瑞济冷冻干燥生物羊膜特点与应用

瑞济冷冻干燥生物羊膜特点与应用第1页/共43页1940年,DeRotth将新鲜羊膜用于移植部分取得成功保存人羊膜治疗眼表疾病首先见于Kim等1995的年的报道。羊膜-理想的眼科生物材料第2页/共43页羊膜—理想的眼科生物材料JuanF.BatlleM.D.Amnioticmembraneshavebecomeanimportantsubstituteforconjunctivaltissuesinthemanagementofocularsurfacedisorders.Thehistologiccharacteristicsofthesemembranes,ourabilitytopreservethemwithminimalchallengetothehost’simmunesystem,anditseaseofpreparationandtransplantationhavebecomeatremendousassettotheclinicalophthalmologistandtotheanteriorsegmentsurgeon.Amnioticmembraneswererecentlyrediscoveredthroughtheeffortsandcollaborationofresearchersinthefieldofanteriorsegmentsurgeryfromdifferentpartsoftheworld.

第3页/共43页自2000年以来羊膜已成功应用于：睑球粘连、结膜囊缺失、翼状胬肉、角膜溃疡、化学灼伤和热烧伤、烫伤。逐步向青光眼青光眼等疾病的治疗领域扩展。国内对羊膜的认识与运用第4页/共43页存在的问题无标准化产品无权威性的质量标准法律保障--医患纠纷羊膜保存时间短，运输不方便不能随时满足临床要求潜在危险：肝炎、爱滋、梅毒、衣原体等病原体第5页/共43页羊膜的特性取材容易，使用方便，可在低温下保存。不含有HLA-A、B或DR抗原，因此，移植后几乎不发生免疫排斥反应。羊膜细胞能分泌多种抗体，多种溶菌酶和补体，具有抗病毒和杀菌作用与唇粘膜，鼻粘膜移植相比，移植后发生感染的风险较小。第6页/共43页羊膜的特性羊膜含有抑制细胞因子表达和调节角膜细胞凋亡的成分，可以避免炎性细胞，细胞因子诱发的角膜基质细胞和胶原纤维的过度增生以及新生血管的形成，抑制局部炎症反应，阻止新生血管和疤痕形成。羊膜中的基底膜含有IV、V型胶原和层粘连蛋白能分泌多种细胞因子，如碱性成纤维生长因子，肝细胞生长因子，转化生长因子等，在伤口愈合中起重要作用。羊膜具有较强的抗粘连性，对严重OSD所引起的睑球粘连与结膜穹窿缩窄十分有利。第7页/共43页羊膜的组织结构制备羊膜时，将绒毛膜去掉。合格的羊膜材料只包括单层上皮细胞，基底膜，无血管和基质成分（如成纤维细胞、胶原和其他非细胞成分）。羊膜光滑、无血管、神经及淋巴，具有一定弹性。正常羊膜厚约0.02-0.5，是人体中最厚的基底膜。第8页/共43页羊膜的组织结构上皮细胞层：由单层无纤毛立方上皮细胞组成基底层：位于上皮细胞下的网状组织致密层纤维母细胞层海绵层第9页/共43页羊膜的组织结构第10页/共43页羊膜的作用机制羊膜移植的作用机制主要有5个方面延长上皮细胞的生命，维持其克隆形成刺激上皮细胞的分化在置于含有成纤维细胞的结膜时能刺激杯状细胞的分化通过抗蛋白酶的活性，清除炎症细胞能抑制转化因子的信号传递和抑制正常成纤维细胞分化为肌成纤维细胞第11页/共43页羊膜在眼表重建中的作用基底膜为干细胞提供“肥沃的土壤”。其各种旦白成分能促进上皮分化，增生。增强旦白粘附性，在上皮创伤愈合中作用重大。羊膜含有的旦白酶抑制因子通过抑制旦白酶而发挥其抑炎作用。同时羊膜含有的抑制细胞因子表达和细胞调亡的成分，可避免炎症细胞和细胞因子诱发的角膜基质细胞和胶原纤维的过度增生，从而抑制局部炎症，促进表面愈合而不留瘢痕。第12页/共43页5个方面的临床效果加速上皮化维持正常上皮表型减轻炎症反应减轻血管化减少瘢痕形成等第13页/共43页瑞济生物羊膜按照严格的国家标准生产……第14页/共43页瑞济生物羊膜低温冷冻干燥技术钴60辐照灭菌技术羊膜细胞处于“休眠状态”延长其保存期

实现生物羊膜的产业化、标准化，解决生物羊膜制备的安全性和常温保存、运输的难题满足临床需要第15页/共43页保护液处理后预冻抽真空水分升华冻干羊膜对温度的控制压力的控制温度的控制时间的控制冷冻干燥工艺过程第16页/共43页羊膜冷冻干燥的概念尽可能的保存羊膜原有的生物学性能，使羊膜在冷冻的条件下进行真空干燥。冷冻干燥羊膜的质量要求保持羊膜原有的组织结构、原有的基本化学组成、适用于临床要求的组织韧性和生理pH值、含水量低适于常温长期保存。冷冻干燥的控制第17页/共43页１０万级净化车间生产环境第18页/共43页羊膜来源的安全控制取健康剖宫产妇的胎盘组织排除乙肝、丙肝、梅毒及获得性免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、衣原体等对孕妇进行跟踪检测，检测结果记入每个羊膜的生产记录档案第19页/共43页羊膜来源的安全控制对妊娠第三个月的妇女进行检测，了解其家族史情况，对符合要求的健康者跟踪服务。取羊膜第一步（初检）已跟踪孕妇在产前再次检测，各项检查结果阴性者，在其知情的情况下，剖腹产后取羊膜取羊膜第二步（复检）确认被采集的产妇在第三个月及产前各检测结果均是阴性后，再将羊膜进行加工制备。取羊膜第三步（核实）被采集产妇的详细资料，每片羊膜有安全的来源。取羊膜第四步（备案）第20页/共43页质量保证裁剪包装6种型号规格，或按客户要求特制单片、铝塑袋密封包装灭菌钴-60辐照灭菌：可降低羊膜的免疫原性；彻底杀灭可能存在的所有致病原，无污染；消除病毒潜伏期的危害。质检检测项目包括规格、外观、水份、拉力、酸碱度、菌检，合格品入库第21页/共43页质量保证辐照灭菌技术

