重医 临床免疫学检验 重点整理

填空免疫防御功能异常可导致（感染、免疫缺陷）疾病。抗原抗体反应的特点有（特异性、比例性、可逆性、阶段性）抗原抗体反应的温度一般以（15〜40°C）为宜，最适温度为（37°C）影响抗原抗体反应的环境因素主要有（电解质、pH、温度）某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在（4C）左右与红细胞结合最好，（20C）以上反而解离。抗原抗体的结合分子间的引力包括（静电引力、范德华引力、氢键引力和疏水作用力），其中作用最强的是（疏水作用力）间接凝集反应的类型包括（正向间接凝集、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应）四种类型。参与凝集反应中的抗原称为（凝集原），抗体称为（凝集素），常用的直接凝集试验有（玻片法、试管法、玻片法）在间接凝集反应中正向凝集反应是用（抗原）致敏载体以检测标本中相应的（抗体），而反向间接凝集反应是用（抗体）致敏载体以检测标本中相应（抗原）间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的（不完全抗体），可用于输血前的（交叉配血）试验。1.免疫沉淀反应是（可溶性抗原）与（相应抗体）的特异性结合棋盘格法（抗原）和（抗体）同时稀释，可一次完成（抗原）和（抗体）的滴定单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量（抗体）的（凝胶）内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成（沉淀环）。Maneini曲线适用于（大分子抗原）的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与（扩散环直径的平方）呈线性关系，常用（普通）坐标纸作图。Fahey曲线适用于（小分子抗原）的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，沉淀环直径与（抗原浓度的对数）呈线性关系，常用（半对数）坐标纸作图。双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示（抗体含量较高）；靠近抗体孔则指示（抗原含量较高）不出现沉淀线则表明（无对应的抗原和抗体）。免疫电泳是将（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的一种免疫化学分析技术。火箭免疫电泳是（电泳）与（单向免疫扩散）相结合的免疫技术。对流免疫电泳是（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的免疫技术。对流免疫电泳中，抗体流向负极，是因为（电泳）速度小（电渗）速度大。免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成（免疫复合物），使反应液出现（浊度），并可根据其推算出抗原或抗体的量。根据Rayleigh方程，散射比浊法中的散射光强度与入射光波长成（反）比，与粒子的浓度和体积成（正）比。速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的（最快时间段）的散射信号值，此时的散射信号最强，速率散射信号值最大。免疫胶乳浊度测定的原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀的胶乳颗粒其直径应稍（小于）入射光波长目前多用（200）nm的胶乳颗粒。免疫浊度测定的基本原则之一是反应体系中必须始终保持（抗体）过量。凝胶内沉淀试验包括（单向扩散试验、双向扩散试验）；抗原抗体最适比的基本测定方法为（抗原稀释法、抗体稀释法）。1.标记免疫技术的示踪物有（酶、放射性核素、荧光素、化学或生物发光剂、胶体金）放射免疫技术可分为（放射免疫分析RIA、免疫放射分析IRMA）两种基本类型。采用125-I制备标记物的基本原理是以放射性碘原子置换被标记物分子中（酪胺酸或酪胺残基）或（组胺残基）上的氢原子。1.荧光免疫技术的主要类型包括（荧光抗体染色技术、荧光免疫测定技术）。荧光物质有（荧光素、其他荧光素物质）。荧光抗体染色技术可分为（荧光免疫显微技术、流式荧光免疫技术）。镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有（多羧基酸类螯合剂、B-二酮体类螯合剂、BCPDA、菲洛林）荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物而分为（均相、非均相）两种类型。