杀菌剂的毒力测定和

杀菌剂的毒力测定和第1页，共16页，2023年，2月20日，星期六一、毒力测定

杀菌剂对病菌的毒力是指药剂本身对病原菌直接作用的性质和程度，它是在严格控制条件下测定的，常用有效中量（ED50）表示，是指抑制50%病菌孢子萌发所需的剂量或有效中浓度（EC50）。杀菌剂的毒力测定方法很多，长期采用经典的离体平板法，即以孢子萌发，抑制孢子发芽率或菌丝生长、变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。第2页，共16页，2023年，2月20日，星期六但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要求较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体的盆栽试验结合起来。第3页，共16页，2023年，2月20日，星期六1.毒力测定的方法室内离体平板法：（1）孢子萌发测定法（2）抑菌圈法（3）生长速率测定法第4页，共16页，2023年，2月20日，星期六（1）孢子萌发测定法有载玻片萌发法及平板培养基培养法。即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育时间，镜检孢子萌发的百分率，载玻片法适合于水溶性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药液浓度，接近实际条件，但对萌发时需氧较多的病原菌不适用。平板萌发适用于不易分解的保护剂，根据测定对象生长需要的配方来制备合适的培养基，由于孢子在培养基的表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少氧而受影响。第5页，共16页，2023年，2月20日，星期六（2）抑菌圈法广泛地应用于真菌细菌的杀菌剂筛选，基本原理是将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀冷凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药剂的圆形滤纸片（直径6mm）左右，或放特制的直径8mm高10mm的不锈钢环，将配好的药液定量加在钢环内，经定温培养一定时间后，由于药剂的扩散作用，使病菌生长受到抑制，即形成“抑菌圈”。测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。第6页，共16页，2023年，2月20日，星期六（3）生长速率测定法

即在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上的供试菌丝体，放在平板上（也称菌碟），经一定时间后观察测量菌落生长速率，一定时间菌落直径的长度与对照组比较，求出抑制百分率，绘浓度对数---抑制百分率毒力曲线图，以ED50来比较毒力程度。第7页，共16页，2023年，2月20日，星期六

平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方法，优点是条件比较一致，影响因子比较单一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原---寄主植物组合法。

第8页，共16页，2023年，2月20日，星期六2．盆栽方法

在温室内进行的，具体方法随各种不同病害而异，例：小麦赤霉病采用分生孢子---幼苗组合法，根据杀菌剂物不同作用机理，有测定以下作用的方法。（1）保护作用；（2）治疗作用；（3）内吸作用。第9页，共16页，2023年，2月20日，星期六（1）保护作用：一般经定量喷雾法处理供试植物，喷药后间隔一定的时间再接种（方法很多，如多针接种，剪叶法或将菌丝块贴在叶片上等），保持发病所需的温、湿度条件，发病后再按病情分级标准进行统计，以病叶率，病情指数增长等指标判断药效。第10页，共16页，2023年，2月20日，星期六（2）治疗作用：测定方法是先在植株上接菌，保温，保湿一定时间，待病菌菌丝侵入或始见发病，再进行喷药处理，其他调查统计方法同上。第11页，共16页，2023年，2月20日，星期六（3）内吸作用：测定根的内吸输导试验，可以采用水培的稻株或棉株，在营养液中加定量的药剂，待24h或48h后进行接菌，发病后调查，若以土培盆栽方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。

持效期的试验：以上各种方法，用先喷药后接菌或先接菌后喷药，间隔不同日期进行处理，可以测定杀菌剂残效。

剪叶法分级标准：

0级（不发病）；1级（＜剩余叶面1/4）；2级（剩余叶面1/4-1/2）；3级（＞剩余叶面1/2）；4级（全部发病）。第12页，共16页，2023年，2月20日，星期六二、有效中量的测定采用一系列的药剂剂量或浓度，每一剂量或浓度可以得出一个相应的孢子抑制百分率，得到两组数据，然后把各剂量换算成对数值，将抑制百分率换算成几率值，将换算后的5对数据建立回归方程，在直坐标系中画出回归直线，此直线称为剂量对数---抑制百分率几率值直线（ED-P-line直线）。第13页，共16页，2023年，2月20日，星期六

抑制百分率=50%，机率值=5

将5代入回归方程，然后求其反对数，即LD-P-Line（剂量对数---机率值直线）。

ED50可以作为多种药剂对同一病菌等效剂量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能做为田间防治的实际指标。第14页，共16页，2023年，2月20日，星期六三、田间试验

室内筛选的药剂必须进行田间试验，通过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，也就