微生物实验讲稿

微生物实验讲稿第1页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验一、培养基的制备技术

第2页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验目的1.掌握培养基制备的基本过程。2.熟悉常用培养基的种类及用途。第3页，共58页，2023年，2月20日，星期六器材和试剂1.试剂

营养琼脂干粉、半固体培养基干粉营养肉汤干粉1mol/L氢氧化钠、1mol/L盐酸。2.器材

三角烧瓶、量筒、吸管、蒸馏水、精密PH试纸、试管（带塞）、天平高压灭菌器、酒精灯、无菌平皿等。第4页，共58页，2023年，2月20日，星期六步骤和方法1.培养基制备的基本过程：1).调配成分：根据配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分水于烧杯或三角烧瓶中,再按培养基说明称取各成分置于容器内，充分混匀，最后补足水分2).溶解→电炉加热3).校正PH：7.2—7.64).澄清过滤5).分装

★斜面和半固体：1/4～1/3试管量

★高层：2/3试管量

★琼脂平板：3mm～4mm厚度第5页，共58页，2023年，2月20日，星期六6).灭菌

◆高压蒸汽灭菌→耐热，121℃,20分钟◆流通蒸汽灭菌→不耐热◆血清凝固器灭菌→富含蛋白质◆过滤除菌→不耐热的营养丰富的液体

7).

质量检验：无菌试验和效果试验8).保存：普通冰箱冷藏第6页，共58页，2023年，2月20日，星期六2.常用培养基

1）营养肉汤：适用于营养要求一般的细菌。2）营养琼脂（普通琼脂）：可制作平板和斜面。用途：作无糖基础用。适用于营养要求一般的细菌。3）半固体培养基：用途：观察动力和保存菌种。4）血琼脂培养基：营养琼脂中加入无菌脱纤维血液5%～8%，制成平板或斜面。用途：用于营养要求较高的细菌培养。5)巧克力琼脂平板：用途：主要用于苛养菌培养。6）麦康凯琼脂平板第7页，共58页，2023年，2月20日，星期六酒精灯火焰第8页，共58页，2023年，2月20日，星期六平板倾注方法第9页，共58页，2023年，2月20日，星期六3.注意事项

1)培养基的调配与溶解

2)水的加入过程

3)容器的选择

4)培养基的浇注

★平皿的打开程度

★培养基的浇注温度及环境第10页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验内容1.培养基制备的基本过程：1).调配成分：根据需配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分水于烧杯或三角烧瓶中，再按培养基处方量称取各成分置于容器内，充分混匀，最后补足水分。2).溶解电炉加热3).校正PH：7.2—7.64）分装★营养肉汤：每管3ml→分装后高压灭菌★半固体：试管高度的1/4～1/3→分装后高压灭菌取出直立★斜面：试管高度的1/4～1/3→分装后高压灭菌，取出后摆成斜面★琼脂平板：厚3mm～4mm→高压灭菌后冷至50℃倾注平板5).灭菌：高压蒸汽灭菌→121℃20分钟。2.配制说明：

培养基以一个大组为单位进行配制，每人保证一份，两种固体培养基一块配制，先分装斜面，剩余高压灭菌后倾注平板。第11页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验二、细菌培养与接种技术

第12页，共58页，2023年，2月20日，星期六

实验目的1.掌握常用培养基的接种方法。2.掌握无菌操作的要领。3.熟悉接种工具的用途、使用方法和对接种环境的要求。第13页，共58页，2023年，2月20日，星期六

器材和试剂1.菌种：

金黄色葡萄球菌

肺炎克雷伯菌

大肠埃希菌铜绿假单胞菌

乙型溶血性链球菌

枯草芽孢杆菌2.培养基：营养肉汤、半固体培养基、琼脂平板、琼脂斜面血琼脂平板、麦康凯琼脂平板。3.其它：接种环、接种针、酒精灯等。第14页，共58页，2023年，2月20日，星期六

步骤和方法1.接种工具2.接种环境3.接种方法→接种前首先检查培养基的外观，其次在培养基上进行标识。

①倾注法

②液体接种法③半固体接种法④斜面接种法⑤平板接种法a连续划线法b分区划线法c棋盘格划线法d涂抹法e自动接种仪接种法

第15页，共58页，2023年，2月20日，星期六4.细菌培养的方法

①需氧培养法②厌氧培养法③二氧化碳培养法

④微需氧培养法5.培养：将接种好的培养基置于35℃培养箱中孵育18～24h，取出观察并进一步检验。第16页，共58页，2023年，2月20日，星期六接种环图片

接种环（针）示意图铂丝→镍丝第17页，共58页，2023年，2月20日，星期六

酒精灯使用方法第18页，共58页，2023年，2月20日，星期六

电子灭菌器第19页，共58页，2023年，2月20日，星期六分区划线分离法及培养后菌落分布示意图第20页，共58页，2023年，2月20日，星期六穿刺接种方法第21页，共58页，2023年，2月20日，星期六斜面接种方法第22页，共58页，2023年，2月20日，星期六液体培养基接种方法第23页，共58页，2023年，2月20日，星期六第24页，共58页，2023年，2月20日，星期六第25页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验内容1.菌种：