非均相荧光免疫测定法包括（时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定）。均相荧光免疫测定法包括（荧光偏振免疫测、底物标记荧光免疫测定）。荧光素标记抗体的方法有（搅拌标记、透析标记法）。1.膜载体酶免疫测定技术的类型主要有（斑点-ELISA免疫渗滤试验、免疫层析试验、免疫印迹法）酶免疫组织化学技术常用的酶有（HRP、ALP、B-半乳糖苷酶（B-Gal））。ELISA检测抗原的方法主要有（双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法）；检测抗体的方法主要有（间接法、双抗原夹心法、竞争法、捕获法）。ELISA中三种必要试剂是（固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体、酶的反应底物。制备酶结合物常用的方法有（戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法）。在稀释液和洗涤液中加入（吐温一20）,可以去除非特异性吸附。均相酶免疫测定技术的类型主要有（酶增强免疫测定技术、克隆酶供体免疫分析技术）。非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有（酶桥法、PAP法、双桥PAP法、APAAP法）。（SDS、蛋白质转运、酶免疫测定）三项技术结合而成形成免疫印迹法。常用于HRP标记抗原/抗体的方法：（戊二醛交联法、改良过碘酸钠法）。化学发光免疫技术根据发光方式不同分为（化学发光酶免疫分析、化学发光免疫分析、点化学发光免疫分析）。根据形成激发态分子的激发能可将发光分为三种类型（光照发光、生物发光、化学发光）发光剂分为（荧光素、生物发光剂、化学发光剂）三种。HRP常用的发光底物为（鲁米诺）；ALP常用的发光底物为（AMPPD、4-MUP）。发光酶免疫分析的技术要点包括（抗原抗体反应、标记物游离部分和结合部分分离、酶促发光反应及检测）三个过程。发光酶免疫分析常用的标记酶有（ALP、HRP）,根据酶促反应底物不同，发光酶免疫分析可分为（荧光酶免疫分析、化学发光酶免疫分析）电化学发光免疫分析是（电化学、免疫测定）相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般化学发光不同，是一种在电极表面由（电化学）引发的特异性化学发光反应，实际上包括了（电化学、化学发光）两个过程。ECLIA通过（电）启动发光反应，而CLIA是通过（化合物混合）启动发光反应。不受位阻效应影响，更易发挥生物素活性作用的是（BCNHS）。用于标记蛋白质醛基的，适用范围较BHZ宽的活化生物素是（BCHZ）。在一定波长的光照射下，光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌吟N7位氨基结合的是（光生物素）。生物素化蛋白质衍生物有二类，一种是（生物素化的大分子生物活性物质），另一种是（标记材料结合生物素后制成的标记物）。用于亲和素标记的物质中，最常用的是（酶、异硫氰酸荧光素（FITC）、胶体金）。用丙酮做固定剂的抗原是（免疫球蛋白）；用1%聚甲醛做固定剂的抗原是（激素）；用10%甲醛做固定剂的抗原是（类脂质）；用95%乙醇做固定剂的抗原是（蛋白质）；用四氯化磺做固定剂的抗原是（酶）。免疫染色对特殊标本的进一步处理常用（冰冻切片、石蜡切片）法。免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是（胞质型、细胞核型、细胞膜表面型）。酶免疫组化技术中最常用的酶有（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶）。免疫电镜标本的制备主要有（非包埋法免疫染、包埋前免疫染色、包埋后免疫染色）免疫组化中最常用的制片方法是（蛋白酶消化法、非特异吸附法）。金免疫技术主要有（金免疫组织化学染色技术）和（金免疫测定技术），前者包括（免疫金（银）光镜染色技术、免疫金电镜染色技术）；后者包括（斑点金免疫渗滤试验、斑点金免疫层析试验）等。免疫金是指（胶体金与抗原（抗体））的结合物，在免疫组织化学染色技术中，习惯上称之为（金探针）斑点金免疫层析试验方法学类型有（双抗体夹心法、竞争法、间接法）。渗滤装置是斑点金免疫渗滤试验试剂盒中主要组成部分之一，丑塑料小盒、吸水垫料）和（点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片）三部分组成。斑点金免疫渗滤试验试剂盒由（渗滤装置、胶体金标记物、洗涤液）组成。用于电镜的免疫金法可分为（包埋前染色、包埋后染色）两大类。