国家药监局对辐照灭菌中针对HIV、HBV、HCV、梅毒等病毒杀灭的有效性进行了反复放射学与病毒学专家论证，确认了钴６０辐照生物羊膜可以达到高水平的病毒安全性。第22页/共43页钴60辐照灭菌权威论证专家病毒学专家－军事医学科学院微生物流行病研究所消毒研究室主任、研究员中国消毒学杂志主编张文福医学博士放射医学和辐射化学专家－苏州大学辐照研究所所长朱南康教授病毒学专家－中国科学院武汉病毒所所长胡志红研究员病毒学专家－江西医学院病毒学教研室主任郑民实教授第23页/共43页质量保证瑞济羊膜理化性能检测：

外观：清洁、透明、无杂质、无破损水份：水份＜10%缝合拉力：应不小于1.0g，5分钟酸碱度测定：羊膜浸出液与同批空白对照液之间，PH值之差不超过1.5第24页/共43页质量保证抽样检测标准按国家标准GB2828-1987逐批检查计数抽样程序及抽样表，对每批羊膜进行逐批检验，由质检部执行。按国家标准GB2829-1987周期检查计数抽样程序及抽样表，对羊膜进行型式检验（注册检验和周期检验），由国家指定的检验部门执行。产品质量检测标准按本企业制定的注册标准：YZB/国1059-2003进行检测，检测内容包括羊膜的物理性能、化学性能和生物学性能。第25页/共43页质量检测保证国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心检测

瑞济羊膜生物安全性评价（试验观察期为1～２周）无菌检查：按GB/T14233.2无菌检查法检验细胞毒性试验：按照GB/T16886.5中规定的方法皮肤过敏试验：按照GB/T16886.10中第六章的方法遗传性毒性试验：按GB/T16886.3进行AMES试验植入后局部反应：按照GB/T16886.6中第四章皮下组织植入试验方法进行短期植入试验第26页/共43页各项检测结果均合格国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心检验报告第27页/共43页瑞济冷冻干燥生物羊膜--与新鲜羊膜的比较第28页/共43页新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜的各层组织结构相同生物羊膜组织的透射电镜检测第29页/共43页生物羊膜组织的扫描电镜检测新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜均保存了上皮细胞层

上皮细胞上皮细胞第30页/共43页生物羊膜组织化学的检测（免疫组化试验）

胶原Ⅳ:ZyMed公司、鼠抗人单克隆抗体

冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜相比较，组织结构没有发生明显变化新鲜羊膜冷冻干燥羊膜胶原层胶原层上皮细胞上皮细胞第31页/共43页瑞济冷冻干燥生物羊膜保持了新鲜羊膜原有组织结构和原有的基本化学组成；具有适用于临床要求的组织韧性和生理pH值；含水量低适于常温长期保存；抗原性低而生物安全性高；无致病原，无污染，无毒副作用等。第32页/共43页对于临床应用的意义解决了生物羊膜制备的安全性和常温保存、运输的难题，满足临床应用和推广方便的要求实现生物羊膜的产业化和标准化为眼科医生在眼表重建和青光眼手术领域提供了有力武器。协助医生提高手术成功率和手术质量，造福患者。第33页/共43页临床试验经药监局审查批准的临床试验方案A组用新鲜羊膜B组用瑞济冷冻干燥辐照羊膜第34页/共43页临床试验

病种A组B组合计复发翼状胬肉383674

眼表烧伤11617

青光眼156

睑球粘连459Stevens-Johnson综合征112

角膜溃疡5813

合计6061121病种分布情况第35页/共43页临床试验临床试验结果组别显效有效无效合计

A1440660B1939361合计33799121统计学结果：校正卡方检验，Ｘ２＝188.012，Ｐ>0.05第36页/共43页临床试验结论“瑞济生物羊膜”应用于眼表创伤修复，疗效显著，使用方便。达到预期的研究目标“瑞济生物羊膜”——冷冻干燥羊膜的生物安全性、临床有效性和使用的方便性，均达到国际领先水平。第37页/共43页手术适应症各种原因造成的结膜和角膜缺损翼状胬肉切除后的结膜创面眼表化学伤、热灼伤睑球粘连和眼表肿瘤切除造成的结膜缺损青光眼手术：滤过泡修补术、巩膜瓣下植入术第38页/共43页新鲜羊膜与冷冻干燥羊膜的比较对比项目新鲜剥制羊膜冷冻干燥羊膜质量保障无统一标准制作、无保障按国家标准生产、有保障致病原污染存在不存在保存方式低温保存，储存不方便常温保存保存时间几天一年使用方式临时剥制，取材不便随时可使用第39页/共43页

第一个获得国家级生产批文的羊膜制品经过确定生产工艺制备的瑞济生物羊膜的理化性能、安全性以及临床试验等结果达到了国家食品药品监督管理局对医疗器械三类产品试产注册的要求。本企业已获得国家药监局生产羊膜正式