金黄色葡萄球菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌乙型溶血性链球菌（A群链球菌）枯草芽孢杆菌2.接种方法

血平板→三分区划线，接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。营养琼脂平板→三分区划线，接种金葡和铜绿假单胞菌。

麦康凯平板→三分区划线，接种大肠、铜绿、金葡和A链。

斜面→连续划线（密而不重），接种铜绿假单胞菌。半固体→穿刺（需一次进行），接种大肠埃希菌和肺克。液体培养基→接种金葡、A群链球菌和枯草芽孢杆菌。3.培养方法：需氧培养4.达到目的：掌握各种接种方法及无菌操作要领，

树立和牢记无菌操作的意识。第26页，共58页，2023年，2月20日，星期六实验三、细菌生长现象观察与革兰染色

第27页，共58页，2023年，2月20日，星期六

实验目的1、掌握观察及描述细菌菌落的方法。2、掌握细菌涂片的制作过程及革兰染色的原理方法和细菌形态观察。3、熟悉细菌在各种培养基上的生长现象及意义。第28页，共58页，2023年，2月20日，星期六器材和试剂1.菌种：同实验二培养基：同实验二

试剂：革兰染液、无菌生理盐水。4.其它：载玻片、显微镜、酒精灯等第29页，共58页，2023年，2月20日，星期六步骤和方法1、细菌生长现象的观察

1）固体培养基a平板培养基：菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度溶血现象、色素、特殊气味等。b斜面培养基：观察菌苔特征。

2)液体培养基：混浊生长、沉淀生长和表面生长。3)半固体培养基：观察细菌是否有动力。第30页，共58页，2023年，2月20日，星期六2、细菌涂片的制作过程涂片→→→干燥→→→固定3、革兰染色的原理

1）细胞壁结构学说2）细菌等电点学说3）化学学说→→→核糖核酸镁盐4、革兰染色的方法初染→→→媒染→→→脱色→→→复染

一紫二碘三酒精第四复红皆水冲时间要看说明书阴性菌红阳性紫5、染色结果的观察：要求绘图。6、影响染色结果的因素

1)操作因素2)染液因素3)细菌因素第31页，共58页，2023年，2月20日，星期六菌落形态示意图第32页，共58页，2023年，2月20日，星期六第33页，共58页，2023年，2月20日，星期六第34页，共58页，2023年，2月20日，星期六第35页，共58页，2023年，2月20日，星期六第36页，共58页，2023年，2月20日，星期六沙雷菌色素第37页，共58页，2023年，2月20日，星期六麦康凯上发酵乳糖第38页，共58页，2023年，2月20日，星期六麦康凯上不发酵乳糖第39页，共58页，2023年，2月20日，星期六第40页，共58页，2023年，2月20日，星期六第41页，共58页，2023年，2月20日，星期六第42页，共58页，2023年，2月20日，星期六第43页，共58页，2023年，2月20日，星期六第44页，共58页，2023年，2月20日，星期六第45页，共58页，2023年，2月20日，星期六第46页，共58页，2023年，2月20日，星期六第47页，共58页，2023年，2月20日，星期六细菌动力结果第48页，共58页，2023年，2月20日，星期六细菌在液体培养基中的生长特征第49页，共58页，2023年，2月20日，星期六

革兰染色过程第50页，共58页，2023年，2月20日，星期六

金葡和大肠埃希菌第51页，共58页，2023年，2月20日，星期六

金黄色葡萄球菌第52页，共58页，2023年，2月20日，星期六

链球菌第53页，共58页，2023年，2月20日，星期六

革兰阴性杆菌第54页，共58页，2023年，2月20日，星期六

革兰阳性杆菌第55页，共58页，2023年，2月20日，星期六革兰阴性双球菌第56页，共58页，2023年，2月20日，星期六

大肠埃希菌（溃疡性结肠炎）第57页，共58页，2023年，2月20日，星期六

实验内容1、细菌生长现象的观察

1）固体培养基a平板培养基：对血平板和营养琼脂平板和麦康凯平板上的菌落分别描述。菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度、溶血现象、特殊气味、色素等。b斜面培养基：观察菌苔特征并描述，