免疫金电镜染色技术包括（标本包埋、免疫组化染色）两个主要步骤。为了消除待测血清标本中（非特异性IgG）的干扰，斑点金间接免疫层析法测抗体常设计成（反流免疫层析法）PBMCs包括（淋巴细胞）和（单核细胞）。在反相溶血空斑试验中每一个空斑代表一个（分泌Ig的细胞）。B细胞表面特异的标志是（SmIg）。常用的测定淋巴细胞活力的方法是（台盼蓝染色法）。淋巴细胞转化情况的判定方法有（形态学方法、3H—TdR掺入法、MTT比色法）。淋巴细胞转化试验应用的同位素是（3-H），细胞毒试验应用的同位素是（51-Cr）分离外周血白细胞常用的方法是（自然沉降法）和（聚合物加速沉降法）。去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有（无菌蒸馏水低渗裂解法、0.83%氯化铵处理法）。去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有（黏附去除法、羰基铁粉吞噬去除法）。检测T细胞数量的花环技术包括（E花环试验、葡萄球菌花环法、抗体致敏红细胞花环法）；检测B细胞数量的花环技术主要有（Ea花环试验、Et花环试验）。淋巴细胞的密度为（1.077±0.001）。外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为（血清、PBMCs、粒细胞、红细胞）层。活化的TH1细胞产生的细胞因子主要有（IL-2、IFN、IL-12），而TH2细胞主要产生的细胞因子为（IL-4、IL-5、IL-10）。细胞因子常用的检测法包括（生物学检测法、免疫学检测法、分子生物学检测法）。ELISA测定法测定细胞因子常用（竞争法）。1.补体参与的反应试验类型包括（免疫溶血试验、补体结合试验、补体依赖的细胞毒验、免疫黏附试验）.参与补体结合试验的试剂可分为（指示系统、反应系统）两个系统。m型变态反应疾病患者的血清中补体水平（降低）。补体的最佳保存温度是（一20r以下），在（56°C）下30min即被灭活。CH50试验中有（绵羊红细胞、溶血素、人血清）参与反应。免疫球蛋白根据重链的不同可分为（IgM、IgG、IgA、IgE、IgD）免疫固定电泳的特点是（周期短、敏感性高、分辨清晰、结果易于分析）Ig中k/入比率正常范围是（1.2〜2.4）肿瘤抗原可分为（肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原）两类。肿瘤标志物检测的临床意义，归纳起来有（早期普查、肿瘤诊断、监测病情）等肿瘤标志物的检测对临床某些肿瘤有重要辅助诊断价值，如：AFP可辅助诊断（肝癌），CEA可辅助诊断（结肠癌），PSA可辅助诊断（前列腺癌）。细胞免疫是抗肿瘤免疫的重要机制，参与抗肿瘤免疫的细胞主要有（T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞）等。宿主抗移植物反应根据临床出现症状情况一般分为（超急性排斥、急性排斥、慢性排斥）三类。（HLA）是不同个体间进行器官或组织移植时发生排斥反应的重要成分。HLA三类分子中，（I、II类）分子是能发生移植排斥反应的首要抗原尤其是（HLA-DR）位点。HLA-A、B、C和HLA-DQ、DR抗原采用（补体依赖的微量细胞毒）试验检测。简答/问答抗原抗体反应的原理：1.Ag、Ab能特异性结合：（内因）2.Ag、Ab结合的动力：（外因）静电引力（又称库仑引力）范得华力（又称电子云力）氢键、疏水作用力。抗原抗体反应的特点：2.特异性、交叉反应（cross-reaction）2.最适比例3.可逆性影响抗原抗体反应的主要因素自身因素：Ag：与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关；Ab：与Ab的来源有关：是R型抗体或H型抗体；与Ab的特异性、亲合性有关；与Ab的浓度有关。外界环境条件：1.电解质2.PH3.温度抗原抗体反应分哪些种类？沉淀反应；凝集反应；补体参与的溶血反应、补体结合试验、中和试验、三大标记技术什么是交叉反应，有无特异性，为什么？在临床上有何意义？交叉反应cross-reaction）抗体对具有相同或相似抗原表位的抗原发生的反应称为交叉反应。交叉反应并没有违背Ag、Ab特异性结合的原则，其产生的先决条件是存在共同Ag表位。交叉反应的意义：1.免疫学诊断：（利用交叉反应）eg外斐氏反应等:利用变形杆菌0X19、0X2、OXk作Ag检查血清中Ab,诊断斑疹伤寒（立克次氏体感染所致）2.可造成免疫病理损害：eg链球菌感染后易导致肾小球肾炎，其原因为链球菌与人体肾小球基底膜有共同的Ag表位所致。双扩、单扩、对流免疫电泳、免疫电泳实验的原理，方法，用途。