品臂上,使切面竖直;(2)调切片厚度5~10um;(3)将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上,调刀角15~20,将刀固定好;(4)调刀距使样品与刀口尽可能靠近;
(5)切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min;
(6)将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上。第7页,共13页,2023年,2月20日,星期六第8页,共13页,2023年,2月20日,星期六4贴片
(1)清洗载波片;
(2)加粘片剂,要求薄、匀;
(3)放切片,光面向下;
(4)加水于切片下面;
(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平;
(6)烤干吸掉多余水,继续放于温台上至水完全干燥;5贴标签临时标签,用铅笔写明组号、姓名。第9页,共13页,2023年,2月20日,星期六四、染色1脱蜡二甲苯(2)→二甲苯(1),每步5-10min;2复水1/2乙醇+1/2二甲苯→100%乙醇(2)→100%乙醇(1)→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸馏水,每步2min;3初染代氏苏木精染色15min;4分化0.1%HCl脱色至变红→0.1%NaOH至变蓝;5脱水蒸馏水(3-5s)→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇,每步2min;6复染0.5%伊红(溶于95%乙醇)染色10~15min;7脱水透明95%乙醇(10-20s)→100%乙醇(1)→100%乙醇(2)→1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯(1)→二甲苯(2)(≥3min),每步2~3min;第10页,共13页,2023年,2月20日,星期六8封片将材料周围擦干净(注意在擦的过程中材料上的二甲苯必须保证不能干,可随时补加),加1~2滴中性树胶,加盖玻片(需提前洗净擦干备用);9贴标签注明样品名称、染色方法、组号、姓名和日期;10镜检检查样品取材、切片及染色情况,熟悉样品为下次样品观察做好准备;11干燥平放于展片盘中,于37℃温箱中或自然干燥;12预习下次实验:样品的观察,需提前做好预习,并准备纸、铅笔。第11页,共13页,2023年,2月20日,星期六五、观察1样品观察小白鼠脑;小白鼠心肌;小白鼠肝脏;小白鼠肾脏;小白鼠肺;小白鼠小肠;小白鼠肌肉;小白鼠
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024年江苏省百万城乡建设职工职业技能竞赛水务行业化学检验员考试题库-下(多选、简答题)
- (新版)职业技能竞赛(井下作业工赛项)理论考试题库(含答案)
- 促进家庭与学校互动的思路计划
- 开展班级活动的有效方法计划
- 创建良好的前台工作环境的计划
- 年度工作计划与行业趋势的结合
- 工程款借贷合同三篇
- 企业重组协议三篇
- 2020年消防部队岗位模拟考试588题(含参考答案)
- 班级创新竞赛的组织计划
- 农药采购及配送服务方案
- C-TPAT外来人员来访登记表
- 2023年资产负债表模板
- 各类创伤抢救流程图
- 窦桂梅《盼》第二课时名师课堂教学实录
- 读书分享读书交流会《中国民间故事》
- 细胞生物学名词解释(王金发)
- C语言程序设计说课(共34张PPT)
- 高中英语作文建议信HowtowriteAletterofadvice课件
- 互保合同协议
- 扬州树人教育集团2023-2024七年级上学期第一次月考数学试卷及答案
评论
0/150
提交评论