一株拮抗香蕉枯萎病的链霉菌的分离和鉴定

一株拮抗香蕉枯萎病的链霉菌的分离和鉴定引言香蕉是世界上最重要的水果之一，因其口感、营养均衡及食用便捷等优势，被誉为“营养之王”，全球范围内均受到广泛的关注和重视。但香蕉生产中，香蕉枯萎病是最为严重的病害之一，它由一种名为革兰氏阴性的土传菌體Ralstoniasolanacearum引起。目前，对抗香蕉枯萎病常规的防治措施包括化学防治、生物防治、物理防治等，但总的来说，效果并不令人满意，因此寻找新的防治方法十分迫切。本研究通过从病株周围土壤中分离到了一株具有拮抗香蕉枯萎病菌活性的链霉菌，为了更好地探究其防治香蕉枯萎病的作用机理，进行了系统的生理生化及分子遗传学鉴定。本研究结果能够为香蕉产业的永续健康发展提供一定的借鉴。材料与方法1、实验材料本研究所采用的实验材料主要包括香蕉枯萎病病株、周围土壤、拮抗菌株等。2、微生物学方面（1）病株周围土壤样品的采集：采集香蕉枯萎病株周围30cm范围内且距离地表深度为5–20cm深度的土壤，共采集5个样品。（2）链霉菌的分离：取病株周围土壤5g，加入NaCl溶液中摇匀，取一定营养高的培养基刷在平板上，49℃恒温培养3天后分离链霉菌。（3）链霉菌的生理生化鉴定：对分离出的菌株进行发酵特征、芽孢形态、生长速度、酸碱度等一系列痕迹性特征的鉴定。（4）菌株存储：在25%的甘油溶液中储存链霉菌株，-80℃冰箱冷冻保存。3、分子生物学技术（1）链霉菌的DNA提取：通过菌株的酵母壁法进行DNA的提取。（2）链霉菌的16SrDNA茎环PCR扩增：按照已有的通用引物16SF(5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)和16SR(5’-GCTCGTTGCGGGACTTAAC-3’)进行PCR扩增，PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶上进行质量鉴定。（3）16SrDNA序列分析：将PCR扩增的16SrDNA序列进行测序，测序结果进行序列比对和系统演化分析。结果1、链霉菌的分离和鉴定结果本研究从香蕉枯萎病株周围土壤中分离到了一株菌株，并经过一系列分析鉴定，确认其为链霉菌。该菌株在SG、PDA、ISP2等营养原料较高的培养基上表现出较强的菌落生长能力，菌落直径可达2cm。初步生理生化特征鉴定表明，该菌株能够进行淀粉酶、卟啉氧化酶、过氧化氢酶活性等代谢反应。2、核酸序列分析结果本研究对菌株进行了16SrDNA基因的PCR扩增和测序，并对结果进行的生物信息学分析显示，所测序列与已知的链霉菌菌种同源性最高，与15种已知链霉菌菌种的同源性达到了96%以上。同时，构建了菌株与其他细菌菌种间的系统发生树，结果显示该菌株与在NCBI数据库中报道的链霉菌含有最高的相似性。讨论香蕉枯萎病目前仍然是困扰全球香蕉产业的一大难题，传统的化学防治仍然会对土壤和周边环境产生不可逆的危害，因此本研究探讨了利用微生物进行生物防治的可能性。在病株周围土壤中分离到的链霉菌株能够在体外产生抑制香蕉枯萎病的活性物质，证明了生物防治香蕉枯萎病的可能性。通过生理生化和分子生物学的鉴定，本研究确认了该菌株为链霉菌，并确定了链霉菌16SrDNA序列，这为进一步研究其抑菌机理、建立保护作物的微生物制剂提供了基础。结论本研究从香蕉枯萎病株周围土壤中分离到了一株由链霉菌组成的微生物，通过系统的生理生化