凝胶扩散试验原理：可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下，在琼脂基质中扩散，当两者相遇，比例恰当时结合，出现肉眼可见的沉淀线。双扩，方法：制备琼脂板、打孔、加样、扩散、用途：1.已知Ag或Ab测未知Ab或Ag:双孔型2.抗原性质分析：三角孔型3.测Ag有效稀释度：梅花孔型。单扩：方法：已知抗体+琼脂混合制板、打孔，在琼脂板小孔中加梯度抗原，抗原向四周扩散形成沉淀环，抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系绘制标准曲，从标准曲线上查出并计算待测标本含量。用途：定量测定可测IgG、IgA、IgM、C3等含量。对流免疫电泳（counter-immunoelectrophoresis）原理：定向加速的免疫双扩（双扩+电场，使抗原、抗体相对泳动）方法：抗原、抗体分别在琼脂板上不同孔内，抗原在负极端，抗体在正极端，电泳。电压：4〜6v/cm（琼脂长度）电泳时间：45分钟〜1小时。用途用于HBsAg、AFP等检测。免疫电泳（immunoelectrophoresis）原理：区带电泳+双扩结合。方法：1.Ag电泳分出区带（当时看不到）2.Ag、Ab免疫双扩。用途：常用于分析复杂Ag的组分。（如人全血清组分的分析）影响电泳的因素有哪些？1.与溶液的pH有关：常用pH8〜9,蛋白质带负电2.与溶液离子强度有关：愈高，泳动慢，一般0.02〜0.2M3.与电场强度有关：愈高，愈快，一般4〜6v/cm（琼脂长），约40v左右4.电渗作用的影响：电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象。电渗方向与电泳方向相反。Ab沉淀素（precipitin）。沉淀反应稀释ag，凝集反应稀释ab。Ag凝集原agglutinogenAb凝集素agglutinin玻片凝集试验和试管凝集试验的区别玻片法用已知抗体检测未知抗原。定性试验。用途：ABO血型鉴定、菌种鉴定。试管法用已知抗原测未知抗体的效价。属半定量试验。反向间接凝集试验、间接凝集抑制试验的原理及实例：反向间接（血、胶乳）凝集试验。原理：将已知抗体吸附于载体上，检测未知抗原。如：反向间接血凝检测HBsAg、AFP等间接凝集抑制试验原理：待测样本（可溶性Ag?）+已知Ab，反应一段时间后，+已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性Ag），观察是否有凝集现象。不凝集为阳性，凝集为阴性。如：用胶乳凝集抑制试验检测小便中绒毛膜促性腺激素（HCG）协同凝集试验的原理原理:实质为反向间接凝集反应葡萄球菌A蛋白（StaphylococcusproteinA,SPA）能非特异地与IgG的Fc段结合，当与特异性抗原相遇时，IgG的Fab段与抗原结合，出现金葡菌的凝集现象（属特殊间接凝集试验）比较沉淀试验和凝集试验的异同抗原性质：可溶性Ag、颗粒性Ag。稀释对象：抗原、抗体。结果现象：沉淀现象、凝集现象。敏感性：低、高。免疫血清制备的主要程序。（一）动物的选择：1.常用动物：哺乳类较多：马、羊、猪、猴、兔豚鼠等；禽类：鸡。2.选择原则：免疫的Ag与动物的种类要求越远越好（即免疫原性好）；与免疫血清的量有关：所需量大，用马、羊、猴等大动物；所需量小，用兔、豚鼠等小动物动物的个体状态：雄性、适龄、健康、无感染；其它：根据实验的特殊要求。（二）抗原的条件：具有良好的抗原决定簇（表位）：易被LC识别而产生Ab；具有可靠的纯度；足够大的分子量及相对复杂的空间结构；注射量：严格掌握。宁可小，一般用25pg/kg动物；量大可出现免疫抑制佐剂概念、作用机理、福氏不完全浣全佐剂的组成。佐剂（adjuvant）:同Ag一起或预先注入机体，能增强机体对该Ag的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。福氏不完全佐剂（FIA）：组成：羊毛脂+石腊油，二者比例为4：1.福氏完全佐剂（FCA）：组成：羊毛脂+石腊油+卡介苗分离提纯免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？1盐析法:在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。2离子交换层析法:原理利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。3凝胶过滤法:凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。4亲和层析法:利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合在柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液pH、离子强度，使Ab解脱下来。