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文档简介

细胞培养操作前及操作中应注意事项

无菌操作贯穿细胞培养的始终一、培养操作前注意1.培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。2.操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒30分钟）。3.洗手和着装（原则上与外科手术相同）。4.火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管）。二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话或咳嗽。悬滴培养用的凹载玻片单位：mm（一）单盖玻片培养方法左图；凹载玻片支架右图：单盖玻片培养法操作图解1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封a为正确操作b错误操作盖玻片法再培养1、2、眼科刀切除生长晕3方型培养物切为两到四片4、5培养物漂洗6、7、再培养此方法易污染（二）双盖玻片悬滴培养法

双盖玻片图解：1、载体盖玻片2、带培养物盖玻片二、培养瓶培养方法20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶Earle设计了T-培养瓶用血浆固定组织块的培养方法图:卡氏瓶培养组织块1.消毒卡氏瓶2.火焰略烧瓶口3.取少量血浆加入瓶底4.再加等量胚胎浸出液5.接种组织块7.上盖8.消毒9加入培养液10.通气图:内放有孔透明纸的培养瓶培养a.一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解1.有孔透明纸2.组织块3.培养液旋转管培养法：与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。旋转管培养方法用具a.简易旋转鼓，可放入培养箱内b.带旋转鼓装置的培养箱c.培养用的旋转管1.示血浆的高度2.示接种组织间间距3.示加培养液4.示可放旋转鼓内培养d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用2.观察时用)不锈钢培养小室图A中央切面图B侧面图(mm)灌注小室及灌注系统示意图A.排液瓶B.受液瓶C.不锈钢灌注小室D.扁锥型小孔道E、F、J.2号注射针头G、H.塑料导管I玻璃导管K、L.14号注射针头(塞以棉花)五.培养板培养方法无菌条件下操作，培养过程：1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内3、给培养板各孔补加足够的培养液4、加盖，放入CO2培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于CO2培养箱中培养3-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）5、每隔2-3天换

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