土壤中分解尿素的细菌的分离与计数配套新人教版选修课件

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课程标准测定某种微生物的数量。课标解读1.利用选择培养基分离细菌。2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。

(3)选择培养基：在微生物学中，将允许

种类的微生物生长，同时

和

其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。2．统计菌落数目 (1)常用方法：

法。 (2)统计依据：当样品的

足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。 (3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在

的平板，计数公式为

。特定抑制阻止稀释涂布平板稀释度活菌30～300每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M3．设置对照 (1)对照实验：是指除了

以外，其他条件都相同的实验。 (2)主要目的：排除实验组中

对实验结果的影响，提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，需以

培养基培养作为空白对照。被测试因素非测试因素牛肉膏蛋白胨[思维激活1]

上述的对照组培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)是否也需接种？如何确认所制备的选择培养基的确起到了选择作用？提示为确认培养基是否被杂菌污染时，对照组的牛肉膏蛋白胨培养基不需接种。欲确认所制备的选择培养基是否起到了选择作用，应同时对对照组的牛肉膏蛋白胨培养基进行接种——若对照组培养基中菌落种类明显复杂于实验组，则可确认选择培养基的确起到了选择作用。1．选择培养基的制作方法 (1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。2．结果分析与评价内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养物中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养物中混入其他杂菌选择培养基的筛选作用牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到三个或三个以上菌落数目在30～300的平板操作成功重复组的结果若选取同一种土样，统计结果应接近【巩固1】

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基______(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用______法。(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于____________________；使用____________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是________________________________________________________________________________________________。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？___________________________________________________。解析根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。答案(1)苯酚A稀释涂布平板(2)④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作(2)样品处理样品的

直接影响平板上生长的

，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在

之间，便于计数。(3)微生物的培养与观察将培养基平板放置于

温室中培养1～2d，每隔

统计一次

数目，最后选取数目

时的记录作为结果。(4)细菌的计数当菌落数目稳定时，取同一条件下的至少

个平板进行计数，求出

，并根据所对应的

计算出样品中细菌的数目。稀释程度菌落数目30～30030～37℃24h菌落稳定3平均值稀释度2．操作提示 (1)无菌操作 ①取土样的用具在使用前都需要

。 ②应在

旁称取土壤。并在

附近将土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 ③在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在

旁操作。 (2)做好标记 本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使用前就

。灭菌火焰火焰火焰做好标记3．课题延伸 细菌合成的

将尿素分解成

，使培养基的

增强。在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂培养细菌，若指示剂变

，可确定该种细菌能够

。脲酶氨碱性尿素酚红红分解尿素1．土壤中分解尿素的细菌的分离 (1)分离的原理 ①土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。 ②实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ③分离分解尿素的细菌的培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。(2)尿素细菌分离与计数的实验流程：土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数2．统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 ②方法：用计数板计数。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL，M代表稀释倍数。【例1】

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题。微生物的分离

(1)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。

琼脂15g尿素1g葡萄糖10gMgSO4·7H2O0.2gNa2HPO42.1gKH2PO41.4g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_______和_____，实验需要振荡培养，原因是______________。(3)转为固体培养基时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。(4)下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是________；需要消毒的是________。(填序号)(5)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有______。(填序号)①由于土样不同 ②由于培养基污染③由于操作失误 ④没有设置对照思维导图：深度剖析(1)培养基中加入尿素的目的是筛选尿素细菌。(2)尿素可为尿素细菌提供氮源，震荡可为目的菌株提供氧气。(3)在固体培养基中接种常用稀释涂布平板法和平板划线法。(4)操作器械需灭菌，操作者双手需消毒。(5)土样不同、培养基污染、操作失误均可能导致计数误差。答案(1)目的菌选择(2)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(3)稀释涂布平板(平板划线)(4)①和②③(5)①②③[思维拓展](1)利用选择培养基设计实验分离纯化微生物。①真菌：用含青霉素的培养基分离。②金黄色葡萄球菌：用含高浓度食盐水的培养基分离。③固氮微生物：用无氮培养基分离。④自养型微生物：用含无机碳源的培养基分离。⑤光合细菌：用含无机碳源的培养基在无氧而有光照的环境中分离。⑥厌氧型和兼性厌氧型微生物：用普通培养基在无氧条件下分离。⑦乳酸菌：用乳酸含量较高，pH较低的普通培养基分离。⑧假单胞杆菌：用石油作为唯一碳源的培养基分离。(2)微生物分离与计数中两种对照组的作用：①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目，进行对比得出结论。【例2】

下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，错误的是 ()。 A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48h D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数微生物的计数

思维导图：深度剖析确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数，D错；A是培养基的灭菌方法，B设置了一系列对照实验，C是细菌的培养方法，A、B、C三个选项均是正确的。答案D单击此处进入随堂达标检测旁栏思考题1．想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答案统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。2．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答案这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中，好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不相同。练习(教材P26