免疫标记技术的原理用可以微量检测的标记物（示踪物质）标记抗原或抗体，作为试剂，与相应抗体或抗原结合反应后，测定抗原抗体复合物中的标记物，从而推断所测抗体或抗原有无及量的多少免疫荧光技术中最常用的荧光素是什么？1.异硫氰酸荧光黄（Fluoresceinisothiocyanate,FITC）可发出黄绿色荧光2.四乙基罗丹明（rhodamine,RB20）发出橘红色荧光3.四甲基异硫氰酸罗丹明（tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC）发出橙红色荧光免疫荧光显微染色的各种方法及优缺点1.直接法:快、直接、干扰因素少;用于检测抗原;每检测一种抗原要标记一种荧光抗体，较麻烦。2.间接法：优点：制备一种荧光抗体（抗抗体）可用于多种Ab检测；灵敏度高。3.补体法：灵敏度高，制备一种荧光抗补体用于多种检测；干扰因素多，补体不稳定，少用。4.双标记法。免疫荧光显微技术优缺点优点：1.特异性、敏感性高2.快速3.可定位4.既可测Ag又可测Ab。缺点：1.需要荧光显微镜2.有非特异荧光干扰3.定性测定、判断结果不客观4.片子难保存（荧光猝灭）ELISA的原理、方法（以间接法测抗体和双抗夹心法为例）及影响因素。原理：将酶分子与Ab或Ag连接成一酶结合物（酶标记物），当它与固相载体中相应Ag或Ab相遇，形成酶标记的AgAb复合物，加入底物，酶催化底物，生成有色产物，根据颜色深浅可测出溶液中Ag或Ab的量。双抗体夹心法步骤：包被已知Ab-洗涤-加待测标本（测Ag?）-洗涤-加酶标Ab-洗涤-加底物-加终止液-观察结果。间接法：步骤：包被已知Ag+待测标本（Ab?）-反应一段时间后，洗涤-加酶标抗抗体（酶标羊抗人IgG）-洗涤-加底物-加终止液，观察结果。ELISA试验的影响因素（一）固相载体：酶标板要求：吸附性能好、空白值低、透明度高，板批间、孔间性能相近。（二）抗原、抗体Ag:需纯化Ab：需效价高、亲和力强、纯化（三）试验条件1.包被：一般用pH9.6CB（carbonatebuffer），0.05M,有利于蛋白质吸附。包被浓度：0.1〜100g/ml，一般常用10g/ml包被时间、温度：4°C过夜或37°C1-3h包被量：100ul封闭：用0.1〜5%牛血清白蛋白缓冲液浸泡0.5小时2.抗原抗体反应的条件。（1）微碱性有利于抗原抗体结合，故用pH7.4PBS（phosphatebuffersaline）洗涤（2）去污剂有利于AgAb形成，洗液中加0.05%Tween-20（3）Ag、Ab反应时间、温度：一般37C、40〜50分钟3.洗涤用PH7.2-7.4PBS,规一化，每次浸泡1~2分钟，抛干,共洗涤3~4次4.酶促反应条件温度37C时间10-20分pH5.5底物量一致5.排除干扰：多设对照。ELISA试验应设哪些对照，为什么？阳性对照同标本一样颜色深；阴性对照同标本一样颜色浅or无色；酶结合物对照加酶步加入无色；底物对照加底物步加入无色；空白对照只加终止液无色。判断ELISA试验结果的方法。（一）肉眼判定与阳性、阴性对照颜色比较：1.若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性；3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为弱阳性。（二）酶标光度仪检测A492值（吸光率）：比色法1.与阳性、阴性对照测定值比较2.P/N比值：大于2.0为阳性，小于2.0为阴性P:positive（待测吸光度值）N:negative单克隆抗体概念由一个B细胞克隆产生的识别单一抗原表位的同源抗体。杂交瘤技术制备单抗的原理及简要步骤能产生抗体的小鼠B（浆）细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交能生成分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。1.制备能产生单抗的杂交瘤细胞2.克隆化杂交瘤细胞3.筛选杂交瘤细胞4.扩大培养单克隆杂交瘤细胞5.收集单抗并鉴定6.纯化单抗HAT培养基的作用（次黄嘌吟、氨基蝶吟、胸腺嘧啶）：氨基蝶吟是抗代谢的药物，能阻断内源性合成DNA（合成DNA的主要途径）。选出杂交瘤细胞。人源单克隆抗体概念：单克隆抗体为人IgG。制备目的：用于人。基因工程抗体、嵌合抗体概念，嵌合抗体优点基因工程抗体：在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、拼接或修饰，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达而产生的抗体（单克隆抗体）。