兔VX2肿瘤动物模型的建立

兔VX2肿瘤动物模型的建立徐加菊;叶欣【摘要】@@1兔VX2动物模型的建立rnl.1兔VX2肝癌动物模型的建立rn原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长,已超过62.6万/年,居于恶性肿瘤的第5位;死亡接近60万/年,位居肿瘤相关死亡的第3位.兔VX2肝癌模型从生长特征、转移及死亡、病理过程均与人肝癌相似，而且模型稳定,具有复制性强，种植成功率高、成型周期短等特点，又适于被B超、CT、MRI及血管造影发现和检测,可利用其进行一系列肝癌的影像学、治疗学及抗肿瘤药物的药代动力学等实验研究，是目前最大、最成熟和最常用的肝癌肿瘤模型[1].【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷)，期】2010(031)003【总页数】4页(P227-230)【关键词】兔;VX2肿瘤;动物模型【作者】徐加菊;叶欣【作者单位】泰山医学院仙东，泰安,271000;泰山医学院仙东，泰安,271000【正文语种】中文【中图分类】R731兔VX2动物模型的建立1.1兔VX2肝癌动物模型的建立原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长，已超过62.6万/年,居于恶性肿瘤的第5位;死亡接近60万/年，位居肿瘤相关死亡的第3位。兔VX2肝癌模型从生长特征、转移及死亡、病理过程均与人肝癌相似，而且模型稳定具有复制性强,种植成功率高、成型周期短等特点，又适于被B超、CT、MRI及血管造影发现和检测，可利用其进行一系列肝癌的影像学、治疗学及抗肿瘤药物的药代动力学等实验研究，是目前最大、最成熟和最常用的肝癌肿瘤模型［1］。常用的兔VX2肝癌模型的建立方法包括经皮穿刺及开腹两种途径，前者主要为超声引导下或CT引导下经皮瘤细胞悬液或经皮穿刺小瘤块注入两种；后者包括直视下瘤细胞悬液注入或小瘤组织块穿刺注入或开腹后局部肝脏包埋等三种。1.1.1直视下瘤细胞注射法由于注射时瘤细胞可进入门静脉或肝静脉，造成肝内多发结节或远处转移,同时也由于局部的瘤细胞数量较少、较分散、容易受到机体免疫系统的清除,因而成瘤率低、成瘤时间长。另外该方法需要对瘤细胞进行分离、计数,操作复杂且费用较高，因此逐步被瘤块注入法取代。1.1.2直视下小瘤块注入法或开腹后局部肝脏包埋是直接将分离的瘤组织块剪碎后直视下注入或包埋，由于该方法是将瘤块直接注入或包埋入肝内，保证了肿瘤生长所需要的细胞浓度，不易被机体的免疫系统所清除，提高了成瘤率，所成肿瘤多为单一病灶且形态规则，分叶少见，由于瘤块较大,肝内及远处转移少见，所建模型较稳定［2］。朱光宇等［3］分别采用直视下瘤细胞悬液注射法、直视下瘤块注入后用明胶海绵封堵穿刺通道法及直视下瘤块注入后局部压迫法建立兔VX2肝癌模型。肝脏总种植成功率为93.1%,三组成瘤率分别为79%、100%、100%。LeeKH等［4］采用开腹后直视下组织块种植法建立兔肝VX2肿瘤，种植成功率100%。1.1.3超声引导下或CT引导下经皮穿刺法由于动物损伤小、并发症少，被国内外大多数研究者采用，但前者中超声引导下经皮瘤细胞悬液注入法操作时间长，成瘤率低，成瘤时间较长其造价昂贵、费时、费力、易接种失败及种植成功率低，易发生转移和针道种植等缺陷，使其在研究中的应用受到限制［5］。而超声或CT引导下经皮穿刺组织块注射法复制VX2肝癌模型，具有接种简便、创伤小、无包裹粘连等优点，成功率尤其孤立瘤灶发生率高，方法简单、易行，模型性质稳定，并发症少，异位种植发生率低，在肝癌的基础及临床研究中将得到越来越广泛的应用。Kwang-HunLee［6］等报道在超声引导下经皮穿刺注射瘤组织块组和开腹组的成功率均为100%，但是前者的肿瘤的种植率为20.8%，而后者为8.3%。ShiDH等［7］采用CT引导下经皮穿刺瘤组织块法建立兔VX2肝癌模型（前期9只，后期20只），成瘤率分别为88.9%，95%。