嵌合抗体：用DNA重组技术将鼠源单抗基因的可变区（V区）基因与产生人Ig的恒定区（C区）基因相连接，构成嵌合基因，导入受体细胞（骨髓瘤细胞），表达出嵌合抗体。a.免疫原性低，有利于用于人体b.在人体内半衰期较鼠单抗长c.在人体内生物学作用（如CDC、ADCC）较鼠单抗强d.与人/人杂交瘤比，体外传代更稳定人体免疫功能包括哪些组成部分一.非特异性免疫应答1.皮肤黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质2.吞噬细胞的吞噬作用3.NK（naturekiller）细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用4.血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶。二特异性免疫应答细胞免疫：由TLC主导完成，其效应物质是致敏TLc（CTL/Th1）体液免疫：由BLC主导完成，其效应物质是Ab实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常用哪些试验，这些试验的原理如何？正常值应为多少？一.T细胞的计数（T细胞表面标志的检测）（一）特异性抗原的检测T细胞表面有一些特异的CD抗原，根据这些不同的CD抗原可鉴定不同的T细胞群体1.免疫荧光法：用荧光素标记的单抗作为试剂染色淋巴细胞，计算出染上荧光的淋巴细胞百分率2.免疫细胞化学法。（二）T细胞特异性受体（E受体）的检测E花环形成试验（ErythrocyteRosetteformingtest）原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（SRBC）受体（CD2），当T淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。Et正常值60%〜80%Ea正常值20%〜30%二.T细胞功能的检测（一）淋巴细胞转化试验1.原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋巴母细胞。（1）形态学检测法正常值60%〜80%。（2）同位素掺入法（3H-TdR掺入法）原理:T细胞受PHA刺激后，细胞进入增殖周期发生有丝分裂合成DNA。试验中当细胞进入S期时，在培养液中加入3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），细胞摄入，合成DNA,据掺入细胞内的同位素量，可推测细胞增殖活跃程度，从而判断淋巴细胞转化的程度。（3）MTT比色法（二）相关的细胞因子的检测（三）淋巴细胞的细胞毒性检测1.形态学方法2.同位素法：常用51Cr释放试验原理：用51Cr标记靶细胞（一般为肿瘤细胞），将它与待测淋巴细胞（效应CTL细胞）一起培养，效应细胞破坏靶细胞，51Cr释放出来，测定其51Cr数量，便可推知效应细胞的杀伤能力。特异溶解百分率大于50%为阳性。二、细胞免疫功能体内检测法（一）W型超敏反应皮试原理：W型超敏反应的本质是细胞免疫，所以W型超敏反应如为阳性，可反映细胞免疫功能好。阳性（直径＞0.5cm）：曾感染过结核菌，细胞免疫功能好。阴性（直径＜0.5cm）:细胞免疫功能差或从未感染过结核菌。强阳性（直径〉2.5cm）:表明现处于结核的活动期。三.B细胞数量的检测（一）B细胞表面识别抗原受体（BCR）（SmIg,SurfacemembraneIg）的检测。正常值：15%~25%。（二）B细胞表面抗原的检测。B细胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20，用抗CD20的单抗（免疫荧光法、酶免疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为B淋巴细胞，约占总淋巴细胞的10%〜15%。四.B细胞功能的检测（一）血清中Ig的测定人的体液免疫功能正常（B细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白（二）血型抗体效价的测定反映体内IgM水平正常6月婴儿抗A>1:8,或抗B>1:4;1岁后抗A>1:16，或抗B>1:8如3岁以上抗A或抗B效价仍<1:4，表示IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激机体后抗体应答反应（体内试验）将抗原注射到体内，一段时间后检测相应抗体效价，如抗体效价低，说明机体体液免疫功能差如用三联伤寒菌苗0.25ml注射，每周1次，连续3次，抗H应为1：160，若低，表示体液免疫应答功能差。补体的定义、组成及性质complement:补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未激活状态。补体的特性：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等。组成：1.补体的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、C1r、C1s,共9种成分11种蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3的含量最高；2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.补体受体；如C1qR、C3aR等；CH50实验的原理、正常值及意义原理：组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；CH50（U/ml）=1/血清用量X稀释倍数。总补体活性参考范围：50—100U/ml。补体检测的临床意义：1.补体量f:多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿；2.补体量I：见于补体消耗f：体内有Ag、Ab反应，如SLE、RA等；补体合成I：肝脏疾患；补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史补体结合实验的原理、结果判断及评价原理：补体可与任何一组AgAb复合物结合；一旦与某一复合物结合后，便不再与另一复合物结合。结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag；溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag。优点：该试验既可测Ag、又可测Ab；Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广；可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测（实际上是测Ag）；比较敏感（0.05^g/ml）、特异；结果判断明显：通过有无溶血来观察，无需特殊仪器检测。缺点:参与反应的物质多，影响因素也多；（反应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血素）；在正式试验前需要找出几种物质间最恰当的比例，比较复杂。免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因含义：immunecomplex，它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及WHO推荐的检测方法标准品是AHG一热聚合人IgG（不是IC）。IC检测的有关技术问题：到目前为止，所有检测IC的试验，还没有另人满意的标准化措施;在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。WHO推荐的检测方法：C1q结合试验、胶固素试验、类风湿因子（RF）试验、Raji细胞试验AID的基本特征及常见的AID有哪些？诱因可有可无。有一定的遗传倾向。女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T淋巴细胞。一些自身抗体在自身免疫病中呈现交叉重叠现象:即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种自身抗体，而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明显。病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）III型；类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）III型；自身免疫性溶血性贫血（autoimmunehemolyticanemia,AIHA）II型；重症肌无力（myastheniagravis,MG）II型。ANA的定义及ANAs的组成抗核抗体（antinuclearantibody,ANA）原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。ANA所针对的靶抗原由细胞核扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。