1.2兔VX2肺癌模型的建立肺癌是严重威胁人类生命的恶性肿瘤,近数十年其发病率有明显增高趋势，目前全球肺癌平均发病率为20/10万人，中国22/10万人，死亡率位居各种癌症之首。建立一种安全、方便、易行的肺癌模型，有利于其在肿瘤治疗学、放射生物学、介入治疗学和肿瘤影像学等基础研究中的应用［8，9］。兔VX2肿瘤细胞株具有高侵袭性和高转移特性的特点，转移部位主要是局部淋巴结和肺，可应用于肺癌模型的建立。1.2.1兔VX2肺癌模型的建立方法同种移植性肺癌模型的建立方法有细胞悬液注射法、肿块埋植法、CT或X线引导下经皮穿刺瘤组织块注射法、开胸瘤组织块接种法。此外还有单细胞悬液耳缘静脉注射等方法［10］。细胞悬液注射法该方法接种简便、创伤小,但细胞悬液制备复杂，要求条件较高，移植成功率低,接种部位肿瘤早期生长缓慢，且易出现转移和胸壁种植，使其在某些研究中的应用受到限制。马连君等［11］采用组织块悬液法和细胞悬液法两种方法建立兔VX2肺癌模型，接种成功率分别为100%和48%,胸壁种植率分别为4%和20%。肿块埋植法成瘤确切，肿瘤易于单发，非常适合肿瘤治疗研究，但不足之处是:操作方法要求高滩度大。石毅等［12］采用切开埋植肿瘤法建立兔VX2肺癌模型，原位成瘤率为100%(13/13)。开胸瘤组织块接种法操作方法要求高，难度大。TuM等［13］采用开胸暴露右肺下叶后，穿刺注入瘤组织块法建立兔肺VX2肿瘤模，肿瘤成瘤率可达80%(24/30)。虽然开胸手术方法直接，但实验兔发生血胸、气胸、呼吸衰竭、感染等并发症的危险性大，目前已较少应用。CT或X线引导下经皮穿刺瘤组织块注射法采用该方法建立兔VX2肺癌模型接种简便、创伤小;组织块悬液制备简单，要求条件不高，成瘤率高，肿瘤性质不变，存活时间长转移少，尤其适合大批量集中制作［9］。HuXB等［14］采用CT引导下经皮穿刺注射瘤组织块的方法建立兔VX2肺癌模型，成瘤率均为100%。LIX等［15］在CT引导下将载有VX2肿瘤组织悬液的亲水凝胶接种于右肺内建立兔肺肿瘤模型，成功率为72.2%(26/36)。单细胞悬液耳缘静脉注射法吴安乐等［16］采用IV型胶原酶解离释放细胞，经细胞培养后制成细胞悬液，经耳缘静脉注射建立转移性肺癌模型，成功率尚可，但是方法较繁琐，要求控制瘤细胞数量以及易发生感染。该方法目前已不常用。1.3兔VX2肾癌模型的建立肾癌发病率居泌尿系肿瘤的第二位,且有逐年增高的趋势。兔肾VX2肿瘤是目前唯一能在较大动物体内建立的可移植性肾肿瘤模型。该模型的成功建立，为人类对肾癌的研究提供了稳定的大型哺乳动物模型，为研究人类肾癌影像诊断和实验性治疗提供了实验基础［17］。1.3.1兔VX2肾癌模型的制作方法兔VX2肾癌模型制作的常用方法主要有超声引导下肿瘤细胞混悬液接种法,超声或CT引导下肿瘤组织混悬液接种法，手术直视下组织块包埋法及组织块接种法。超声引导下或直视下肿瘤细胞混悬液注射法采用肿瘤细胞或悬液直接种植较费时、费力，且混悬液制备复杂，价格昂贵，易接种失败及种植成功率低，易发生转移和针道种植等缺陷，使其在研究中的应用受到限制。超声或CT引导下肿瘤组织混悬液注射法超声引导下组织块注射法需一定的经验技术，并要求两人协作下才能保证种植成功;尽管经B超引导穿刺种植微创，但模型成瘤后其瘤体形态极不规则，容易沿穿刺针道、腹腔、腹膜后广泛种植。田海燕等［18］采用超声引导下组织悬浊液注射法建立兔肾VX2肿瘤模型，动物成瘤率约为94%，腹壁转移率约为71%。蔡宇红等［19］采用CT引导下VX2肿瘤组织混悬液穿刺种植法（改良法）建立兔VX2肾癌模型，成瘤性高，100%。手术直视下组织块接种法手术直视下组织块接种法的优点在于暴露肾脏种植，只要一次进针就可以接种成功，避免了超声引导下多次反复进针对肾脏造成的损伤，可直接用明胶海绵加压种植点止血，在防止肾包膜下血肿发生的同时，也降低了肾外种植的发生率。SheJJ等［20］采取手术直视下VX2瘤块种植法建立兔VX2肾癌模型，成瘤率100%。手术直视下肿瘤组织块包埋法孙业全等［21］采取手术直视下VX2肿瘤组织块包埋法建立兔VX2肾癌模型，成瘤率90%。