抗核抗体谱（antinuclearantibodies,ANAs）抗DNA抗体：抗dsDNA>^ssDNA抗体抗组蛋白抗体（AHA）：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗体：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等抗非组蛋白抗体:抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖细胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗PL-12、抗着丝点抗体等抗核仁抗体：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗细胞其它成分抗体：抗高尔基体、抗中心体、抗线粒体、抗肌动蛋白、抗核层蛋白等各种AID检测时的代表性自身抗体有哪些？抗dsDNA抗体对SLE有较高特异性，70-90%活动性SLE患者该抗体阳性，是SLE的诊断标准之一。AHA在药物性狼疮患者中阳性率达90-100%，而SLE病人阳性率仅有20-35%，类风湿性关节炎病人为36%。抗Sm抗体：抗Sm抗体是SLE的特异性标志，疾病特异度达99%，为提高SLE的诊断准确率，可将抗Sm抗体和抗dsDNA抗体同时检测。抗SS-A、SS-B抗体：抗SS-A和抗SS-B抗体并存是干燥综合症的特异标志。核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又称u1RNP。抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）阳性率为95%以上，是MCTD的标志抗体。抗Scl-70是进行性全身性硬化症（PSS）的标志抗体，阳性率为50-64%。抗Jo-1抗体对肌炎和间质性肺纤维化有高度特异性，抗体的效价与疾病的活动性相关。原发性胆汁性肝硬化（PBC）时AMA阳性率可达90%以上。AMA是PBC的血清学指标。在原发性免疫缺陷病中哪一种发生最多？原发性体液免疫缺陷病（占原发性ID的50〜70%），如婴儿性联丙球蛋白缺乏症。怀疑体液免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？1.过筛试验（1）血清蛋白电泳丙球定量（2）血型抗体效价测定（反映IgM水平）正常（3）血清抗链球菌溶血素抗体的测定（抗0）的测定一反应IgG水平（4）骨髓检查2,确诊试验（1）血清免疫球蛋白（G、M、A）测定（2）抗原刺激后抗体应答反应3）B细胞计数（4）T细胞亚群测定怀疑细胞免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？过筛试验（1）淋巴细胞绝对值测定（2）迟发型超敏反应皮试（3）胸腺X线检查。确诊试验（1）淋巴结活检（2）T淋巴细胞计数（3）T细胞功能试验I、W型超敏反应皮试的原理1当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特异IgE高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质：如组织胺、白三烯、激肽等。在20-30分钟内局部皮肤出现红晕、红斑、风团以及搔痒感，数小时后消失。出现此现象者判断为皮试阳性，即对该变应原过敏;未出现红晕、红斑、风团者为阴性，即对该变应原不过敏。4用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的T细胞CD4+Th1再次遇到相应抗原后，释放出大量细胞因子，如IL-2、IFN-Y、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用；（2）吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；（3）促进T细胞增生和分泌细胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反应。比较I、W型超敏反应皮试（抗原、时间、结果、意义）抗原：体液免疫细胞免疫；时间：15-25min48-72h；结果：风团和红晕反应，红肿、硬结等局部炎症反应；意义：寻找变应原、预防药物或疫苗过敏，寻找变应原、评价机体细胞免疫功能状态、用于传染病的诊断。掌握HLA-I、II类分子的结构、分布及意义。HLA-I类分子由一条a链和一条B链组成，a链的N端胞外区分为a1、a2、a3三个结构区，其中a1、a2构成抗原结合槽，与处理后的抗原肽结合形成MHC-抗原肽复合体°HLA-I类分子分布在所有有核细胞膜上。功能：识别和提呈内源性抗原