1.4兔VX2乳腺癌模型的建立乳腺癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤，在女性肿瘤死亡中占首位。乳腺癌动物模型对提高乳腺癌的实验研究水平具有重要意义。在乳腺癌的实验研究中,有研究［22］表明兔乳腺VX2移植癌模型与人乳腺癌的生物学特征相似，肿瘤生长在乳腺组织内，主要转移至腋淋巴结和肺，适用于乳腺癌的治疗性研究，是进行乳腺癌实验研究的理想动物模型。兔VX2乳腺癌模型的制作方法有组织块悬液注射法及小组织块移植法。两种方法成瘤都很高，以后一种方法常用。WangL等［23］采用组织块悬液注射法建立兔转移性乳腺癌模型,成功率21/23(91%)。王玲等［24］采用小组织块移植法建立兔乳腺VX2移植癌模型，成功率100%。1.5兔VX2骨肿瘤模型的建立多次实验证明，VX2肿瘤对骨质有局限性侵犯及破坏作用，应用其作为瘤源可模仿人体溶骨性转移瘤［25］。因此，建立一个制作方法简单，稳定可靠的，更接近于人体骨肿瘤的生物学环境，与人类骨肿瘤相似的兔VX2骨肿瘤动物模型，对于今后骨肿瘤诊断与治疗的研究有重要意义。兔VX2骨肿瘤动物模型的制作方法：将VX2肿瘤种植入兔长骨骨髓腔及脊椎骨髓腔内可建立VX2骨肿瘤模型。孙诚等［25］采用肿瘤组织悬液建立长骨兔VX2肿瘤模型,接种成功率高。张小玲等［26］通过改良的种植方法(VX2肿瘤悬液经胫骨近端关节面穿刺将肿瘤种植在胫骨中上段的骨髓腔内)建立兔VX2骨肿瘤模型,成功率100%。1.6其他近年来VX2肿瘤被广泛用于各脏器及器官肿瘤模型的建立，有作者尝试建立兔VX2的口腔癌［27］、舌鳞癌移植瘤［28、29］、鼻咽VX2移植癌［30］、子宫癌［31］、胸膜癌［32］、直肠癌［33］、胰腺癌［34］、脑肿瘤［37］、上腔静脉［35］、梨状窝癌模型［36］，取得了较满意的效果，为研究相关肿瘤的生物学行为提供了临床依据，提供了较理想的大型动物模型。2总结兔VX2动物模型为诱发性同种移植转移性癌模型，其瘤源VX2肿瘤细胞株起源于Shope病毒诱发的兔乳头状瘤衍生的鳞癌。VX2瘤株在其生化学、形态学和生物学行为上与人类恶性肿瘤具有较高的相似性，而且不会产生特异性的抗体，能较好的体现原位癌的特点。近年来VX2肿瘤被广泛用于各脏器及器官的肿瘤模型的建立，获得了较满意的效果，为研究相关肿瘤的生物学行为提供了临床依据，提供了较理想的大型动物模型。兔VX2肿瘤模型已被广泛应用于肿瘤影像、治疗及药物代谢等方面的研究,尤其是近年来在肿瘤微创实验方面的应用，取得了较理想的效果。随着认识的不断深入，兔VX2肿瘤模型将会被应用于更多的领域。参考文献：YichengNi,HuaijunWang,FengChen.Tumormodelsandspecificcontrastagentsforsmallanimalimaginginoncology[J].Methods，2009，48:125-138.HeDF,XuK,ZhangXT,etal.TheestablishmentofretrofitmodelofVX2carcinomainrabbitliverandspiralCTevaluation[J].ChinJMedImagingTechnol,2005,21(12):1873-1876.朱光宇，滕皋军,牛焕章，等.兔VX2肝癌模型建立方法的比较及股动脉插管方法的应用[J].中国医学影像技术,2006，22(12):1785-1788.LeeKH,LiapiE,BuijsM,etal.ConsiderationsforimplantationsiteofVX2carcinomaintorabbitliver[J].JVascIntervRadiol，2009，20(1):113-117.HongK,KhwajaA,LiapiE,etal.Newintra-arterialdrugdeliverysystemforthetreatmentoflivercan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